Somite.

Présentation au sujet: "Somite."— Transcription de la présentation:

1 Somite

2 Prolifération Test d’incorporation du BrdU
Marquage de la Phosphohistone H3  La prolifération n’est pas affectée Comptage  accumulation due à un défaut de migration

3 Apoptose Marquage Caspase 3 activée E10.5 Lèvre ventrale DM

4 Apoptose E12.5 Cellules redirigées ventralement

5 Expression des marqueurs myogéniques primordiaux
Pax3  Met  Lbx

6 Expression de Pax3 Hybridation in situ E10.5 Caudal: correct
Perturbations en allant vers le pôle antérieur Pas de délamination dans le limb bud

7 Expression de Pax3 Niveau: bourgeon membre postérieur
Niveau: bourgeon membre antérieur Pas de délamination + aggravation du phénotype Perte expression dans les lèvres dorsales et ventrales

8 Pax3 est régulé par Six1-4 dans la lèvre ventrale du dermomyotome
Bourgeon membre postérieur Perte expression Dorsale et Ventrale Expression réduite à lèvre caudale Pax3 est régulé par Six1-4 dans la lèvre ventrale du dermomyotome

9 Expression de Met Caudal OK Défauts en allant vers le pôle antérieur
Perte de l’expression épaxiale Expression ectodermique

10 Régulation de Met par Six1 et 4, indépendamment de Pax3
Faible expression Post dans le limb bud alors que Pax3 toujours présent Expression réduite dans le dermomyotome Pas d’expression dans le Ant limb bud Régulation de Met par Six1 et 4, indépendamment de Pax3

11 Expression de Lbx1 Perte d’expression : - chorde hypoglossale
- bourgeon de membre antérieur

12 Lbx1 Expression faible:
- quelques somites au niveau du bourgeon de membre postérieur

13 Bandshift Test de retard sur gel Mise en évidence des interactions
ADN-protéines

14 Bandshift Interaction entre Six1 et le promoteur de lbx1
Interaction entre Six1, Eya1 et le promoteur de lbx1  Régulation directe?

15 Expression de Pax7 Peu de différences
Baisse d’expression à hauteur du bourgeon de membre antérieur

16 Localisation de la protéine Pax3
E10.5 , dermomyotome Immunofluorescence Région caudale Co-expression Six1 et Pax3 Phénotype normal

17 Localisation de la protéine Pax3
Bourgeon membre postérieur, somites caudales Co-expression dans la région qui ne migre pas

18 Localisation de la protéine Pax3
Membre postérieur, somites rostrales Les protéines ne co-localisent plus Perte d’expression de Pax3 antérieurement

19 Localisation de la protéine Pax3
Membre antérieur Mauvaise localisation de Pax3, désorganisation , pas d’entrée dans le limb bud

20  Perte d’identité des cellules sans Pax3 et migration anormale
Laminine:  cellules à destinée musculaire En présence de Pax3, expression de laminine normale Myotome organisé En absence de Pax3, myotome désorganisé  Perte d’identité des cellules sans Pax3 et migration anormale

21 Gènes MRFs Myf5, MyoD1, Myogénine, Mrf4: gènes de détermination myogénique = facteurs de transcription de la famille Mrf Exprimés dans le myotome, avant la différenciation des cellules

22 Gènes MRFs Diminution expression Myf5 Diminution expression myogénine

23 Gènes MRFs Diminution expression MyoD Disparition Mrf4
 Les protéines Six régulent les gènes mrfs

24 Six et FGFs Baisse d’expression de Fgf6 et du récepteur à Fgf4

25 Six et FGFs Scleraxis sous le contrôle de Fgf
Formation des vertèbres et des cotes Baisse d’expression  signalling de Fgf est altéré.

26 Conclusion/Discussion
Protéines Six contrôlent: Pax3 dans la lèvre ventrale la délamination et la migration des précurseurs myogéniques hypaxiaux En absence de Pax3, perte d’identité cellulaire, mauvaise migration et la mort pas apoptose Semblent contrôler directement Met, indépendamment de Pax3 directement Lbx1 Absence de Six entraîne une baisse d’expression: - des Mrfs - des Fgfs Fonctions partagées entre Six1 et Six4 Somites rostrales plus affectées que caudales  différents pathways myogéniques

27 Conclusion/Discussion