Le dosage de l’EPO lors du contrôle du dopage L’application de l’électrophorèse.

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1 Le dosage de l’EPO lors du contrôle du dopage L’application de l’électrophorèse

2 EPO / Une hormone peptidique / 166 acides aminés et 3 chaînes glycilisées / 34’000 Daltons

3 Les effets de l’EPO / Accélérer la prolifération des CFU-E / Accroître leur différenciations en cellule érythroblastique / Diminuer le temps de transit médullaire / Favoriser la sortie des réticulocytes de la moelle / Peut-être accroître, en cas d’hypoxie, le volume total des érythroblastes espaces graisseux, puis aux dépense du tissu médullaire non myélo / Accélérer la prolifération des CFU-E / Accroître leur différenciations en cellule érythroblastique / Diminuer le temps de transit médullaire / Favoriser la sortie des réticulocytes de la moelle / Peut-être accroître, en cas d’hypoxie, le volume total des érythroblastes espaces graisseux, puis aux dépense du tissu médullaire non myélo

4 Sur le plan sportif / Pour augmenter leur capacité quand ils font du sport,ils s’injectent l’EPO pour améliorer leur niveau du globule rouge

5 La détection de l’EPO / Centrifugation du sang - qualitative / Électrophorèse capillaire de zone - quantitative / Centrifugation du sang - qualitative / Électrophorèse capillaire de zone - quantitative

6 La centrifugation du sang Le niveau normal de l’EPO - chez les hommes: 42% - 54% - Chez les femmes: 37% - 44%

7 La limite de cette technique / L’apparition du nouveau produit : EPO génétique / Indifférent avec l’EPO naturel avec cette méthode / L’apparition du nouveau produit : EPO génétique / Indifférent avec l’EPO naturel avec cette méthode

8 La méthode de l’électrophorèse / Électrophorèse générale / Électrophorèse capillaire de zone

9 Quelques caractéristiques de l’appareillage / Un capillaire de silice de diamètre 50µm / Un voltage élevé: 15 - 30kv / Détecté par l’absorption de l’UV, fluorimètrie, conducmètrie / Volume d’injection est très faible: quelques nanolitre / Un capillaire de silice de diamètre 50µm / Un voltage élevé: 15 - 30kv / Détecté par l’absorption de l’UV, fluorimètrie, conducmètrie / Volume d’injection est très faible: quelques nanolitre

10 Les principes de l’électrophorèse capillaire Par 2 phénomènes: - Électromigration - électroosmose Par 2 phénomènes: - Électromigration - électroosmose

11 électromigration ce graphe décrit bien que la mobilité décroît quand le rapport charge/masse décroît

12 électromigration les migrations des charges respectent bien le principe: charge positive vers l’électrode cathode et charge négative vers l’électrode anode

13 électromigration / Mobilité électrophorétique: v=µE / La force du champ électrique: F=qE  La force opposée due à la viscosité: F’=6 π  vr / Mobilité électrophorétique: v=µE / La force du champ électrique: F=qE  La force opposée due à la viscosité: F’=6 π  vr

14 électromigration  À l’équilibre, i.e. avec une vitesse constante, F=F’. Donc µ=q/6 π  r  Proportionnelle à sa charge  Inversement proportionnelle au coefficient de viscosit é du milieu  Inversement proportionnelle à son rayon  À l’équilibre, i.e. avec une vitesse constante, F=F’. Donc µ=q/6 π  r  Proportionnelle à sa charge  Inversement proportionnelle au coefficient de viscosit é du milieu  Inversement proportionnelle à son rayon

15 électroosmose / À cause de l’interaction de la solution avec la silice du capillaire / Une double couche diffuse / Le flux électroosmotique

16 Les opérations de cette technique / Les capillaires en silices non recouverts / Spectrophotométre à 214 nm / Un tampon d’ECZ:tricine, NaCl, CH 3 COONa, urée, comme l’électrolyte / Les capillaires en silices non recouverts / Spectrophotométre à 214 nm / Un tampon d’ECZ:tricine, NaCl, CH 3 COONa, urée, comme l’électrolyte

17 Électrophorégramme de référence

18 Les avantages de cette technique / On peut calculer les pourcentages de chaque isoforme à partir de leur surface de pic / Si l’EPO artificielle, les pics seront différents par rapport aux ceux des naturelle / On peut calculer les pourcentages de chaque isoforme à partir de leur surface de pic / Si l’EPO artificielle, les pics seront différents par rapport aux ceux des naturelle