Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors

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1 Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors
für die Immunhämatologie (IH) Hein Hustinx Laborleiter Immunhämatologie, Blutspendedienst SRK Bern Nationales Referenzlabor Blutspende SRK Schweiz

2 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national
pour l’immunohématologie (IH) Hein Hustinx Responsable laboratoire d’immunohématologie, Service de transfusion sanguine CRS Berne Laboratoire de référence national Transfusion CRS Suisse

3 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
La question se pose de savoir si ce thème demande une réponse philosophique ou pas. Ou, comme on le dit souvent, faut-il « en avoir ou pas »? Est-ce que l’on a vraiment besoin d’un laboratoire de référence national? Le fait que le STS Berne soit actuellement le laboratoire de référence national du STS CRS Suisse n’est pas pertinent. L’immunohématologie (IH) ne représente qu’une toute petite partie du domaine des spécialités médicales et la véritable complexité de l’IH ne devient généralement apparente que chez les patients avec des maladies allo-immunes ou auto-immunes ou des constellations de groupes sanguins rares. Je vais tenter de vous présenter cette complexité à l’aide des prochains transparents.

4 Comme vous le savez, l’IH est la somme de plusieurs activités
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Comme vous le savez, l’IH est la somme de plusieurs activités Directives de transfusion sanguine

5 Laboratoire de confirmation
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Le service de transfusion sanguine STS CRS Suisse a défini le cahier des charges suivant : Laboratoire de confirmation Analyses/consultations : toute l’année, 24h sur 24 Traitement immédiat des urgences Dépistage des antigènes des groupes sanguins rares d’après les dernières avancées scientifiques (p. ex. par analyse biologique moléculaire) Collaboration étroite avec les autres laboratoires de référence Eventuellement, membre de SCARF : programme d’échange! 2. Contrôle de qualité Organisation de contrôles externes (essais collaboratifs)

6 3. Banque du sang pour les produits sanguins spéciaux
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH (suite) 3. Banque du sang pour les produits sanguins spéciaux Approvisionnement de la Suisse en produits sanguins avec des constellations rares d’antigènes Tenue de la liste nationale des donneurs avec des groupes sanguins-groupes d’antigènes rares 4. Consultations et formation continue Conseils pour l’interprétation de résultats Formation continue Direction du groupe de travail immunohématologie du STS CRS Suisse Y compris l’accréditation et une «peer-review» par des experts étrangers

7 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Le diagramme sur le prochain transparent vous montre comment nous assumons ces « charges »

8 Eine Kopiermaschine brauchen wir auch, aber das war nicht gemeint
Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die IH Eine Kopiermaschine brauchen wir auch, aber das war nicht gemeint

9 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Nous avons bien besoin d‘une photocopieuse, mais ce n’est pas ce que nous voulions dire

10 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
R&D PCR Séquençage des groupes sanguins Industrie Livraison CE BioRad, Medion Recommandations (Patients) Directives (Sérologie des donneurs) Groupe de travail Immunohématologie STS CRS CH Dépistage AG des donneurs Interne Centre d‘essais collaboratifs Livraison de cellules de test Swissmedic CSL BioRad Urgences et permanence pour le canton de Berne y compris problèmes à l‘Hôpital de l‘Ile Groupe de travail ISBT Rare Blood Gestion fichier Donneurs rares CH/D/A Génotypage Génotypage RhD foetal Consultations dans toute la Suisse Approvisionnement en sang rare: Suisse, étranger Sérothèque avec >2000 groupes sanguins rares + sérothèque avec antigènes rares Echange mondial SCARF Urgences et permanence cas spéciaux STS CRS CH Kryobloedbank Amsterdam Immunohématologie STS CRS Berne SA Laboratoire de référence national Suisse OMS Laboratoire de référence de Bristol Formation apprentis Rapports bilingues D / F Publications Affiches Exposés Connecté au monde entier Club Anticorps Laboratoire de référence INTS T. Peyrard Elucidation pour labos privés Echantillons étrangers p.ex. d‘Italie Formation continue Hôpital de l‘Ile Formation continue Accréditation Peer review Exposés dans toute la Suisse Collaboration aux workshops internationaux Laboratoire de référence ABO à Lund, Suède Diagnostic moléculaire, donneurs et patients Groupes de travail DGTI Développement de nouvelles techniques Revue de la littérature Coopération Paris / Mannheim / Vienne

11 Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die IH

12 Publications du domaine de l’immunohématologie 2012/2013 : Exposés :
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Publications du domaine de l’immunohématologie 2012/2013 : Exposés : High-throughput blood group genotyping (HTBGG) shows an unexpected high frequency of FY*X. P. Gowland, S. Lejon Crottet, C. Henny, F. Still, C. Niederhauser, S. Fontana and H. Hustinx Mixed field agglutination in weak D type 31: no Rh complex alteration except for diminished Band3. J. Reif, H. Hustinx, EM. Dauber, GF. Körmöczi Novel KEL heterozygous mutations associated with apparent lack of Kell antigens KEL1 and KEL2 in two patients. V. Karamatic Crew, N Thornton, N Burton, H Hustinx, G Daniels A long PCR system for the investigation of difficult Rhesus variants. J. Aeschlimann, P. Gowland, J. Graber, H. Hustinx, S. Fontana and C. Niederhauser

13 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Publications: A novel Bweak hybrid allele lacks three enhancer repeats but generates normal AB0 transcript levels. B. Thuresson, B. Hosseini-Maaf, AK. Hult, H. Hustinx, M Alan Chester, ML Olsson.    Grosses Engagement der biomedizinischen Analytikerinnen. H. Hustinx, UE. Nydegger Monozyten-Monolayer-Assay. S. Gugger DGTI-register seltene Blutspender. H. Hustinx, I. von Zabern Serologic and molecular investigations of DAR1 (weak D Type 4.2), DAR1.2, DAR1.3, DAR2 (DARE), and DARA Sofia Lejon Crottet, Lonneke Haer-Wigman, Peter Gowland, Stefano Fontana, Christoph Niederhauser and Hein Hustinx Première publication en ligne: 31 JUILLET 2013! P1/P2 genotyping of known and novel null alleles in the P1PK and GLOB histo-blood group systems Julia S. Westman, Åsa Hellberg, Thierry Peyrard, Hein Hustinx, Britt Thuresson and Martin L. Olsson Première publication en ligne: 8 AOÛT 2013!

14 A mon avis, nous assumons bien nos « charges ».
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH A mon avis, nous assumons bien nos « charges ». L’envoi, année après année, de demandes d’analyses complexes, de clarifications de groupes sanguins problématiques, etc. a enrichi notre expérience et permet aujourd’hui de résoudre les cas difficiles et d’apporter les bonnes réponses aux questions de nos clients. Il est très important de noter qu’il s’agit d’un travail d’équipe et que sans cette collaboration, beaucoup de choses n’auraient pas été possibles. Je voudrais également mentionner brièvement le Groupe de travail IH du Service de transfusion sanguine Suisse (cela fait aussi partie du cahier des charges). Si la Conférence des Directeurs de STS Suisse les approuve, les nouvelles recommandations pour les patients pourront être publiées le 1er janvier Nous, c’est à dire un groupe d’experts (STS, hôpitaux), nous avons travaillé pendant près de deux ans au remaniement de ces directives. Sans un vrai travail d’équipe, cela n’aurait pas été possible. Je voudrais également présenter un cas qui met clairement en évidence la signification du laboratoire de référence national.

15 Une urgence le jour de l’Ascension 2013, 11:30h
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Une urgence le jour de l’Ascension 2013, 11:30h Suspicion d’anticorps publics? * M 7/1 M 7/2 M 7/3 M 7/4 M 7/5 M 7/6 M 7/7 M 7/8 SZ I SZ II SZ 3 SZ 4 Eig. N10 ++ ++’ N20 (+) C37 - (±) P37 +++ TAD polyvalent : négatif IgG: négatif Groupe sanguin : A RhD positif *Evaluation avec le panel maison (les érythrocytes-test proviennent toujours des mêmes donneurs. Les dons sont conservés dans de l’azote liquide)

16 Résultat de l’échantillon reçu :
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Autres analyses: A1 A2 B O Eig. NG fr. Sp. N20 (±) +++’ (+) - +/- N10 + +’ (++) N37* (+++) Résultat de l’échantillon reçu : TC des segments livrés : 2 sur 4 légèrement positifs Evaluation des résultats Exclusion d’anticorps contre les substances de la solution stabilisante Exclusion d’anti-I (mais pas HI), car notre propre contrôle est négatif. Exclusion d’anti-HI, car les tests A1 sont positifs. *si l’on soupçonne la présence d’anticorps actifs à froid, on placera les échantillons, qui avaient été analysés à une température de 10°C, pendant minutes à 37°C. Résultat attendu : un résultat négatif ou presque négatif.

17 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Suite à ces observations, nous nous sommes posé la question: Ac IgM/IgG; quels anticorps sont prévisibles contre un antigène de haute fréquence? En Suisse, les plus probables sont les anti-P ou anti-Vel. Normalement, en présence d’un anti-P, toutes les cellules sont « uniformément » positives. Par contre, lors d’un test indirect à l’anti-globuline (TIA) et surtout avec notre mosaïque maison, un anti-Vel donnera des réactions positives d’intensité variable qui sont généralement renforcées dans la papaïne. S’agit-il d’un anti-Vel? Cinq tests érythrocytaires Vel négatifs ont montré des résultats négatifs lors d’un TIA. Dans ce cas, nous avons donc pu dépister l’antigène Vel (heureusement TAD négatif) : antigène Vel négatif! Quelle leçon pouvons-nous tirer de ce cas? (Il peut servir à évaluer les processus internes et peut éventuellement être utilisé pour une formation interne). Entretemps, nous savons que notre cellule test M7//7 est fortement Vel positive! Si les réactions à un ID/TIA sont faiblement positives, il faut d’abord identifier le problème (anti-stabi, phénomène ID, froid), avant de procéder par élimination avec le TIA. Sans élucidation précise des causes, les essais dans les tubes TIA peuvent donner de faux résultats négatifs parce que les anticorps IgM se dissolvent la plupart du temps lors du lavage des érythrocytes testés (survenu aux Pays-Bas, hémolyse intravasculaire).

18 Depuis mars 2013, le code génétique du gène Vel est connu.
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Depuis mars 2013, le code génétique du gène Vel est connu. Chez les patients Vel négatifs, le gène SMIM1 montre une délétion 17 nt sur l’exon 3 Storry et al. , Nature Genetics (2013), 45 (5) Cvejic et al., Nature Genetics (2013), 45 (5) Ballif et al (Thierry Peyrard!)., EMBO Mol Med (2013) 5 SMIM1 : protéine transmembranaire de la membrane érythrocytaire 78 acides aminés divisés en 4 exons Vel négatif : une délétion de 17 nt sur l’exon 3

19 3: Contrôle Vel hétérozygote 4: Patient (Vel négatif)
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH En tant que laboratoire de référence, nous avons rapidement développé un SSP-PCR (aide en cas de questions difficiles, contrôle de donneurs Vel négatif) 1 2 3 4 Size Marker 1: Contrôle Vel positif 2: Contrôle Vel négatif 3: Contrôle Vel hétérozygote 4: Patient (Vel négatif) Vel pos Vel nég Referenz: Storry JR et al., Nat. Gene. (2013) 45, , 50,

20 Vous savez probablement que le sang Vel négatif est extrêmement rare.
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Vous savez probablement que le sang Vel négatif est extrêmement rare. Suivant les pays et les tests, son incidence est de 1:2000 à 1:4000. Si jamais cette patiente a besoin d‘une transfusion, où trouverons-nous du sang approprié? Pendant les derniers vingt ans, le laboratoire de référence national a, d’un côté, effectué des dépistages sérologiques Vel (la dernière fois sur env. 40’000 donneurs). D’un autre côté, il a créé une banque de données avec tous les donneurs rares connus. Cette banque de données est remise à jour 3 fois par an. L’accès à ces données est sécurisé par un mot de passe et elles peuvent être consultées par tous les Services de transfusion sanguine de Suisse. Entretemps, les Services de transfusion sanguine allemands et autrichiens participent également à cette banque de données. «DGTI Register seltene Spender»

21 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH

22 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH

23 L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH

24 Merci vielmals für Ihre Kooperation
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH Merci vielmals für Ihre Kooperation Merci beaucoup pour votre coopération Grazie mille per la Sua collaborazione Thank you very much for your cooperation