metafer® de la société mEtasystem

Présentation au sujet: "metafer® de la société mEtasystem"— Transcription de la présentation:

1 metafer® de la société mEtasystem
Chercheur de Métaphases au CHU de REIMS metafer® de la société mEtasystem

2 Organisation du laboratoire de cytogénétique et génétique du CHU REIMS
Secteur constitutionnel , hématologique et fish (4,5 techniciennes) En 2009: 600 caryo constit métaphasiques /prométaphasiques 800 caryo hémato 1100 FISH hémato et constit Secteur prénatal et tumeur (1,8 techniciennes) En 2009 : 900 caryo Secteur BM (1,5 techniciennes + 1 ingénieur « puce CGH array »)

3 Évolution des caryotypes en 5 ans
hématologie FISH constitutionnel 2004 500 720 690 2009 800 1100 600 évolution 60% 53% 15%

4 Equipement et imagerie
Un chercheur de métaphase + chargeur 80 lames 4 microscopes « captures manuelles » + logiciels d’analyse d’images Ikaros® et Isis® 2 microscopes lecture de FISH « captures manuelles »équipé d’une platine de relocalisation de mitose

5 Utilisation du Métafer®
Tous les caryo hémato bandes G et R 80% des lames de FISH (métaphasique et interphasique), sondes commerciales, bac. Peu de caryo constitutionnels…

6 Station metafer® + chargeur 80 lames ( 2m10 en longueur x 80 cm en profondeur)

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10 Temps de capture Plateau de 8 lames en lumière blanche
Recherche des mitoses obj x10 Choix des mitoses + autocapture à l’obj x60 Transfert des images ± 1h30 FISH métaphasique De 10 min à 30 min / lame en fonction du nombre de mitoses voulu FISH interphasique ± 30 min / lame (pour une recherche min de 200 à 300 noyaux)

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12 Entrées des dossiers

13 Paramètres de calibration et d’entraînements des lames
Création de programmes de recherches Recherche obj x10 , détection des mitoses Lames bandes G et R (classifiers hémato, constit, LA ,etc…) Lames de FISH (dapi) Autocapture obj x63 : relocalisation des mitoses ≠ classifiers pour les mitoses très étalées (HRC) Classifiers pour les différents types de fluorochromes en FISH

14 Création de programmes de recherches
FISH interphasique (objx40) Types de cellules à détecter (lymphocytes , LCR ,cellules buccales ) Sondes monolocus monocolore ou bicolore (break- appart) Sonde de fusion Type de fluorochrome

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26 Paramètres variant en FISH interphasique
Sensibilité (seuil de détection) Largeur des spots Limite d’espacement entre 2 spots d’une sonde bicolore (impliquant ou non une translocation ou une inversion) Nombre de champs à screener Prise en compte ou non des noyaux avec 0 spot (double délétion)

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28 MLL IGH

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31 Clone 1 Clone 2 Clone 3

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34 AVANTAGES Moins de lecture au microscope et dégagement de temps souplesse d’organisation au microscope Sensibilité et détection ++ Souplesse d’utilisation pour les confirmations de petits clones hématologiques ++ Possibilité de relocaliser facilement des mitoses Rendu plus rapide des caryo hémato « screenés »  le jour même de la coloration

35 AVANTAGES Utilisation du chargeur de lames la nuit notamment en FISH interphasique (30 min /lame) Choix de la zone de lecture notamment en FISH (plusieurs sondes sur une lame) Lecture « rapide » des M-FISH Programmes adaptés aux ≠ sondes (sonde de fusion ,M-FISH , type de fluorochrome) Compte rendu d’analyse précis en FISH interphasique avec les ≠ clones hémato Toutes les recherches sont stockées dans le disque dur

36 INCONVENIENTS Plusieurs mois d’adaptation et de paramétrage
Nécessité de mettre à jour les logiciels de traitement d’image sur chaque poste d’analyse Proximité de l’automate indispensable Qualité des étalements importante (étaleur) Huile +++ Mitoses incomplètes en constitutionnel et prénatal ++

37 INCONVENIENTS Difficulté d’interprétation pour certaines sondes
Diagramme interphasique parfois assez fastidieux à corriger FISH ou lumière blanche prévoir une organisation au sein du labo

38 Après 2 ans d’expérience:
conclusion Après 2 ans d’expérience: Devenu indispensable en cytogénétique hématologique et en FISH A optimiser pour nos caryotypes constitutionnels et prénatals