Hémogramme. titre Notions Théoriques Associées 08

1. Définition. 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.1. Nombre de GR. 2.1.1. Principe et technique. 4. La lignée blanche. 2.1.2. Normes et variations. 4.1. Nombre de leucocytes. 2.2. Hématocrite. 2.2.1. Principe et technique. 4.2. Formule leucocytaire. plan 2.2.2. Normes et variations. 4.2.1. Le frottis. 2.3. Hémoglobine 4.2.2. Dénombrement. 2.3.1. Principe et technique. 5. Les réticulocytes. 2.3.2. Normes et variations. 6. Les plaquettes (thrombocytes). 2.4. Observation microscopique. 3. Les indices érythrocytaires. 3.1. Structure des GR. 3.2. VGM: volume glomérulaire moyen. 3.3. TCMH: Taux corpusculaire moyen en hémoglobine. 3.4. CCMH: Concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine.

étude morphologique des éléments figurés. 1. Définition. L'hémogramme constitue l'exploration hématologique de base. Il comprend: - un examen quantitatif: numération des éléments figurés du sang (GR, GB, plaquettes, réticulocytes). 1 détermination de l'hématocrite. dosage de l'hémoglobine établissement de la formule leucocytaire - un examen qualitatif: étude morphologique des éléments figurés. - le calcul des indices érythrocytaires. PLAN

On utilise un hématimètre de Malassez (voir la méthode en NTA-07). 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.1. Nombre de GR. 2.1.1. Principe et technique. On décompte, au microscope optique dans un hématimètre, le nombre de GR contenus dans un volume de sang dilué. On utilise un hématimètre de Malassez (voir la méthode en NTA-07).

2.1.1 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.1. Nombre de GR. 2.1.1. Principe et technique. On décompte, au microscope optique dans un hématimètre, le nombre de GR contenus dans un volume de sang dilué. On utilise un hématimètre de Malassez (voir la méthode en NTA-07). 2.1.1 NGR = (N1 + N2 + N3 + N4 + N5) x 20 x 106 x 200 GR.L-1 On compte généralement 5 rectangles Conversion en litre Inverse de la dilution 1/200 PLAN

2.1.2 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.1. Nombre de GR. 2.1.2. Normes et variations. Nourrisson Femme Homme Hématies (N.L-1) 5 à 6 1012 7,5 à 10 1012 8,5 à 12 1012 2.1.2 N > normes: La polyglobulie est une anomalie de la production des globules rouges (ou érythropoïèse) définie par l'augmentation de la valeur absolue du nombre de globules rouges circulant dans le sang. Elle répond à deux mécanismes distincts : la polyglobulie primitive (ou maladie de Vaquez) est due à une prolifération (cancer) des cellules souches qui entraine une surproduction de globules rouges. La polyglobulie secondaire est, elle, liée à une augmentation du taux sanguin d'hormones stimulant l'érythropoïèse (l'EPO, érythropoïétine), - Suite à une hypoxie chronique (séjour en altitude) - Par sécrétion inappropriée d'EPO. PLAN

2.1.2 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.1. Nombre de GR. 2.1.2. Normes et variations. Nourrisson Femme Homme Hématies (N.L-1) 5 à 6 1012 7,5 à 10 1012 8,5 à 12 1012 2.1.2 N < normes: On parle souvent, à tord , d’anémie. L’anémie concerne la baisse de la concentration en fer et hémoglobine. L'anémie peut avoir plusieurs causes: * hémorragies * défaut de production des globules rouges ou d'hémoglobine * destruction excessive des globules rouges. PLAN

2.1.2 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.1. Nombre de GR. 2.1.2. Normes et variations. Nourrisson Femme Homme Hématies (N.L-1) 5 à 6 1012 7,5 à 10 1012 8,5 à 12 1012 2.1.2 N < normes: On parle souvent, à tord , d’anémie. L’anémie concerne la baisse de la concentration en fer et hémoglobine. Elle peut se déclencher: * à la suite d'une carence alimentaire (dans la majorité des cas) * de facteurs héréditaires * d'une maladie auto-immune (affection de la moelle osseuse, problèmes endocriniens) * d'autres maladies (cancer, SIDA) et certains traitements médicaux La production insuffisante de l'hémoglobine peut être la conséquence d'une carence en fer, en folates ou en vitamines B12. PLAN

2.2.1 Ht = VGR / Vsang Ht = HGR . S / hsang . S Ht = HGR / hsang % 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.2. Hématocrite. αἷμα / haima, « sang » et κριτής / kritês « juge » 2.2.1. Principe et technique. L'hématocrite représente le volume de sang occupé par les GR dans un volume de sang. Le sang est centrifugé de manière à séparer la fraction liquide (plasma) de la fraction globulaire (cellules sanguines). Le volume de chacune des fractions est calculé en fonction de leurs hauteurs respectives dans le capillaire. 2.2.1 H Ht = VGR / Vsang Dans le cas d‘un cylindre h Ht = HGR . S / hsang . S Ht = HGR / hsang % PLAN

2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.2. Hématocrite. 2.2.2. Normes et variations. Nourrisson Femme Homme Hématocrite (mL.mL-1) 0,50 à 0,60 0,35 à 0,47 0,40 à 0,54 2.2.2 Il dépend aussi de la taille des GR (voir plus loin). L’hématocrite dépend principalement du nombre de globules rouges. Les variations d’hématocrite ont les mêmes causes que la polyglobulie. Pour la femme enceinte et l'enfant, les taux diminuent considérablement.  Normal ! Ils sont deux (ou plus) à consommer le fer provenant de l’alimentation de la mère. PLAN

2.3.1 Hb (Fe2+) MetHb (Fe3+) CN-, MetHb (Fe3+) 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.3. Hémoglobine 2.3.1. Principe et technique. Hb (Fe2+) [Fe(CN)6]3- Il s'agit d'un dosage colorimétrique: l'hémoglobine est transformée en un dérivé, la cyanméthémoglobine. [Fe(CN)6]4- 2.3.1 On utilise la solution de Drabkin. Elle a trois actions. MetHb (Fe3+) Hémolyse les globules rouges libérant l’hémoglobine méthémoglobine Oxydation de l’hémoglobine en méthémoglobine (Fe3+) par les ions ferricyanures Hexacyanoferrate III de potassium K3[Fe(CN)6] CN- Formation d’un complexe : la cyanméthémoglobine grâce aux ions cyanures Cyanure de potassium KCN CN-, MetHb (Fe3+) cyanméthémoglobine PLAN

2.3.2 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.3. Hémoglobine. 2.3.2. Normes et variations. Nourrisson Femme Homme Hémoglobine g.L-1 mmol.L-1 160 à 200 10 à 12,5 120 à 160 7,5 à 10 140 à 180 8,5 à 12 2.3.2 N < normes: On parle d’anémie. On a vu les causes d’hypoglobulie. * hémorragies * défaut de production des globules rouges ou d'hémoglobine * destruction excessive des globules rouges. On peut rajouter * Les carences alimentaires en fer. PLAN

2.4 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.4. Observation microscopique. Cet examen est surtout important pour l’étude des leucocytes. Il apporte néanmoins des informations complémentaires non négligeables. Analyser un frottis demande quelques précautions pour éviter les confusions: Les temps de trempages sont différents. Les couleurs ne sont pas les mêmes ! 2.4 Les réactifs n’ont pas les mêmes concentrations (ou pas le même âge). Des globules rouges ont des formes bizarres. C’ est normal. Ce sont des echinocytes. Cette déformation est un effet de l’héparine, un anti-coagulant. PLAN

2.4 2. Mesure des 3 paramètres sanguins relatifs aux GR. 2.4. Observation microscopique. Maintenant, on peut analyser la lame. Couleur homogène avec le centre plus clair. Tous les globules rouges présentent le même aspect: A peu près tous de la même taille. La taille d’un lymphocyte. Ils sont étalés régulièrement sans former de rouleaux. 2.4 Lymphocyte PLAN

erythro, « rouge » et kutos « cellule » 3. Les indices érythrocytaires. erythro, « rouge » et kutos « cellule » 3.1. Structure des GR. Les indices indiquent les caractéristiques individuelles des globules rouges. 3.1 PLAN

On les calcule grâce aux paramètres sanguins. 3. Les indices érythrocytaires. 3.1. Morphologie des GR. Forme biconcave Les indices indiquent les caractéristiques individuelles des globules rouges. Diamètre entre 6,8 et 7,3 µm On les calcule grâce aux paramètres sanguins. 3.1 Les globules rouges ne possèdent aucun organite à membrane (noyau, RE, mitochondrie, etc.. PLAN

3.2 VGM = Ht / N 86 – 105 fL 3. Les indices érythrocytaires. 3.2. VGM: volume glomérulaire moyen. VGM = Ht / N C’est le volume moyen des globules rouges 86 – 105 fL Attention, ce n’est qu’une moyenne. Certaines situations pathologiques présentent un VGM normal. 3.2 L’observation microscopique permet d’identifier ces pathologies. fréq VGM 90 Voir NTA09 Anomalies érythrocytaires PLAN

3. Les indices érythrocytaires. 3.3. TCMH: Taux corpusculaire moyen en hémoglobine. C’est la quantité moyenne d’hémoglobine contenue dans un globule rouge. TCMH = [Hb] / N 28 – 32 pg 1,7 – 0,2 fmol 3.3 Ce n’est pas le plus pertinent des indices car la quantité d’hémoglobine dépend de la taille du globule rouge. PLAN

3.4 TCMH = [Hb] / Ht 3. Les indices érythrocytaires. 3.4. CCMH: Concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine. C’est la concentration moyenne d’hémoglobine contenue par globule rouge. TCMH = [Hb] / Ht 320 – 360 g.L-1 20 – 22 mmol.L-1 3.4 Le CCMH est un bon reflet des capacités de transport d’O2 du globule rouge. CCMH < normes: On parle d’hypochromie. Les globules rouges paraissent moins colorés au microscope. L’hémoglobine se trouve en concentration saturante. Une augmentation de concentration se traduirait par une précipitation de l’hémoglobine et une destruction du globule rouge. CCMH > normes: Ce cas n’existe pas. Par contre, une TCMH au-dessus des normes est possible. PLAN

4.1 4. La lignée blanche. 4.1. Nombre de leucocytes. leucocytes La dilution des globules blancs obéit au même principe que celui des globules rouges. Ils sont moins nombreux: On utilise une dilution plus faible. 4.1 On les compte sur la totalité de l’hématimètre. leucocytes (N.L-1) 4 à 10 . 109 PLAN

4.2.1 4. La lignée blanche. 4.2. Formule leucocytaire. La formule consiste à dénombrer les différents types leucocytaires dans un échantillon sanguin. 4.2. Formule leucocytaire. 4.2.1. Le frottis. On étale la goutte. x 400 4.2.1 On passe au microscope. On fait la mise au point. On passe à x 1 000 et on identifie et on compte les leucocytes. Le frottis doit être lisse et régulier. PLAN

On calcule le nombre de cellules par L de sang. N = Nleuco . % 4. La lignée blanche. N = 6 250 . 109 cell.L-1 4.2. Formule leucocytaire. 4.2.2. Dénombrement. 50 3 2 89 8 2,05 0,13 0,08 3,66 0,33 32,8 2,0 1,3 58,6 5,3 PRINCIPE: On identifie les différentes familles de leucocytes. On les compte. On calcule les proportions. % = N / S 4.2.2 On calcule le nombre de cellules par L de sang. N = Nleuco . % neutrophile basophile éosinophile monocyte lymphocyte S = 152 PLAN

soit : 0,5 – 1,5 % des globules rouges anémies régénératives 5. Les réticulocytes. Les réticulocytes sont les précurseurs des globules rouges. Leur présence dans le sang périphérique en quantité augmentée indique une production augmentée de globules rouges dans la moelle osseuse, pour combler un déficit lié à une anémie. 5 Valeurs normales 25 000 – 75 000 µL-1  soit : 0,5 – 1,5 % des globules rouges Diminution :  - Aplasie médullaire  - Anémie inflammatoire - Anémie par carence en fer, anémie par carence en folates et vitamine B12 - Certains myélomes et leucémies Augmentation :  réticulocytes > 120 000 L-1  anémies régénératives - Anémie hémolytique  - Anémie post-hémorragique PLAN

6 6. Les plaquettes (thrombocytes). thrombocytes 150 à 400 . 109 Les thrombocytes sont de petites cellules dépourvues de noyaux. Ils interviennent dans l’hémostase, première étape de la coagulation sanguine. thrombocytes (N . L-1) 150 à 400 . 109 6 Diminution = thrombocytopénie:  souvent associée à des risques hémorragiques plus importants. Augmentation =  thrombocytose augmentation des risques de thrombose, c’est-à-dire la formation d’un caillot dans la circulation sanguine  PLAN