FACULTE DES SCIENCES DE MONASTIR Encadreur: Mr. M’Hamed Ali HAMZA 1 UNIVERSITE DE MONASTIR FACULTE DES SCIENCES DE MONASTIR Isolement et élucidation structurale d’une flavanone, d’un acide phénolique et d’un hétéroside stéroïdique des fleurs de la plante Anacyclus cyrtolepidioides (Pomel) Encadreur: Mr. M’Hamed Ali HAMZA Laboratoire de Chimie des Substances Naturelles et de Synthèse Organique (99/UR/12-26)

Chapitre III: Etude structurale des substances naturelles isolées Plan de l’exposé 2 Introduction Chapitre I: Etudes ethnobotanique, botanique et bibliographique de la plante Anacyclus cyrtolepidioides Chapitre II: Etudes chimique et chromatographique des extraits des fleurs fraîches de la plante Anacyclus cyrtolepidioides Chapitre III: Etude structurale des substances naturelles isolées Chapitre IV: Evaluation de l’activité antifongique Conclusion générale et perspectives

Introduction 3 Depuis la haute antiquité, les hommes se sont soignés avec les plantes qu'ils avaient à leur disposition. Certaines pratiques médicinales paraissent étranges et relèvent de la magie, d’autres au contraire semblent plus fondées , plus efficaces. Toutes ont pour objectif de vaincre la souffrance et d’améliorer la santé de l’ homme Taxol Taxotère Taxcus brevifolia Taxcus baccata anticancéreux

4 Chapitre I Etudes ethnopharmacologique, botanique et bibliographique relatives à la plante Anacyclus cyrtolepidioides (pomel)

Classification systématique 5 Classification systématique Embranchement Spermaphytes Classe Dicotylédones Ordre Astérales Famille Astéracées Genre Anacyclus Espèce A. cyrtolepidioides (Pomel) Synonyme Anacyclus alexandrinus A. cyrtolepidioides (Pomel)

Répartition géographique en TUNISIE 6 Anacyclus cyrtolepidioides (Pomel) se développe dans les terrains salés et arides Récoltée au mois de Mars 2004 de la région de Gabès. Anacyclus cyrtolepidioides (Pomel)

Etude ethnopharmacologique 7 La poudre des fleurs de la plante Anacyclus cyrtolepidioïdes (Pomel ) est utilisée en cas de maux d’estomac

Anacyclus cyrtolepidioides (Pomel) 8 Etude bibliographique Anacyclus cyrtolepidioides (Pomel) Des études antérieures chromatographiques et structurales effectuées dans notre laboratoire ont permis de signaler la présence de six stéroïdes et d’un hétéroside à génine stéroïdique dans l’espèce Anacyclus cyrtolepidioïdes (Pomel).

9 Travaux antérieurs β-sitostérol δ-7-stigmastérol

10 Travaux antérieurs Cholestérol Campestérol Stigmastérol

11 Travaux antérieurs δ-5-avénastérol ß-Sitostérol-3-O-ß-D-glucoside

12 Chapitre II Etudes Chimique et chromatographique des extraits des fleurs fraîches de la plante A.cyrtolepidioïdes

Préparation des extraits bruts 13 Préparation des extraits bruts

Simplification chromatographique grossière de l’extrait butanolique 14

Isolement de la substance naturelle SN1 15 Isolement de la substance naturelle SN1

Isolement de la substance naturelle SN1 16 Isolement de la substance naturelle SN1

Chapitre III Etude Structurale Méthodes spectroscopiques utilisées 17 Chapitre III Etude Structurale Méthodes spectroscopiques utilisées RMN 1D (1H , 13C) RMN 2D (1H-1H COSY,HSQC et HMBC) Spectrométrie de masse

de la Substance Naturelle 18 A -Etude structurale de la Substance Naturelle SN1

Spectre RMN 1H de la Substance Naturelle SN1(300MHz; CD3OD) 19 Spectre RMN 1H de la Substance Naturelle SN1(300MHz; CD3OD) J =8,4Hz Jméta=2,1Hz

Spectre RMN13C de la Substance Naturelle SN1(75MHz; CD3OD) 20 CHO

21 RMN 1H RMN 13C

Spectre COSY de la Substance Naturelle SN1(300MHz; CD3OD) 22 Spectre COSY de la Substance Naturelle SN1(300MHz; CD3OD) H2-H3α H3β-H3α H2-H3β Corrélation 1H -1H COSY

Spectre HMBC de la Substance Naturelle SN1(300MHz; CD3OD) 23 Spectre HMBC de la Substance Naturelle SN1(300MHz; CD3OD) H6’,2’-C2 H6-C8 H8-C10 H2-C2’, 6’ H 3-C4 H8-C9

Etude structurale de la substance naturelle SN1 24 Etude structurale de la substance naturelle SN1 SN1 NARINGENINE Signalé pour la première fois de A. cyrtolepidïodes

de la Substance Naturelle 25 B-Etude structurale de la Substance Naturelle SN2

Spectre RMN 1H de la Substance Naturelle SN2(300MHz; CD3OD) 26 Spectre RMN 1H de la Substance Naturelle SN2(300MHz; CD3OD) Trois hydrogènes aromatiques CD3OH CH3OD 2H 1H d d s

Spectre HSQC de la Substance Naturelle SN2(300MHz; CD3OD) 27 Spectre HSQC de la Substance Naturelle SN2(300MHz; CD3OD) H 3 H 6 H 7 C3-H 3 C6-H 6 C7-H 7

Spectre HMBC de la Substance Naturelle SN2(300MHz; CD3OD) 28 H3 H6 H7 H7-C6 H3-C7 H6-C7 H3,7-C2 H6-C4 H3-C4 H6-C5 H3,7-C5 H3,7-C1

Spectre de masse de la Substance Naturelle SN2 29 Spectre de masse de la Substance Naturelle SN2

Etude structurale de la substance naturelle SN2 30 Etude structurale de la substance naturelle SN2 SN2 Acide 4,5- dihydroxybenzoïque SN2 Signalé pour la première fois de A. cyrtolepidïodes

de la Substance Naturelle 31 C-Etude structurale de la Substance Naturelle SN3

Spectre RMN1H de la Substance Naturelle SN3(300MHz; C5D5N) 32 Spectre RMN1H de la Substance Naturelle SN3(300MHz; C5D5N) H26,27,28 H18 C5H5N CH ,CH2,CH3 H6 H(ose)

33 β-D-galactopyranose β-D-glucopyranose

Agrandissement de la zone allant de 3,4 à 5,8 ppm du spectre RMN1H de la Substance Naturelle SN3ac(300MHz; CDCl3) 34 H3’ H4’ H1’ H2’ H6’a H6’b

Etude structurale de la substance naturelle SN3 35 Etude structurale de la substance naturelle SN3 SN3 -Sitostérol-3-O--D-Glucoside SN3 Déjà Signalé de la plante A.Cyrtolepidioïdes (Pomel).

Evaluation de l’activité antifongique 36 Chapitre IV Evaluation de l’activité antifongique

37 Dans le but d’essayer de valoriser le travail chimique et chromatographique envisagé sur l’extrait butanolique des fleurs d’Anacyclus cyrtolepidioïdes (Pomel), et de tenter la localisation d’une éventuelle activité significative Les Candida sont des levures non pigmentés, ils forment des colonies blanchâtres crémeuses. Leur taille varie entre 3 et 15µm. Ils sont formés à partir d’une cellule mère par bourgeonnement, produisant ainsi des cellules filles de manière multipolaire.

Cette levure a pris une place importante dans la pathologie humaine . 38 Les candidoses Candida albicans  Candida glabrata Cette levure vit normalement en saprophyte dans l'intestin humain ou animal . Dans certains cas, elle peut se multiplier de manière excessive et envahir tout l'appareil digestif Cette levure a pris une place importante dans la pathologie humaine . Elle provoque des vaginites, des infections urinaires et des septicémies.

Méthode de diffusion sur milieu liquide 39 Extrait dilué 10mg/ml 25 μl Suspension de la levure

40 La sous fraction B2 provenant de la purification de la fraction G2 Cette sous fraction B2 est avérée la plus active parmi tous les autres fractions envers les deux types de candidoses . Elle atteint 11 mm comme diamètre d’inhibition vis-à-vis au candida glabrata et 14 mm vis-à-vis au candida albicans

41 Conclusion générale Nos études ethnobotanique, botanique et bibliographique nous ont permis de choisir la plante Anacyclus cyrtolepidioïdes , objet du présent travail de recherche. Nos études chromatographiques, nous ont permis d’isoler à l’état pur les substances Naturelles SN1 ,SN2 et SN3

Etude structurale en RMN 1D (1H, 13C) 42 Etude structurale en RMN 1D (1H, 13C) 2D (1H-1H COSY,HSQC et HMBC) et SM NARINGENINE SN1 Signalée pour la première fois de A.cyrtolepidioïdes cyrtolepidïodes

Signalé pour la première fois de A. cyrtolepidïodes 43 Acide 4,5- dihydroxybenzoïque SN2 Signalé pour la première fois de A. cyrtolepidïodes

Déjà Signalé de la plante A.Cyrtolepidioïdes (Pomel). 44 -Sitostérol-3-O--D-Glucoside SN3 Déjà Signalé de la plante A.Cyrtolepidioïdes (Pomel).

45 L’évaluation de l’activité antifongique de l’extrait butanolique de la plante Anacyclus cyrtolepidioïdes (Pomel) et de certains de ses fractions, nous a permis de noter des résultats significatifs.

de la plante Anacyclus cyrtolepidioïdes Perspectives 46 Nous comptons continuer l’étude chromatographique du reste des fractions de la plante Anacyclus cyrtolepidioïdes * Isoler si possible de nouvelles substances naturelles et élucider leurs structures puis les soumettre à divers tests biologiques * Etudier la relation Structure Chimique-Activité Biologique

Merci pour votre attention

Spectre RMN13C de la Substance Naturelle SN3(75MHz ,C5D5N) 36 Spectre RMN13C de la Substance Naturelle SN3(75MHz ,C5D5N) C5D5N C6’ -CH- ,-CH2-, -CH3 -CH-(ose) C5 C6 C1’

Isolement de la substance naturelle SN2 17 Isolement de la substance naturelle SN2

Isolement de la substance naturelle SN3 18 Isolement de la substance naturelle SN3

Isolement de la substance naturelle SN3 19 Isolement de la substance naturelle SN3

Spectre RMN13C de la Substance Naturelle SN2(75MHz; CD3OD)