BASES DE BACTERIOLOGIE

Le laboratoire de Bactériologie réalise l’étude bactériologique des prélèvements provenant de patients infectés. Ce qui permet : De confirmer le diagnostic d’infection. De déterminer quelle est l’espèce ou les espèces bactériennes responsables de cette infection. De déterminer à quels antibiotiques ces bactéries sont sensibles c’est-à-dire avec quels antibiotiques il faudra traiter le patient pour le guérir de son infection.

Une bactérie c’est un être vivant unicellulaire composé de plusieurs éléments

Structure de la paroi bactérienne

Structure de la paroi bactérienne

_________________________________________________ NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGl c NAcMur L-Ala L-Ala D-Ala D-Glu D-Glu + L-Lys Gly (5) L-Lys Gly (5) L-Lys Gly (5) D-Ala D-Ala D-Glu Transpeptidase L-Lys Gly (5) D-Ala L-Ala D-Glu L-Ala NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc ___________________Bêta-lactamines ____________________

Structure d’un phospholipide

Différence Gram positifs Gram négatifs

GENETIQUE BACTERIENNE Plusieurs mécanismes de transfert de l’information génétique. Mutations Fréquence 1/10-7 Préexistent au contact avec l’agent mutagène. Elles sont spontanées et peuvent toucher n’importe quel type de caractère: biochimique ou résistance à un antibiotique….

Transduction Transmission d’information génétique par l’intermédiaire d’un bactériophage. Ce bactériophage va se fixer sur une bactérie et va infecter cette cellule bactérienne. Il va comme une seringue lui injecter son ADN.

Bactériophage a la surface d’une bactérie

Puis il va se multiplier dans la bactérie en incorporant une fraction de l’ ADN bactérien. Il va ensuite lyser cette bactérie, puis il va infecter une nouvelle bactérie réceptrice. En lui transmettant de fragments de l’ADN de la première bactérie il va lui conférer d’autres caractères liés aux gènes qu’il lui aura transféré.

Transformation chez le pneumocoque Souche R vivante DNA souche S tuée Souche S vivante + =

Conjugaison C’est le transfert de matériel génétique d’une bactérie mâle à une bactérie femelle par l’intermédiaire d’un pili sexuel.

Conjugaison au microscope électronique

Le transfert d’ADN est fonction du temps de contact entre les deux bactéries et l’étude des caractères des bactéries réceptrices et de leur temps d’apparition permet d’établir la cartographie du plasmide transféré.

COLORATION DE GRAM Elle repose sur la différence de constitution de la paroi bactérienne. On réalise un frottis du prélèvement sur une lame. On fixe la préparation soit à l’alcool soit à la chaleur. On recouvre la lame de Violet de Gentiane ou de Cristal violet. On recouvre la lame de lugol pour fixer le violet.

On décolore ensuite à l’alcool, jusqu’à ce qu’il n’entraîne plus de violet. On recolore à la fuchsine. On observe ensuite la lame au microscope à l’objectif x 100, après avoir recouvert la lame d’huile à immersion.

Staphylocoques Streptocoques COLORATION DE GRAM Cocci à Gram positif Staphylocoques Streptocoques

Cocci à Gram négatif

Bacilles à Gram positif Clostridium perfringens Clostridium botulinum COLORATION DE GRAM Bacilles à Gram positif Clostridium perfringens Clostridium botulinum

Bacilles à Gram négatif COLORATION DE GRAM Bacilles à Gram négatif Pseudomonas aeruginosa Fusobacterium

Coloration de Ziehl-Neelsen Bacilles acido-alcoolo résistants

Coloration à l’auramine

Examen au fond noir Treponema pallidum

Technique d’immunofluorescence pour l’identification de bactéries

Aspect en microscopie électronique de bactéries de forme bacillaire

TYPES RESPIRATOIRES Aérobies strictes Aéro-anaérobies facultatives Microaérophiles Anaérobies strictes

Dispositif Portagerm

Dispositif culturette anaérobie

Jarre à vide et sachet anaérobie

Enceinte anaérobie

Technique d’isolement

CULTURE SUR GELOSE ORDINAIRE (TRYPTICASE-SOJA) Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa (Pyocyanique)

CULTURE SUR GELOSE AU SANG Hémolyse bêta Pigmentation noire

CULTURE SUR MILIEU SELECTIF (MILIEU DE DRIGALSKI) Lactose positif Lactose négatif

Microgaleries d’identification

Antibiogramme par diffusion

Antibiogramme par diffusion

Biologie moléculaire Extraction ADN Amplification PCR Restriction Hybridation Signaux positifs Gène à étudier Amplification PCR Analyse de séquence comparative référence Restriction Séparation Analyse comparative des signaux 1 2 5 4 3 7 6

Orientation vers diagnostic bactériologique Examen direct interprété (site de prélèvement) Faire la distinction entre flore normale, de colonisation …et l’infection Flores commensales Cutanée : Staphylocoques coag neg, Enterococcus ssp corynébactéries, Acinetobacter ssp, propionibacterium ssp Oro-pharyngée: Streptococcus ssp, anaérobies, Neisseria ssp, corynébactéries Digestive : Anaérobies, Escherichia coli, Entérobactéries Vaginale : Lactobacilles

Références: http://www.microbes-edu.org