Thérapie Génique, aspects techniques Pages 35 - 38 Thérapie génique Les vecteurs Les vecteurs viraux Les vecteurs non-viraux Les méthodes physiques

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Les vecteurs viraux Page 35 = virus transformés → infection, se reproduire + gène thérapeutique. 2 groupes: Rétrovirus ARN Adénovirus ADN

Les vecteurs viraux Rétrovirus Adénovirus

Thérapie Génique, aspects techniques Pages 36 - 37 Thérapie génique Les vecteurs Les vecteurs viraux Les vecteurs non-viraux Les méthodes physiques

Les vecteurs non-viraux Page 36-37 2 groupes ADN plasmidique (ADN nu) Liposomes = vecteurs synthétiques ADN complexé à des lipides cationiques ADN condensé par des polymères cationiques

Les vecteurs non-viraux Page 37 Avantages: ↓ immunogénicité → Administrations répétées Pas de limite théorique pour la taille du gène thérapeutique.

Les vecteurs non-viraux Page 36 L’ADN nu: Plasmides c gène thérapeutique → tissu cible → cellules ?

Les vecteurs non-viraux Page 37 L’ADN nu: Avantages: Facilité et faible coût de production, de stockage et de contrôle-qualité Faible immunogénicité

Les vecteurs non-viraux Page 37 L’ADN nu: Inconvénients: Très courte durée d’expression dans les tissus. Transduction inefficace in vitro et in vivo Spécificité !!!

Les vecteurs non-viraux Page 37 L’ADN nu: Traitements: Problèmes cardiovasculaires (angiogenèse) Vaccin (portion d’un gène d’un parasite (malaria))

Les vecteurs non-viraux Page 37 Les liposomes: C ADN (négatif) complexé à des lipides ou des polymères (positif)

Les vecteurs non-viraux Protéines virales Les liposomes Endocytose

Les vecteurs non-viraux Page 37 Les liposomes: Avantages: Facilité de production, de stockage et de contrôle-qualité Faible immunogénicité Transfection efficace in vitro Pas d’effets secondaires !!!

Les vecteurs non-viraux Page 37 Les liposomes: Inconvénients: Faible taux d’insertion de l’ADN thérapeutique Transfection inefficace in vivo Très courte durée d’expression

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Les méthodes physiques Page 37 L’électroporation: ADN plasmidique → tissu cible Membrane cellulaire poreuse 2 plaques d’acier = électrodes Impulsions électriques répétées

Les méthodes physiques Page 38 L’électroporation:

Les méthodes physiques Page 37 L’électroporation: Avantage: Transduction améliorée in vitro dans les Ȼ de la peau et tumorales chez la souris.

Les méthodes physiques Page 37 L’électroporation: Inconvénients: Cellules non viables à l’issue de cette méthode Un seul essai clinique

Thérapie Génique Rétrospective - applications: Page 38 Rétrospective - applications: 1990: immunodéficience congénitale (ADA) → leucémie chez certains patients. 1999: DICS-X (« enfants bulles ») → succès.

Thérapie génique DICS-X

Thérapie génique DICS-X Elaboration de vecteurs efficaces et sûrs

Thérapie Génique Administration ex vivo ou in vitro d’un vecteur Page 34 Administration ex vivo ou in vitro d’un vecteur Utilisée pour les Ȼ faciles à prélever Ȼ sanguines DICS-X

Thérapie Génique Administration in situ d’un vecteur Page 34 / 38 Administration in situ d’un vecteur Au sein du tissu cible directement Mucoviscidose (aérosol → bronches) Tumeur du cerveau Dystrophie musculaire (muscle) Gangrène sénile