Influence de la structure des chromosomes sur l’expression des gènes

Préparation et observation des chromosomes Chez la drosophile: 4 paires de chromosomes Chromosomes polyténiques Glandes salivaires de larves de troisième stade

Glandes salivaires Intestin moyen Caeca digestif Proventricule Corps gras Intestin moyen Caeca digestif Proventricule Oesophage Corps gras Ganglion ventral Hémisphères cérébraux Glandes salivaires Disques imaginaux Machoire Glandes salivaires

Noyaux de cellules de glandes salivaires non éclatés (X100)

Chromosomes polyténiques bien étalés Bras droit du II Bras droit du III Bras gauche du III IV Bras gauche du II X Chromocentre Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 coloration orcéine acétique)

Chromosomes polyténiques bien étalés X 3L 3R 2R 2L 4 Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 vue en contraste de phase sans coloration)

Observation microscope Observation microscope W (B6, C2) Carte de Bridges W Observation microscope photonique W Observation microscope electronique Observation de la région du gène white sur le chromosome X

Constriction (C) de la partie antérieure du chromosome X

Partie délétée Homologue Boucle de délétion

Appariement d’une délétion de la région des gènes zeste/white avec un chromosome normal

3 2 1 w Délétions de la région white du chromosome X Chromosome X non délété w Chromosome X délétion wN Chromosome X délétion wpn Délétions de la région white du chromosome X

Inversion

Boucle d’inversion sur le chromosome X

Exemples d’inversion

Une inversion du chromosome X: In(I)wm4

Pour obtenir une bonne préparation de chromosomes de drosophile il faut : Cultiver les mouches à basse température (19°/20°C) Le milieu doit être enrichi par de la levure de boulangerie fraîche délayée dans un peu d’eau Une faible densité d’individu pour ensemencer la culture (5 à 10 couples) Prélever les larves avant leur immobilisation sur la paroi des flacons de culture, elles ne doivent pas présenter d’appendices antérieurs plumeux.

Ilots de cellules précurseurs Choisir des larves femelles !!! Glandes salivaires Disque labial Disque prothoracique dorsal Disque clypeo-labral Disque patte T1 Disque œil antenne Disque patte T3 Lobe du cerveau Disque patte T2 Disque d’aile ovaire testicule Nid d’histoblaste dorsal antérieur dorsal postérieur Disque génital Tube de Malpighi Ilots de cellules précurseurs De l’intestin adulte Disque d’haltère

La Dissection *Les larve de 3ème stade sont prélevées et déposées sur une lame de microscope dans du sérum physiologique. *La larve est observée sur fond noir au grossissement x10 d’une loupe binoculaire *Avec des pinces fines immobiliser la larve en la pinçant au tiers antérieur et avec une deuxième pince tirer sur la machoire *Vous devez aboutir à la figure suivante

d’après : http://wwwusers.imaginet.fr/~pol/4chrgean.htm#Protocole Dissection de la larve d’après : http://wwwusers.imaginet.fr/~pol/4chrgean.htm#Protocole

Dissection de la partie antérieure d’une larve de 3ème stade Glande salivaire Corps gras Intestin moyen Caeca digestif Proventricule Oesophage Corps gras Ganglion ventral Hémisphères cérébraux Glandes salivaires Disques imaginaux Machoire Dissection de la partie antérieure d’une larve de 3ème stade

*Les glandes salivaires se présentent sous la forme de deux tubes réunis en un canal unique au niveau de la mâchoire (voir photo). *Les glandes sont souvent recouvertes de corps gras. Corps gras Glandes salivaires

*Prélever les deux glandes en essayant au maximum d’éliminer le corps gras ceci sans léser les glandes, les transporter sur une autre lame dans de l’acide acétique 45%, acide lactique, et laisser environ 30 secondes *Remplacer l’acide acétique par la solution de coloration: orcéine/acide acétique/acide lactique (2g orcéine dans 50 ml acide acétique + 50ml acide lactique) *Laisser colorer environ au moins 15 minutes Couvrir la préparation avec une lamelle

Eclatement des noyaux des cellules des glandes salivaires Tapoter avec la pointe d’un crayon de papier sur la lamelle à l’endroit ou se trouve les glandes salivaires. Taper fortement plusieurs fois sur la lamelle avec l’autre extrémité du crayon Mettre la préparation sur du papier filtre et presser très fortement avec le pouce sur la lamelle en faisant attention à ce qu’elle ne glisse pas Bras droit du II Bras droit du III Bras gauche du III IV Bras gauche du II X Chromocentre