Sauvetage in vitro d’embryons des variétés précoces d’abricotier (Prunus armeniaca L.) en Tunisie Lachkar A1,2, Bayoudh Ch2,3, Majdoub A3 et Jraidi B1,4 1,2- Laboratoire d’Horticulture-INRAT. Centre Régional des Recherches en Horticulture et Agriculture Biologique, BP 57, 4042 Chott- Mariem, Tunisie 2,3- U.R Agrobiodiversité-ISA Chott-Mariem. Centre Régional des Recherches en Horticulture et Agriculture Biologique, BP 57, 4042 Chott- Mariem, Tunisie 1,4- Institut National des Recherches Agronomiques de Tunis. Rue Hedi Karray, 2049 Ariana, Tunisie Contact: amellachkar@yahoo.com; chokribayoudh@gmail.com Matériel et méthodes Trois stades de maturité des fruits (où les embryons sont avortés mais viables) : mi-Mûr: disparition de la teinte verte sur plus de la moitié de la surface du fruit Commercial: moins de 10% de vert, essentiellement autour de la suture du fruit Mûr: fruits colorés et légèrement souples. - Deux variétés précoces d’abricotier : Ouardi et Bouthani Ben Friha. La récolte de leurs fruits a eu lieu à ces 3 stades: - Ouardi: mi-Mur  53 jours après la pleine floraison Commercial  60 jours après la pleine floraison Mur  65 jours après la pleine floraison - Bouthani Ben Friha: mi-Mur  65 jours après la pleine floraison Commercial  75 jours après la pleine floraison Mur  78 jours après la pleine floraison Embryon récemment mis en culture (Gr x 10) Six milieux de culture à base de: MS, WPM et Chee and Pool, modifiés et additionnés de: BAP, AIB et AG3 sont utilisés. Les 3 milieux de la phase de germination renferment 0.5 mg/l BAP et 0.1 mg/l AG3 alors que ceux des phases de multiplication et d’enracinement contiennent 1 mg/l BAP et 0.1 mg/l AIB. Les embryons de différentes tailles ont été prélevés, sous une loupe binoculaires, à partir des noyaux désinfectés par une solution d’hypochlorite de sodium à 10%. Introduction Durant la compagne 2010-2011, la production des abricots en Tunisie est de l’ordre de 30 000 tonnes. Elle représente environ 7% de la production totale des espèces fruitières (Gi-fruits, 2011). L’abricotier ouvre la saison des fruits d’été et arrive à une époque où le marché des fruits est relativement dégagé (mai- fin juin). Cette période de courte durée repose essentiellement sur la production des variétés précoces orientée vers le marché local et l’exportation. Toutefois, cette production reste insuffisante pour satisfaire la demande de ces deux marchés. D’où l’intérêt de créer des nouvelles variétés d’abricots plus précoces que celles qui sont actuellement disponibles (Ouardi, Sayeb et Amor Leuch). Chez ces dernières, la maturation du fruit précède celle de l’embryon qui est le plus souvent avorté et par conséquent inapte au semis. Pour cela, la technique du sauvetage in vitro d’embryons des hybrides précoces s’avère primordiale et efficace pour le programme d’amélioration (Burgos et Ledbetter, 1993; Emershad et Ramming, 1994; Yildirim et al., 2007). Objectif L’objectif du présent travail est la mise au point du protocole de sauvetage d’embryons in vitro (choix des milieux de culture, concentrations et durée) sur des noyaux, issus de 2 variétés locales précoces d’abricotier (Ouardi et Bouthani Ben Friha). Résultats et discussion 1- Germination des embryons Tableau 1: Effet du milieu de culture et du stade de maturité du fruit sur la phase de germination des embryons de 2 variétés locales d’abricotier 2- Multiplication et enracinement des vitroplants Longueur de la gemmule (mm) % de nécrose Bouthani Ben Friha 10.60 ± 0.74 77.59 ± 4.70 Ouardi 8.90 ± 0.71 72.05 ± 3.16 Moyenne 9.75 ± 0.52 74.77 ± 2.81 CV 45,34 28,90 Signification ** NS Milieu 1 10.06 ± 0.85 a 70.08 ± 4.70 b 2 11.79 ± 0.88 a 69.75 ± 3.91 b 3 7.39 ± 0.77 b 83.54 ± 5.23 a * Stade de maturité du fruit Mi-Mûr 6.65 ± 0.76 b 80.04 ± 4.99 a Commercial 12.36 ± 0.49 a 78.54 ± 4.87 a Mûr 10.24 ± 0.98 a 66.00 ± 4.36 b Interactions Variété x Milieu Variété x Stade de maturité du fruit Milieu x Stade de maturité du fruit Variété x Milieu x Stade de maturité du fruit Tableau 2: Effet du milieu de culture et du stade de maturité du fruit sur les phases de multiplication et d’enracinement des vitroplants de 2 variétés locales d’abricotier Longueur du vitroplant (mm) Nombre des pousses Nombre des feuilles Longueur des racines (mm) Nombre des racines secondaires Bouthani Ben Friha 19.10 ± 1.77 1.44 ± 0.32 8.98 ± 1.24 39.99 ± 2.87 4.46 ± 0.47 Ouardi 15.40 ± 0.84 2.54 ± 0.42 11.90 ± 2.23 24.75 ± 2.50 2.21 ± 0.36 Moyenne 17.60 ± 1.13 1.93 ± 0.27 10.11 ± 1.15 32.63 ± 2.15 3.36 ± 0.34 CV 49,24 94,47 86,08 50,13 71,3 Signification ** NS Milieu 4 18.58 ± 1.31a 2.26 ± 0.42 a 15.75 ± 2.35 a 40.22 ± 3.61 a 3.60 ± 0.50 a 5 21.49 ± 2.06 a 2.22 ± 0.45 a 9.26 ± 1.35 b 33.67 ± 3.48 a 4.12 ± 0.62 a 6 10.06 ± 0.76 b 0.65 ± 0.11 b 3.82 ± 0.48 c 22.81 ± 2.99 b 1.72 ± 0.30 b * Stade de maturité du fruit Mi-Mûr 13.03 ± 1.59 b 0.99 ± 0.20 b 6.38 ± 0.97 a 32.00 ± 6.24 b 3.03 ± 0.82 b Commercial 19.71 ± 2.20 a 2.47 ± 0.48 a 12.23 ± 1.84 a 24.97 ± 2.57 b 2.85 ± 0.46 ab Mûr 18.48 ± 1.36 ab 1.72 ± 0.36 ab 10.37 ± 2.46 a 40.56 ± 3.07 a 4.03 ± 0.57 a Interactions Variété x Milieu Variété x Stade de maturité du fruit Milieu x Stade de maturité du fruit Variété x Milieu x Stade de maturité du fruit a: les moyennes avec les mêmes lettres ne sont pas significativement différentes (p= 5%), selon le test Duncan NS: non significative, *: significative (p= 5%) et **: hautement significative (p= 1%) a: les moyennes avec les mêmes lettres ne sont pas significativement différentes (p= 5%), selon le test Duncan NS: non significative, *: significative (p= 5%) et **: hautement significative (p= 1%) Durant les 4 semaines de suivi, le taux de germination des embryons de deux variétés est de 100%. Leurs nécroses sont significativement influencées par les interactions : variété x milieu de culture, variété x stade de maturité et milieu x stade de maturité. Les nécroses les plus abondantes ont eu lieu sur le milieu 3 (83.54 %) et avec les stades de maturité mi-Mûr et Commercial (78,54 et 80.04 %). Des différences significatives sont obtenues entre les variétés, les milieux de culture, les stades de maturité et l’interaction milieu avec le stade concernant la longueur de la gemmule. Cette longueur est la plus importante sur les milieux 1 et 2 et avec les stades Commercial et Mûr de maturité. Le transfert des embryons germés sur les milieux appropriés de multiplication et d’enracinement a abouti à leur évolution en plantules et à la formation d’un grand nombre de souches qui s’enracinent aisément. La longueur des vitroplants est significativement influencée par l’interaction variété x milieu de culture. Le nombre des racines secondaires est aussi significativement dépendant de l’interaction variété x milieu x stade de maturité de fruit. Durant les 6 semaines de suivi, la composition des milieux de culture 4 et 5 s’avère la plus favorable pour la multiplication et l’enracinement des vitroplants. Ces 2 phases sont différentes significativement selon les milieux. Embryons en phase de germination Perspectives Mieux optimiser l’étape d’enracinement pour obtenir des plants à système racinaire vigoureux, Appliquer le protocole définitif de sauvetage des embryons à des stades de développement moins évolués Etudier l’étape d’acclimatation (nature du substrat, conditions environnantes contrôlées, durée et taux de réussite), Développer ce protocole dans les programmes de création de nouvelles variétés précoces d’abricotier. Références bibliographiques Burgos, L. et Ledbetter, C.A. (1993): Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 35: 217-222; Emershad, R.L. et Ramming, D.W. (1994): Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 37: 55-59; Gi-fruits (2011); Yildirim, H., Tilkat, E., Onay, A. and Ozen, H.C. (2007): International Journal of Science and Technology, 2, 2, 99-104. Enracinement Multiplication Elongation ATBT, 19-22 Décembre 2011, Sousse