Du 20 au 24 Décembre 2014, Hammamet, Tunisie Journées Internationales de Biotechnologie 2014 Du 20 au 24 Décembre 2014, Hammamet, Tunisie Caractérisation phénotypique et génotypique des rhizobia symbiotiques des légumineuses spontanées Melilotus indicus et Medicago littoralis des palmeraies de la région de Touggourt en Algérie BABA ARBI Souad (1), CHERIET Dahbia (1), CHEKIREB Djamel (1), OUARTSI Akila (1) Laboratoire de Biochimie et Microbiologie Appliquée , Département de Biochimie, Université Badji Mokhtar Annaba, B. P. 12 Sidi Amar 23200 Annaba, Algérie E-mail: souadbabaarbi@gmail.com RESULTATS L’isolement nous a permis à purifier 04 isolats: MD5 et MD9 de Medicago ; ML17 et ML22 de Melilotus: Nodulation: les isolats de Melilotus ont montré une forte aptitude à noduler leur plantes hôtes (moyenne de 20 nodules/plant) par contre aux isolats de Medicago dont le nombre de nodule par plant été très faible (1 nodule/plant). Tolérance aux pH extrêmes: les 04 isolats testés peuvent tolérer une gamme de pH entre 4.5 et 9. Les résultats de séquençage de l’ADN 16S ont montré que les 04 souches appartenant au groupe de Sinorhizobium meliloti. INTRODUCTION Les rhizobia sont des bactéries qui forment une symbiose fixatrice d’azote atmosphérique en association avec les plantes légumineuses. Ces bactéries présentent une faible persistance dans les sols arides due à la salinité et la température élevées qui caractérisent les régions sahariens, ces paramètres affectent ainsi l’établissement et l’efficacité de la symbiose rhizobia-légumineuses. L'objectif de notre travail est l'isolement et la caractérisation des rhizobia associées aux légumineux sauvages Melilotus indicus et Medicago littoralis récoltées du sol des palmeraies de la région de Touggourt dans le sahara septentrionale est d'Algérie. METHODES L'isolement des rhizobia a été réalisé à partir des nodules sur milieu YEMA selon la méthode standard (Somasegaran et Hoben 1985). Les caractères Phénotypiques étudiés sont: la capacité des isolats à noduler leurs plantes hôtes sur sable stérile arrosé par la solution de Rigaud et Puppo. La tolérance aux pH extrêmes: réalisé sur milieu YEMA ajusté aux valeurs de pH: 4.5, 5.5, 6.8, 8 et 9 en utilisant la technique d'inoculation du milieu par spots (Djedidi et al. 2011). L’extraction de ADN génomique a été effectué par utilisation du kit Qiamp selon le protocole développée par le constructeur. Un PCR a été réalisée, les gènes d’ARNr 16S ont été amplifiés en utilisant des amorces universels (Weisburg et al. 1991) et les produits de la PCR ont été séquencées pour servir à la caractérisation moléculaire. MD5 MD9 ML22 ML17 Sinorhizobium meliloti 99 % 98 % 92 % Schéma: Résultat du séquençage des gènes de l’ARNr 16S Les souches de S. meliloti montrent une large gamme d’hôte des légumineuses sauvages, nous conclurons aussi que Melilotus indicus peut représenter l’une des meilleurs hôtes pour le piégeage et l’isolement de cette espèce rhizobial qui montre une forte tolérance aux stresses abiotiques des sols oasiens. CONCLUSION Tableau: Résultats des tests phénotypiques Légumineuse Isolats Nodulation Moyenne (nodule/plant) Tolerance au pH Melilotus indicus (L.) ALL. ML17 19 N/P pH: 4.5-9 ML22 17 N/P Medicago littoralis MD5 1 N/P MD9 1 4 N/P Djedidi S., Yokoyama T., Ohkama-Ohtsu N., Chandra Prasad Risal C., Abdelly C. and Hitoshi Sekimoto H. 2011. Stress Tolerance and Symbiotic and Phylogenic Features of Root Nodule Bacteria Associated with Medicago Species in Different Bioclimatic Regions of Tunisia. Microbes Environ. Vol. 26 (1), pp: 36–45. Rigaud J. et Puppo A. 1975. indole 3-acetic acid catabolicm by soybean bacteroïdes. J. Gen. microbiol. Vol. 88, pp: 223-228. Somasegaran P. et Hoben H. J., 1985. Methods in legume-rhizobium technology. United States Agency for International Development (USAID), pp :7-50. Weisburg W. G., Barns S. M., Pelletier D. A., Lane D. J., 1991. 16S Ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. J. Bacteriol. 173,pp: 697-703. Références bibliographiques