Séminaire International « Protection des cultures stratégiques en Algérie : Situation et Perspectives d’avenir» Organisé par L’INSTITUT DES SCIENCES AGRONOMIQUES et le LABORATOIRE PRODUCTION ET PROTECTION DES CULTURES DANS LA REGION DE CHLEF « L’influence du substrat et le dosage de l’activite proteolytique chez Fusarium oxysporum f. sp. albedinis ». YEZLI W1,2., HAMINI-KADDAR N.1, KARKACHI N.E.1, ZEBBOUDJ N. 1, BENICHOU S.L. 1, ZABOURI Y. 1, KIHAL M. 1 et HENNI J. E. 1 1 Laboratoire de Microbiologie Appliquée, Département de Biologie, Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie, Université d’Oran 1. 2 Département de Nutrition et Technologie Agro-Alimentaire, Faculté des Sciences, Université Ibn Khaldoun, Tiaret. I. Matériel et Méthodes Zone de dégradation Figure 8 : Apparition d’un halo clair au tour des colonies mycéliennes. Introduction Le palmier dattier, malgré sa résistance à tous les facteurs abiotiques, est menacé par la fusariose vasculaire (el Bayoud). Cette maladie cryptogamique existe depuis plus d’un siècle en Afrique du nord. Elle est apparue avant 1870 dans la vallée de Drâa. Dès 1898, l'oasis occidentale de l'Algérie a été atteinte (Tantaoui et al., 1996). L’importance d’el Bayoud dans la vie sociale et économique dans le sud de l’Algérie et dans le monde arabe, est sans aucun doute décisive, et c’est dans cette perspective que nous avons opté pour une recherche approfondie en la matière, en se basant sur l’aspect morphologique, et l’étude de différents facteurs sur l’activité protéolytique chez Fusarium oxysporum f. sp. albedinis. I.1 Culture du champignon Les souches ont été ensemencées sur milieu PDA (Potato Dextrose Agar), en boites de Pétri et incubées à 28°C pendant 7 jours. Une suspension de spores pour l’inoculation a été préparée pour chaque souche, en ajoutant de l’eau distillée stérilisée sur les cultures précédentes (Castro et, al, 1991). Le dosage de l’activité protéolytique a montré que notre isolat « F.o.a Mtl 8 » produit une protéase neutre et alcaline dans un intervalle de pH allant de 7,1 à 7,8, c'est-à- dire un pH neutre et basique, et à un poids mycélien égale à ± 1 g. I.2 Activité protéolytique Pour la recherche de l’activité protéolytique de nos isolats, nous avons étudié l’influence de la caséine par rapport à celle du glucose sur la croissance mycéliénne à différents pH (4, 6 et 8), et on l’a dosé par le réactif de Folin & Ciocalteu (Folin et Ciocalteu, 1926 et Anson, 1938). Figure 10 : L’évolution de l’activité protéolytique pour les trois pH initiaux II. Résultats & discussion Figure 11 : Jours —▫— g —□— pH 4 L’étude de l’influence des deux substrats (la caséine et le glucose) a montré qu’il y a une croissance mycélienne de 63,63 % avec la caséine, par rapport à 36,36 % avec le glucose, comme on a remarqué que l’isolat « F.o.a Mtl 8 » a montré une croissance supérieur à celle des autres avec un poids mycélien de 3 g sur la caséine ; et il a aussi, montré une croissance plus rapide qu’aux autres sur milieu solide, puisqu’il a couvert l’ensemble de la boite en premier (dans 6 jours). Sur le même isolat, la mise en évidence de l’activité protéolytique, par la mesure des diamètres des clarifications, été plus significative, puisqu’il a montré un diamètre allant jusqu’à 4,2 cm de diamètre, au deuxième jour. C’est sur ces critères qu’on c’est basé, pour choisir l’isolat « F.o.a Mtl 8 » pour le dosage de l’activité protéolytique. Figure 12 : Jours —▫— g —□— pH 4 Figure 6 : L’influence des substrats sur la croissance mycélienne Figure 13 : Jours II.1 Étude morphologique et pouvoir pathogène Figure 7 : La moyenne de la croissance mycélienne au sixième jour Conclusion L’étude morphologique a abouti à l’obtention de 18 isolats de l’espèce Fusarium oxysporum. Le test du pouvoir pathogène a montré que les 16 d’entre eux isolés à partir des rachis de palmier dattier infectés, sont des isolats pathogènes appartenant à la forme spéciale albedinis, ainsi que, les deux souches isolées de la rhizosphère, sont des souches saprophytes. L’étude de la recherche de l’activité protéolytique a montré que les pH initiaux (4, 6 et 8) des milieux utilisés ont tendu vers un pH ± neutre à alcalin, les poids de mycélium ont augmenté d’une valeur ± constate et l’activité protéolytique a commencé avec l’augmentation de la biomasse à ± 1 g dans une fourchette de pH 7,1 - 7,8. Références bibliographiques Anson M.L., [1938], J. Gen. Physiol., 22 : 79-89. Bouhot D. et Rouxel F., [1970], Deux techniques de détermination du pouvoir pathogène des Fusarium oxysporum. Ann. Phytopathol., 2 : 591-594. Buxton, E W., (1954), Heterokaryosis and variability in Fusarium. oxysporum.f. sp. gladioli J Gem, Micro, 10:71-8. Djerbi M., [1983], Diseases of the date palm Phoenix dactylifera. FAO, Baghdad, Iraq. Folin O. et Ciocalteu V., [1926], J. Biol. Chem., 73: 627. Tantaoui A., Quinten M., Geiger J. P. et Fernandez D., [1996], characterization of a signale clonal lineage of Fusarium oxysporum f. sp. albedinis causing Bayoud disease of date palm in Morocco. Phytopathol., 86(07): pp. 787. Figure 9 : Diamètres des clarifications