ELISA

ELISA Enzyme

Enzyme ELISA Linked

Enzyme Linked ELISA ImmunoSorbent

Enzyme Linked ImmunoSorbent ELISA Assay

ELISA Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay E E Anticorps Antigène

Principe du test ELISA (1) Coating de l ’Ag ou de l’Ac Support Tampon de coating Lavages Saturation Saturation Lavages

Principe du test ELISA (2) Addition du ligand marqué avec l’enzyme E E Enzymes Lavages: PBS-Tween Addition du substrat de l ’enzyme E Substrats Substrat incolore Produit coloré

Les différents types d’ELISA - Phase homogène - Phase hétérogène - ELISA direct - ELISA indirect - ELISA Sandwich - ELISA par compétition

S P Les ELISA en phase homogène E S E P Antigène absent de l’échantillon E S P Antigène présent dans l’échantillon S P E

Les ELISA en phase hétérogène (1) ELISA direct Anticorps marqué Antigène marqué S P S P E E ELISA indirect S P E Recherche d’anticorps dans le plasma

Les ELISA en phase hétérogène (2) ELISA sandwich (1) Sandwich direct S P Symétrique Asymétrique E Sandwich indirect S P E

Les ELISA en phase hétérogène (3) ELISA sandwich (2) Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques S P E S P E

Les ELISA en phase hétérogène (4) ELISA non compétitif DO Phase plateau Zone linéaire [antigène ou anticorps] Limite de détection

Les ELISA en phase hétérogène (5) ELISA par compétition (1) Compétition au niveau de l’anticorps S P E Anticorps à doser Compétition au niveau de l’antigène S P E Élimination par lavage E Antigène à doser

Les ELISA en phase hétérogène (6) ELISA par compétition (2) DO [antigène ou anticorps]

Choix du test - Quel est le but du test? - Quels réactifs sont disponibles? - Quel va être l’utilisation de ce test?

Principe du kit utilisé pendant la partie pratique Présence d’antigène Absence d’antigène Distribution des témoins et des échantillons S P Addition du mélange substrat-chromogène Distribution du conjugué HRP Cupule Coatée avec anticorps spécifique

Dosage d’IgG de lapins par un test ELISA direct Addition de l’anticorps marqué avec la PAL Addition de l’anticorps marqué à la biotine S P Addition du mélange Chromogène-Substrat Addition de l’avidine recouverte de la PAL Coating de l’antigène (IgG de lapin)

Les techniques apparentées (1) ELISPOT Cellules Culture cellulaire Lavages Nitrocellulose Révélation Apparition de spots E Addition d’un substrat précipitant

Les techniques apparentées (2) - Western blot - immunocytochimie ou immunohistochimie Beaucoup plus loin………... - Immunofluorescence - Cytométrie en flux

Principles of Biacore analysis TM Incident light Refracted light 1 Gold film Prism 2 Ligand flow time Light refraction 1 2 Association Dissociation