BIO1540 Lab 4 : Mitose

Objectifs du laboratoire Visualiser l’ADN grâce à une technique de coloration Identifier et comparer les stades du cycle cellulaire sur des échantillons animaux et végétaux. Déterminer la durée relative de chacune des phases du cycle cellulaire

Phases de la mitose Comptés comme “prophase” Chromosomes non visibles Nucléole présent chromosomes condensés (visibles) Membrane nucléaire se dégrade (mais présente) Chromosomes visibles Membrane nucléaire a disparu Comptés comme “prophase”

Phases de la mitose Cytocinèse Chromosomes alignés au niveau de la plaque équatoriale Les chromatides soeurs se séparent et commencent à migrer vers les pôles Les chromosomes disparaissent et une nouvelle membrane nucléaire se forme Cytoplasme se divise Les cellules filles se séparent Copyright © 2008 Pearson Cummings. All rights reserved

Programme du lab 4: Coloration de la racine de fève (Vicia faba) Identification et comptage des stades mitotiques: blastula de corégone (Coregonus clupeaformis) racine d’oignon (Allium cepa) Préparation de la racine de fève (Vicia faba) -méthode ‘squash’ Entrée des données de la classe

Préparation de la racine de fève (Vicia faba) Matériel fourni: Racines de fèves fixées dans du fixatif Carnoy-lebrun (stoppe les processus cellulaires et préserve les tissus). Protocole détaillé de la coloration dans le manuel de laboratoire Étape 1: Inscrivez votre nom sur le microtube avant de commencer la procédure de coloration. Étape 2: Ôtez le fixatif en utilisant la pipette en plastique. Jetez le liquide dans la poubelle de déchets liquides. Utilisez le cure-dent pour maintenir la racine dans le tube si nécessaire.

Préparation de Vicia faba Étape 3: Rinçages Rincez les racines une fois dans de l’alcool (EtOH) 95% puis enlevez l’alcool à l’aide de la pipette. Étape 4: Hydrolyse Ajoutez du HCl 1N préchauffé aux racines. Incubez à 60°C pendant 10 minutes précises. Ôtez le HCl puis ajoutez délicatement de l’eau glacée pour arrêter l’hydrolyse

Préparation de Vicia faba Étape 5: Coloration Jetez l’eau de l’étape 4 Ajoutez du colorant de Feulgen – Attention il colore quasiment tout instantanément. Colorez pendant 30-40 minutes. Ôtez le colorant en utilisant la pipette en plastique et rincez 2-3 fois avec de l’eau distillée. Conservez les racines colorées dans de l’eau (ne laissez pas sécher)

Préparation de Vicia faba Étape 6 : écrasement de la racine Ajoutez 1 goutte d’acide acétique sur la lame Déposez une racine A l’aide d’une lame de rasoir, coupez 2mm de l’extrémité foncée de la racine. Jetez le reste Montez avec une lamelle

Préparation de Vicia faba Étape 7: Écrasement Pressez fermement en appliquant une pression verticale. Ne faites pas glisser la lamelle latéralement. Vérifiez sous le microscope que la préparation et correcte et pressez à nouveau si nécessaire www.npc.edu/Bio105/media/m1_l6-05.gif

Évaluation de la préparation Montrez votre préparation à votre démonstrateur / trice Présentez une photo de votre préparation pour être évaluée (luminosité, balance des couleurs, mise au point….). Choisissez votre meilleure image.

Comptage des cellules Sous l’objectif 40x, comptez le nombre de cellules dans chacune des phases du cycle cellulaire. Comptez au moins 50 cellules (prenez une photo au 40X et comptez à l’écran) Répétez le comptage deux autres fois ou jusqu’à ce que le nombre final de cellules = 150 pour chaque spécimen.

Comptage des cellules Entrez vos résultats au fur et à mesure dans les feuilles Excel sur les ordinateurs Commencez par une des deux lames préparées (soit l’oignon ou la corégone) puis observez votre préparation de racine de haricot.

Pointe de racine d’oignon (Allium cepa) 40 min

Blastula de corégone (Coregonus clupeaformis) Attention, les lames sont épaisses 30 min www.karlloren.com/ biopsy/images/mitosis.jpg

Évaluation du La4 Questionnaire pré-lab Note technique: compte pour 20% de la note. Vous serez évalué(e) sur: Propreté Bonne utilisation du microscope Bonne qualité de l’écrasement de la racine de fève Bonne qualité de la photo montrée à votre démonstrateur / trice Rapport de laboratoire N’oubliez pas: Les liquides vont dans le Becher de déchets Les lames vont dans la poubelle de verre brisé Portez vos lunettes de sécurité

Report Lab 4: voir instructions sur le site web des laboratoires Report – 3 Pages Page de titre Un graphique à barre sur deux panneaux présentant le % de cellules dans chacun des stades du cycle cellulaire, ceci pour les 3 organismes: Panneau supérieur: données de la classe plus l’erreur type (affichées sur le site web des labs) Panneau du inférieur: vos propres mesures (calculez le % de cellules dans chacun des stades)

N’oubliez pas la légende sous le graphique clé des symboles Graphique sur deux panneaux: Même règles qu’un graphique sur un panneau sauf: Les deux graphiques partagent le même axe Y. Les 2 axes X ont des marques de division mais l’étiquette est seulement présentée sur l’axe du bas. La même échelle est présentée sur les deux panneaux Panneau supérieur: Données de la classe (moyenne PLUS erreur type) série 1 série 2 série 3 1 1 2 3 Pourcentage de cellules Axe des Y: 2 4 Panneau inférieur: Données personnelles Ceci n’est pas un graphique parfait juste un exemple. Graphique fait à la main Sur papier millimétré N’oubliez pas la légende. 3 1 2 3 4 5 Axe des X: Stades du cycle cellulaire N’oubliez pas la légende sous le graphique

Rapport du lab 4 (suite) Page 3. Conclusion basée sur les données du graphe: Brève comparaison de la longueur des phases du cycle cellulaire entre les 3 organismes, entre les données de la classe et personnelles Répondez à la question: En vous basant sur vos observations durant le laboratoire, comment pourriez-vous évaluer la durée relative de chacun des stades du cycle cellulaire pour chacune des 3 espèces observées ? Texte de la page 3: maximum 2/3 de page (12 pts, interligne 1.5 = 15 lignes).

Rapport du lab 4 (fin) Les données combinées seront postées demain sur le site web DATE DE REMISE: Dans une semaine.