Projet Luminy CHAINE Ambre, ROUX Pauline, DESANTI Emma, CHEURFA Rayan, BONGORNO Lucas, MUNTANER Thomas

OBSERVATION Lors d’une blessure, il y a plus de macrophages que de lymphocytes. Hypothèse 1 : Ils se sont multipliés. Hypothèse 2 : Ils ont migré. Question : Comment peuvent-ils agir ? Hypothèse 1 : Ils vont phagocyter (manger) Hypothèse 2 : Ils secrètent des enzymes pour les tuer Hypothèse 3 : Ils appellent d’autres cellules pour les aider (lymphocytes)

Question Il y a souvent du lysozyme dans les médicaments. Qu’est-ce que le lysozyme ? Est-ce que les macrophages sécrètent du lysozyme ? Si oui, quelle est la cible du lysozyme ? Quelle quantité de lysozyme est sécrété ? Comment cela marche ?

Est-ce que les macrophages sécrètent du lysozyme ? Observation des macrophages au microscope optique : Macrophage X100 Macrophage X400 Milieu seul

Zymographie Une zymographie consiste à détecter les enzymes dans un milieu grâce à leur activité. Quelle est l’activité de l’enzyme ? → Il se nourrit de peptidoglycane. Attaque de la paroi par le lysozyme Paroi bactérie (peptidoglycane)

Expériences L’électrophorèse consiste à séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire (leur taille), grâce a un courant électrique.

Expériences Pour l’électrophorèse, il faut faire un gel où les protéines migreront à cause de la charge électrique. Dans le gel, on met du peptidoglycane. Gel contenant du peptidoglycane

Les conditions : - Témoin négatif (milieu sans macrophage) - Témoin positif (lysozyme pur) Milieu macrophage

Résultats Bande transparente qui prouve la présence du lysozyme et de son activité.

POURQUOI ? Analyse du résultat Les protéines ont migré, car on peut voir la présence de bandes colorées. Il y a des bandes dans tous les puits. Les bandes sont de taille différente donc il n’y a pas la même quantité de lysozyme dans tous les puits. POURQUOI ?

L’expérience doit donc être refaite INTERPRETATION Hypothèse 1 : Il y a du lysozyme dans tous les puits ( contamination). Hypothèse 2 : En pipetant, les protéines ont débordé. Hypothèse 3: Il y avait déjà dulysozyme dans le milieu témoin. Il faudrait ajouter du témoin négatif eau. L’expérience doit donc être refaite

Marqueurs de taille Lysozyme Milieu seul Eau Macrophages 180 kDa

ANALYSE (GEL2) Les protéines ont migré, car on peut voir la présence de bandes colorées Il n’y a pas de bandes dans le puits eau ni dans le puits du milieu seul. Il y a des bandes dans le puits du lysozyme (témoin positif) Nous voyons des bandes dans le puits du milieu des macrophages, donc il y du lysozyme.

CONCLUSION Les macrophages secrètent du lysozyme.