Les réponses macro et micro-circulatoires et la production de NO hépatique induits par le choc septique chez la souris. Edouard LEROY L3 (S6) Licence Sciences et Technologies mention Biologie, parcours Physiologie UE « conduite de projet » Maître de stage : Jeanne-Marie Bonnet-Garin1 Tuteur universitaire : Robert Bonvallet2 1ENVL laboratoire de Physiologie, INSERM ERI 22 : Agressions vasculaires et réponses tissulaires. 1,avenue Bourgelat 69280 Marcy l'Etoile 2UCBL Batiment Raphael Dubois 43 Boulevard du 11 NOVEMBRE 1918 69622 VILLEURBANNE CEDEX

Problématique - contexte théorique : Sepsis = réponse systémique à une infection bactérienne, endotoxique ou fongique Choc septique = défaillance circulatoire aiguë Pronostic vital = sombre : hypotension général et baisse de la perfusion des organes résistantes aux solutés de remplissage et aux dérivés adrénergiques Monoxyde d’azote (NO) impliqué : 3 NO synthases dont 1 inductible. La NOS inductible s’active lors du sepsis Perrella et al. : TGF-β permettrait de diminuer les effets délétère du NO Etude sur les effets du TGF-β (thèse en cours de rédaction) Première partie : réponses marcro et micro-circulatoires et la production de NO hépatique induites par le choc septique chez la souris, provoqué par une administration de LPS

Hypothèses : L’administration de lipopolysaccharides (LPS), endotoxines de bactéries à Gram négatif, provoque un sepsis puis un choc septique. Le sepsis puis le choc septique provoque une diminution du débit. La cinétique de la chute de débit n’est pas la même au niveau de la circulation générale et de la perfusion tissulaire. La production de NO hépatique augmente après l’administration de LPS.

Méthodes Procédure chirurgicale

Anesthésie : Isoflurane/O2 Induction : richesse du mélange à 2% Entretien : richesse du mélange à 0,6%

Préparation chirurgicale : Installation Laparotomie

Appareillage de l’animal : Dilacérer le péritoine Installer la sonde débitmétrique Animation à revoir

Induction du choc septique Administration de LPS (QSP 0,1 mL) : G1 (n=3) : 60 mg/kg G2 (n=2) : 80 mg/kg G3 (n=3) : 100 mg/kg Administration de sérum physiologique (NaCl 9‰) : G0 (n=4) : 0,1 mL

Paramètre enregistré : Le débit aortique

Tests statistiques : Kruskal-Wallis : test d’identité non paramétrique (pour plus de 2 échantillons) Mann-Whitney : test d’identité non paramétrique (pour 2 échantillons) À faire pêter si nécessaire

Résultats : Durée de la survie des animaux Évolution du débit aortique en fonction du temps après administration du produit (sérum physiologique ou LPS)

Durée de la survie des animaux après administration de LPS G1 : 74 min ± 9 G2 : 68 min ± 7 G3 : 64 min ± 17 Résultats présentés : moyennes ± SEM (Standard Error of the Mean = écart type ÷ racine carré de l’effectif) Figure 1. Tableau présentant les durées de survie des animaux après l’administration de LPS et en fonction de la dose de reçue.

Réponse macro-circulatoire à l’administration de LPS * * *

Discussion Modèle animale : L’anesthésie : est induite rapidement provoque un faible biais (12 % ± 7 de diminution observée dans le groupe témoin) Les effets du LPS sont observés rapidement Le coût initial et d’entretien est faible Il est possible d’obtenir des animaux transgéniques pour effectuer des investigations plus poussées sur la voie du TGF-β

Intérêt des lipopolysaccharides : Effets systémiques rapides Effets durables entrainant la mort de l’animal Choix anesthésique : Induction avec une richesse du mélange Isoflurane/02 à 2 % Entretien avec une richesse du mélange Isoflurane/02 à 0,6 % => Richesse plus faible que dans la littérature (sans diminuer le confort de l’animal) permet de diminuer le biais dû aux effets de l’Isoflurane

Avancées et perspectives Intérêt du modèle murin confirmé Intérêt du LPS confirmé Protocole anesthésique affiné Perspectives : Résultats, en parallèle, de la perfusion hépatique Résultats de la production de NO hépatique Utilisation de souris KO pour le TGF-β dans certains tissus Test d’un médicament (Tamoxifène®) activateur de la voie du TGF-β Amélioration du pronostic vital des patients en état de choc septique

MERCI DE VOTRE ATTENTION