LA CYTOMÉTRIE EN FLUX Par Serge Sénéchal

Comment définir la Cytométrie en flux ? La Cytométrie en flux est une technologie qui nous permet de mesurer simultanément de multiples caractéristiques physiques d’une cellule. Le cytomètre enregistre le comportement de la cellule quand celle-ci passe devant le laser en mesurant: 1- La diffusion de la lumière incidente 2- L’émission de la fluorescence

Un Cytomètre est une combinaison de 3 différents systèmes : 1) Système fluidique : Flux laminaire qui permet aux cellules en suspension de passer une à une devant le laser. 2) Système optique : Rayon laser et différents filtres qui permettent de sélectionner les longueurs d’ondes appropriées. 3) Système électronique : PMT qui capte la lumière émise,digitaliseur qui la transforme en signal électrique puis en signal numérique et finalement l’ordinateur qui gère et entrepose les données.

Les renseignements transmis par le cytomètre à propos des cellules sont: 1- Sa taille relative (FSC) 2- Sa granularité relative (SSC) 3- L’intensité de la fluorescence émise (Fl) SSC FSC

Filtre: Passe-haut 480 500 520 LP 500

Filtre: Passe-bas 480 500 520 SP 500

Filtre: Passe-bande 460 480 500 520 540 500/40

Pics d’émission de fluorescence de différents fluorochromes

Veine liquide d’entraînement Tri cellulaire Laser Veine liquide d’entraînement - Plaques de déflexion + Tube de collecte Non sélectionnées

Cytométrie en flux Laser FSC SSC FL2 FL1 Diode PMT PMT Filtres PMT Miroirs dichroïques PMT SSC PMT FL2 Filtres FL1 PMT

Perspectives d’avenir Des appareils encore plus performants sont déjà sur le marché: Des analyseurs avec 3 ou même 4 différents lasers nous permettant de détecter jusqu’à 8 fluorescences (couleurs) simultanément sur la même cellule. Des trieurs encore plus rapides avec une vitesse atteignant 60,000 évènements/seconde. Des tris à 4 voies donc, possibilité de trier 4 sous-populations cellulaires en même temps, à partir du même échantillon. Ces appareils peuvent lire jusqu’à 15 paramètres différents (FSC + FL1 à FL14). Un système électronique digital au lieu d’analogique qui nous donne une plus grande sensibilité et une plus grande précision. L ‘apparition de nouveaux fluorochromes conjugués à différents anticorps et des ordinateurs toujours plus puissants pour gérer le tout.

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