ANATOMIE ET CYTOLOGIE PATHOLOGIQUES EN CANCEROLOGIE Introduction Technique « standard » (différentes étapes) Examen extemporané Technique immunohistochimique

PATHOLOGISTE Rôle diagnostique et pronostique Pathologie tumorale: Bénin/Malin Tumeur maligne: DIAGNOSTIC POSITIF classification histopronostique (TNM) BILAN PRETHERAPEUTIQUE

PATHOLOGISTE Biopsie Pièces d’exérèse chirurgicale Examen extemporané Examen histologique standard Prélèvement cytologique Nécropsie

EXAMEN HISTO-PATHOLOGIQUE « STANDARD » Différentes étapes Fixation/Congélation en banque Enregistrement du prélèvement Inclusion en paraffine Coupe du bloc inclus en paraffine Coloration (Hématoxyline-phloxine-safran, HPS) Examen microscopique Rédaction du compte-rendu Archivage des lames, des blocs d’inclusion et du double du compte-rendu

CONGÉLATION Pratiquée de plus en plus souvent Fragment tissulaire choisi par le pathologiste sur une pièce opératoire Congélation dès que possible (minuté) Vise à conserver intacts les acides nucléiques, les protéines, les germes,… Stockage en azote liquide (-196°C) ou en congélateur (-80°C) Utile pour les soins et la recherche

FIXATION La pièce opératoire ou la biopsie fraîches seront adressées immédiatement à la structure d’anatomie pathologique où elle sera prise en charge. Si la pièce doit être fixée sur place, l’ouvrir pour bien la fixer et la plonger dans 15 fois son volume de fixateur (protocole à établir avec le pathologiste). Les fixateurs sont des produits très toxiques. Ne pas mettre les pièces dans du sérum physiologique ou de l’eau, de l’alcool...

MACROSCOPIE Après fixation de 12 à 24H (parfois délai supplémentaire de décalcification), des prélèvements systématiques et dans les zones pathologiques sont réalisés sur la pièce opératoire (2,5 cm de côté, 3 mm d’épaisseur): Limites de résection Tumeur ou autre lésion Ganglions du curage Parenchyme à distance

Curage Mammectomie

Couper la pièce en tranches fines Cancer Encrer les limites d’exérèse Cancer

Dissection du curage

Tumeur Mamelon Prélèvements systématiques au niveau des différents quadrants Zone de mastopathie Curage

TECHNIQUE STANDARD Inclusion en paraffine Déshydratation dans bains d’alcool Eclaircissement en bains de toluène Imprégnation en paraffine à 56°C 1 2 3

TECHNIQUE STANDARD Inclusion en paraffine Bloc refroidi, confère rigidité au prélèvement permettant de le couper au microtome

TECHNIQUE STANDARD Coupe de 4m étalée sur lame Passage dans bains de toluène, d’alcool et d’eau (déparaffinage, réhydratation) Coloration par l’HPS

TECHNIQUE STANDARD Examen microscopique Elaboration du compte-rendu Frappe du compte-rendu Envoi du compte-rendu Archivage

COMPTE-RENDU (PATHOLOGIE TUMORALE) Identification du patient, N° propre au Service Description macroscopique (Description des prélèvements) Description histologique Conclusion Type histologique de la tumeur Taille Limites de résection chirurgicales Métastases ganglionnaires Grading histopronostique (pTNM,…)

DELAIS DE REPONSE Acheminement du prélèvement Fixation Techniques standard Examen microscopique Rédaction, frappe du compte-rendu Acheminement du compte-rendu En pratique : Réponse en 24H minimum pour les biopsies et 48H pour les pièces opératoires 0 à 72H 6 à 48 H 4 à 16H 1 à 48H 0 à ?H

EXAMEN EXTEMPORANE Diagnostic histopathologique rapide En cours d’intervention chirurgicale Dans le but de modifier le geste chirurgical Technique « grossière » Réponse « grossière » Bénin/Malin (Douteux…) Taille de la tumeur (macroscopique) Limites

EXAMEN EXTEMPORANE 1. Prélèvement sur la pièce fraîche 2. Collée sur un plot 3. Congélation rapide à -30°C 1 3 2

EXAMEN EXTEMPORANE 4. Coupe au cryostat (20 m) 5. Etalement sur la lame 6. Coloration express au bleu de toluidine 7. Lecture au microscope 8. Communication du résultat (en 5’) 4 6

CYTOLOGIE Techniquement plus simple: Inconvénients : Applications : Fixation instantanée Pas d’inclusion en paraffine, mais dépôt sur lame Coloration Examen Inconvénients : Pas d’architecture tissulaire Peu de techniques complémentaires possibles Applications : Dépistage (frottis du col utérin) Trépied diagnostique : clinique, imagerie, cytologie (sein) Ponction diagnostique à l’aiguille fine (FNAB) Liquides organiques : extension de cancers

IMMUNOHISTOCHIMIE Mises en évidence d’antigènes sur les préparations à l’aide d’anticorps spécifiques, révélés par une technique d’immunoperoxydase indirecte.

IMMUNOHISTOCHIMIE Ac secondaire biotinylé Incubation de l’Ac primaire (Ac souris) (30’ dans tampon PBS/BSA) Incubation de l’Ac secondaire (Ac lapin anti-souris) biotinylé (8’ dans tampon PBS/BSA) Ac primaire Ag Prélèvement Lame

IMMUNOHISTOCHIMIE Ac secondaire biotinylé Application des complexes Streptavidine-Peroxydase (forte affinité avec la biotine) Complexe streptavidine peroxydase Ac primaire Ag Prélèvement Lame

Complexe streptavidine peroxydase IMMUNOHISTOCHIMIE Révélation avec la Diaminobenzidine (chromogène qui réagit avec la peroxydase en présence d’eau oxygénée pour donner un produit coloré visible en MO) Contre-coloration à l’hématoxyline de Meyer) Ac secondaire biotinylé DAB DAB DAB Ac primaire Ag Prélèvement Lame

Anticorps anti-cytokératine

IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt Tumeur indifférenciée Carcinome (marqueurs épithéliaux: Cytokératine, EMA) Mélanome (marqueurs mélanocytaires: PS100, HMB-45, Melan-A) Sarcome (marqueurs musculaires: actine, desmine, marqueurs vasculaires: CD31, CD34, marqueurs nerveux: PS100) Lymphome (marqueurs lymphoïdes: CD3 (marqueur T), CD20 (marqueur B).

Tumeur thyroïdienne indifférenciée CD45 - (marqueur lymphoïde) PS100 - (marqueur mélanocytaire) Cytokératine + (marqueur épithélial)

IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt Différenciation particulière Carcinome: différenciation endocrine (Ac antichromogranine, Ac anti-synaptophysine) Lymphome: Typage (lymphome B, T, anaplasique, maladie de Hodgkin) Recherche de micrométastases d’un carcinome

CD20 - CD3 - CD30 + CD15 + MALADIE DE HOGKIN

IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt Différenciation particulière Carcinome: différenciation endocrine Lymphome: Typage (lymphome B, T, anaplasique, maladie de Hodgkin) Recherche de micrométastases d’un carcinome

Ganglion axillaire (curage d’un carcinome lobulaire du sein) Métastase ganglionnaire CK

IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt Signes d’infection virale CMV, EBV Recherche de facteurs pronostiques Récepteurs hormonaux (RO, RP) Marqueurs thérapeutiques (CD20 pour les lymphomes B, C-erbB-2 pour les cancers du sein, c-kit pour les tumeurs stromales)

Carcinome lobulaire du sein RO+ C-erbB-2 - RP+

C-erbB-2

AUTRES TECHNIQUES Hybridation in situ Applique sur lame de sondes d’ADN ou d’ARN monocaténaire marquées, complémentaires de séquences d’ADN ou d’ARN que l’on recherche sur la coupe Révélation par autoradiographie Révélation histoenzymologique (sonde EBER pour le virus EBV)

T G G A G G A C G A C A G T A G G Sonde marquée C A A G A A G T A G C

Au total Diagnostic Classification histopronostique Bilan pré-thérapeutique