Labo de Microbiologie (BIO 3526)

Mes coordonnées Enseignant : John Basso Courriel : jbasso@uottawa.ca Bureau : Bioscience 102 Tél. : 613-562-5800 poste 6358 Page web : http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/accueil.htm

Mes disponibilités Courriel : Tél. : Toute la semaine avant 5h LUN - VEN : 9-5

Évaluation du cours Quiz Devoirs 20% 2 Rapports 10% Mi-session 25% 2 points boni pour 100% sur 4/8 quiz Devoirs 20% 2 Rapports 10% Mi-session 25% Présentations 3MT 10% Examen pratique En labo 5% Entrevue 5% Examen final 25%

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Travailler dans le labo de microbiologie

Au début du labo Se laver les mains aussitôt que vous entrez dans le laboratoire Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle

Avant de commencer – À la fin Faire la désinfection de votre espace de travail Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement

Avant de quitter le labo Se laver les mains avant de quittez le laboratoire Aide à prévenir la contamination de l’environnement

Travailler en Microbiologie Technique Stérile

Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile Milieu de culture Éprouvettes Assiettes de Pétris Boucle d’ensemencement/inoculation Etc.

Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes Préviens la contamination de vos cultures Préviens la contamination de votre environnement Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

Transferts par la Technique Stérile Stériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle d’ensemencement

Transferts par la Technique Stérile Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle d’inoculation Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

Transferts par la Technique Stérile Chauffer l’ouverture du tube au bruleur Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Garder l’ouverture du capuchon vers le bas Réchauffement de l’ouverture

Transferts par la Technique Stérile Utiliser la boucle stérile pour retirer l’inoculum Liquide de bouillons Solide de géloses Solide de pentes Retirer l’inoculum

Transferts par la Technique Stérile Chauffer l’ouverture du tube au bruleur encore une fois! Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Réchauffement de l’ouverture

Transferts par la Technique Stérile Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

Transferts par la Technique Stérile Inoculation Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube Retirer capuchon Chauffer l’ouverture Inoculer Fermer le tube

Travailler avec des solutions

Définitions Solution Mélange de 2 substances ou plus dans une phase unique Solution composée de deux composantes Le soluté Partie qui est dissoute ou diluée – Habituellement la plus petite quantité Le solvant (ou Diluent) Partie de la solution dans laquelle le soluté est dissout – Habituellement le plus grand volume

Concentrations Concentration = Quantité de soluté Quantité de solution (Pas solvant) Quatre façons d’exprimer les concentrations: Concentration Molaire (Molarité) Pourcentages Masse par volume Rapports

Molarité No de Moles de soluté/Litre de solution Masse de soluté/PM de soluté = Moles de soluté Moles de soluté/vol en L de solution = Molarité

Pourcentages Les concentrations en pourcentage peuvent être exprimé en tant que : V/V – volume de soluté/100 ml de solution m/m – Masse de soluté/ 100g de solution m/V – Masse de soluté/100 ml de solution Tous représentent des fractions de 100

Pourcentages (suite) %V/V % m/V % m/m Ex. 4.1L soluté/55L solution =7.5% Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas! % m/V Ex. 16g soluté/50ml solution =32% Dois avoir des unités du même ordre de grandeur en haut et en bas! % m/m Ex. 1.7g soluté/35g solution =4.9%

Masse par volume Une quantité de masse par un volume Ex. 1kg/L Connaître la différence entre une quantité et une concentration! Dans l’exemple ci-dessus 1 litre contient 1kg (une quantité) Quelle quantité retrouverait-on dans 100ml? Quel est le pourcentage (m/v) de cette solution? 100g 100%

Les Rapports Façon d’exprimer la relation entre différents constituants Exprimé d’après le nombre de parties de chaque composante Ex. 24 ml de chloroforme + 25 ml de phénol + 1 ml d’isoamylalcool Donc 24 parties + 25 parties + 1 partie Rapport: 24:25:1 Combien de parties au total? 50

Réduire une Concentration Une Fraction Les Dilutions Réduire une Concentration Une Fraction

Dilutions Dilution = produire des solutions plus faibles à partir de solutions plus fortes Exemple : Faire du jus d’orange à partir de concentré. Mélanger une cannette de jus d’orange concentré avec trois (3) cannettes d’eau

Dilutions (suite) Les dilutions sont exprimées comme une fraction du nombre de parties du soluté sur le nombre total de parties de la solution (parties de soluté + parties de solvant) Dans l’exemple du jus d’orange, la dilution serait exprimée comme 1/4, pour une cannette de jus (1 partie) à un TOTAL de quatre parties de solution (1 partie de jus + 3 parties d’eau)

Un autre exemple Si vous diluez 1 ml de sérum avec 9 ml de saline, la dilution serait écrite 1/10 ou dite « un dans dix », car vous exprimez le volume de la solution étant diluée (1 ml de sérum) par le volume final TOTAL de la dilution (10 ml totaux).

Un autre exemple  Une (1) partie d’acide concentré est diluée avec 100 parties d’eau. Le volume total de la solution est 101 parties (1 partie d’acide + 100 parties d’eau). La dilution est écrite comme 1/101 ou dite “un dans cent un ”.

Dilutions (suite) Les dilutions sont toujours une fraction qui décrit la relation d’UNE partie de soluté sur un nombre total de parties de solution Donc le numérateur de la fraction doit être 1 Si plus d’une partie de soluté est diluée, vous devrez transformer la fraction

Exemple La dilution est exprimée comme étant 1/5 Deux (2) parties d’un colorant sont diluées avec huit (8) parties de solvant Le nombre de parties total de solution est 10 parties (2 parties de colorant + 8 parties de solvant) La dilution est initialement exprimée comme 2/10 Pour transformer la fraction afin d’avoir un numérateur de un, utilisez une équation de rapport et de proportion : La dilution est exprimée comme étant 1/5

Problème Deux parties de sang sont diluées avec cinq parties de saline Quelle est la dilution? 10 ml de saline sont ajoutés à 0,05 L d’eau 2/(2+5) = 2/7 =1/3.5 10/(10+50) = 10/60=1/6

Problème : Plus d’un ingrédient Une partie de saline et trois parties de sucre sont ajoutées à 6 parties d’eau Quelles sont les dilutions Comment est-ce que vous prépareriez 15mL de cette solution? Exprimer chaque composante sur le même dénominateur commun! Saline: 1/(1+3+6) = 1/10 Sucre: 3/(1+3+6) 3/10 = 1/3.3 Saline: 1/10 + Sucre 3/10 = 1.5/15 + 4.5/15

Dilutions en Série Dilutions faites à partir de dilutions Les dilutions sont multiplicatives Ex. A1: 1/10 A2: 1/4 A3: 0.5/1.5 = 1/3 La dilution finale de la série = (A1 X A2 X A3) = 1/120

Le Facteur de Dilution Représente l’inverse de la dilution Exprimé comme le dénominateur de la fraction suivi de “X” EX. Une dilution de 1/10 représente un facteur de dilution de 10X Le facteur de dilution permet de déterminer la concentration originale Conc. finale X le facteur de dilution = conc. initiale

Déterminer la fraction requise (La Dilution) Qu’est que j’ai Qu’est que je veux Déterminer le facteur de réduction (Le facteur de dilution) = Ex. Vous avez une solution de 25 mg/ml et vous voulez obtenir une solution de 5mg/ml Donc le facteur de réduction est de: 25mg/ml 5mg/ml = 5 (Facteur de dilution) La fraction est égale à 1/le facteur de dilution= 1/5 (la dilution)

Déterminer les quantités requises Ex. Vous désirez 55 ml d’une solution qui représente une dilution de 1/5 Utilisez une équation de rapport et de proportion: 1/5 = x/55 = 11/55 Donc 11 ml de soluté / (55 ml – 11 ml) de solvant = 11 ml de soluté / 44 ml de solvant

Problème Préparer 25mL d’une solution de 2mM à partir d’un stock de 0.1M Quel est le facteur de dilution requis? Quelle est la dilution requise? Quelles volumes de solvant et de soluté sont requis? 50 1/50 Soluté 0.5ml Solvant 24.5ml

Problème Combien d’une solution de HCl de 10M est-ce que vous devez ajouter à 18mL d’eau afin d’obtenir une solution de 1M? Quelle est la dilution requise? Quels volumes de solvant et de soluté sont requis? 1/10 1 partie Soluté / 10 parties de Solution 1 partie Soluté / 1 partie Soluté + 9 parties Solvant Donc 9 parties de solvant = 18mL ou 1 partie = 2mL