ImmunoCAP© ISAC : interest in allergy diagnosis. Phn. Romy GADISSEUR, Prof. J-P. Chapelle, Phn. Biol. E. Cavalier - CIRM - 28/04/2009 -

Allergie : Définition…   “ Allergie ”   Maladie due à une réponse inadaptée et excessive de notre organisme vis à vis de l’environnement : des substances étrangères et normalement inoffensives entraînent une réaction de défense de notre système immunitaire, nuisible à l’organisme. 4th chronic disease (OMS). Child allergic asthma = 1st chronic disease . +/- 30% allergic. Cost for healthcare systems +++. Allergies x 2 the last 15 years in developed nations !!

Atopie : Définition… “Atopie” Prédisposition héréditaire à produire des IgE en réponse à des faibles doses d’allergènes et développer des manifestations d’hypersensibilité immédiate (asthme, rhinoconjonctivite, eczéma, dermatite). 1 parent allergique = risque d’allergie > 30% chez l’enfant. 2 parents allergiques >50 %.

Hypersensitivity : Definition… Causes objectively reproducible symptoms or signs, initiated by exposure to a defined stimulus at a dose tolerated by normal subjects.

Hypersensibilités : Classification de Gell et Coombs (I) Hypersensibilité de type 1 (H. immédiate, allergie réaginique ou atopique) : Immunité humorale = Allergie. Médiée par les IgE spécifiques d’un allergène (IgE dépendante). Tendance héréditaire. Manifestations cliniques diverses (dermatite allergique, rhinite pollinique). Apparaissent en quelques minutes. Les IgEs fixées sur les mastocytes tissulaires et sur les basophiles sanguins, réagissent avec l’Ag (allergène), induisant ainsi la dégranulation de ces cellules (libération d’histamine et d’autres médiateurs). 1975 Médiée par les IgE spécifiques d’un allergène Manifestations cliniques diverses eczema, anaphylaxie, asthme L'allergie est un phénomène qui s'amplifie au cours des stimulus, surtout en l'absence de traitement et/ou prévention, provoquant: - des manifestations cliniques de plus en plus sévères (aggravation des signes, pouvant aller jusqu'à un choc A en ce qui concerne l'HS1). - une augmentation progressive du nombre d'allergènes auquel l'individu réagit (poly-sensibilisation), surtout chez un individu atopique. Il est important de sensibiliser le propriétaire d'un animal à cet aspect, car plus la prise en charge est précoce, plus elle est efficace. Une caractéristique principale de l'HS est son caractère individuel: seuls certains individus développeront une HS (alors que la majorité des individus soumis au même problème ne développeront pas d'allergie ou de complication). 2 raisons peuvent l'expliquer: - les conditions d'apparition d'une HS lors de stimulations antigéniques répétées sont complexes et mal connues (dose antigénique, durée et nombre de contacts, facteurs favorisants???): un grand nombre de mécanismes immuns sont modifiés au cours de l'HS sans qu'il soit facile de faire la part des choses (production de nombreuses cytokines, activation de sous-types lymphocytaires..). Une prédisposition génétique à développer certains types de réponse immune a été observée en particulier dans le cas de l'HS1 (atopie).

Hypersensibilité type 1 Fixation des anticorps IgE sur la membrane du mastocyte (ou du basophile), Fixation des antigènes sur les anticorps cytophiles, Dégranulation du mastocyte (ou du basophile). NB : Pas d’intervention du complément. Manifestations cliniques : Choc anaphylactique, arthrose, rhinite, conjonctivite, urticaire, troubles digestifs, (eczéma).

IgE dependant activation of mastocytes Allergens IgE FceRI Immediate release Granule contents: Histamine, TNF-, Proteases, Heparin Over hours Cytokine production: Specifically IL-4, IL-13 Over minutes Lipid mediators: Prostaglandins Leukotrienes Sneezing Nasal congestion Itchy, runny nose Watery eyes Mucus production Eosinophil recruitment Wheezing Bronchoconstriction

Hypersensibilités : Classification de Gell et Coombs (II) Hypersensibilité de type 2 (hypersensibilité cytotoxique): La réaction intervient entre les Ac IgG ou IgM, et les Ag fixés sur la membrane des cellules reconnues comme étrangères. Réactions transfusionnelles, maladies hémolytiques auto-immunes, maladie hémolytique du nouveau-né. Hypersensibilité de type 3 (hypersensibilité semi-retardée) : Les symptômes apparaissent quelques heures après le contact avec l’antigène, en cas d’exposition aiguë. Présence du complexe immuns Ag/Ac type IgG avec activation du complément. Polyarthrite rhumatoïde, glomérulonéphrite, Lupus E.D. Hypersensibilité de type 4 (immunité cellulaire exacerbée ou retardée) : Manifestations cliniques apparaissant dans les 48-72h après le contact avec l’antigène, en cas d’exposition aiguë. Rejet de greffe, allergie de contact (cosmétiques, produits chimiques, réaction au test tuberculinique) Tests diagnostics : Tests épicutanés retardés (patch tests) Médiée par les IgE spécifiques d’un allergène Manifestations cliniques diverses eczema, anaphylaxie, asthme L'allergie est un phénomène qui s'amplifie au cours des stimulus, surtout en l'absence de traitement et/ou prévention, provoquant: - des manifestations cliniques de plus en plus sévères (aggravation des signes, pouvant aller jusqu'à un choc A en ce qui concerne l'HS1). - une augmentation progressive du nombre d'allergènes auquel l'individu réagit (poly-sensibilisation), surtout chez un individu atopique. Il est important de sensibiliser le propriétaire d'un animal à cet aspect, car plus la prise en charge est précoce, plus elle est efficace. Une caractéristique principale de l'HS est son caractère individuel: seuls certains individus développeront une HS (alors que la majorité des individus soumis au même problème ne développeront pas d'allergie ou de complication). 2 raisons peuvent l'expliquer: - les conditions d'apparition d'une HS lors de stimulations antigéniques répétées sont complexes et mal connues (dose antigénique, durée et nombre de contacts, facteurs favorisants???): un grand nombre de mécanismes immuns sont modifiés au cours de l'HS sans qu'il soit facile de faire la part des choses (production de nombreuses cytokines, activation de sous-types lymphocytaires..). Une prédisposition génétique à développer certains types de réponse immune a été observée en particulier dans le cas de l'HS1 (atopie).

Hypersensibilités : Classification de Gell et Coombs Intolérances Une intolérance alimentaire est le termes destinés à désigner une anomalie de l’organisme dans sa capacité à digérer un composant alimentaire. C’est donc un terme général qui décrit une réponse physiologique anormale à l’ingestion d’une substance alimentaire. Contrairement à l’allergie, cette réaction ne fait pas intervenir un processus immunologique. Il s’agit souvent d’une anomalie acquise génétiquement. Les symptômes de l’intolérance sont souvent de type gastro-intestinaux, mais peuvent dans certains cas être d’origine cutanée,.... Cependant, la majorité des patients sont asymptomatiques.

Allergènes, Différentes classes Pneumallergène Pollens de graminées, d’herbacées, d’arbres, microorganismes, animaux, acariens, mélanges d’aéroallergènes. Intérieur Animaux domestiques, moisissures (Penicillium, aspergillus) & acariens Extérieur Moisissures (Alternaria cladosporium) & pollens Trophallergène (du grec« trophê » = nourriture) D’origine animale lait, œuf, poisson, crustacés… D’origine végétale Fruits à pépins, noyaux Arachide Fruits exotiques Venins et insectes Venins d’hyménoptère Guêpe & abeilles Médicaments Parasites Allergènes professionnels

Timeline…allergy diagnosis Standardization of allergen extracts Characterization & designation of IgE Recombinant allergen panels recreating allergen extracts ImmunoCAP ISAC (Phadia/ VBC Genomics) First allergens cloned First allergen microarray Provocation tests (SPT) RAST 1880 1967 1988-91 1995-99 2000 2008 Simplified overview of the historical development of allergy diagnosis and treatment. IN-VIVO testing IN-VITRO testing Component – Resolved -Diagnostics

Diagnostic d’une allergie Consultation spécialiste en Immuno-Allergologie. Tests cutanés : Par injection intradermique Quantification des IgE sériques Les tests immédiats : réalisés le plus souvent par" prick tests" : une goutte de liquide est déposée sur l’avant bras ou sur le dos et l’allergologue appuie dessus pour qu’elle entre en contact net avec l’épiderme. En cas de sensibilisation à la substance testée, le test réagira en faisant comme un bouton d’ortie : une petite bosse au milieu appelée papule et une rougeur autour appelée érythème. Ces tests sont effectués pour les substances de l’air et les aliments. Ces test sont TOUJOURS réalisés avec des "tests témoins" : l’un négatif qui sert à vérifier que la peau ne réagit pas uniquement à la pression du prick (dermographisme), l’autre positif qui sert à vérifier que la peau est actuellement capable de réagir correctement et qui permet de classer l’importance de la sensibilité. Les tests retardés permettent de tester la réactivité "retardée" de la peau (inflammation du type de l’eczéma) ils sont souvent réalisés pour le diagnostic de l’eczéma ou des conjonctivites, de plus en plus également dans l’urticaire chronique. Les tests sont posés sur la peau (en général du dos) pendant 48 à 72 heures et leur résultat est alors lu par l’allergologue. Leur interpréation nécessite beaucoup d’expérience car il existe des effets autres que ceux de l’allergie (effet "savon", toxicité, etc...). Ces tests sont réalisés pour les substances chimiques, l’environnement aérien et les aliments.

IgE totales Indication : Le dosage des IgETot n'est pas un test de première intention pour le diagnostic de l’atopie. Pas un bon marqueur de prédiction de survenue de dermatite atopique chez les jeunes enfants. Facteurs individuels faisant varier le taux des IgETot : Age (↑<15 ans puis stable puis , composante génétique, degré d'exposition à l'allergène. Autres affections modifiant le taux des IgETot : Parasitoses, déficit immunitaires, infections virales et bactériennes.

IgE spécifiques Intérêt diagnostique : Méthodes de dosage : Dosage d’IgEs isolé renseigne une sensibilisation à un allergène donné et peut donc permettre d’identifier les produits allergéniques : Pas nécessairement un contexte d’hypersensibilité de type I. Mais contexte clinico-biologique (à confronter à la clinique et aux SPT). Méthodes de dosage : Radio-isotopiques (RAST = Radio AllergoSorbent Test ) ou immuno-enzymatiques. Ces tests sont coûteux : Limités par l'INAMI qui ne rembourse que 6 tests par prise de sang. La connaissance des différentes réactions croisées est indispensable (intérêt des recombinants).

Number according to the order of purification of proteins Allergens nomenclature according to the IUIS (International Union of Immunological Societies) t : tree f : food g : grass i : insect w : wheat c : cure d : dust mite m : moisture e : epithelia p : parasite k : (professional allergens) Empirical nomenclature t3 : Betula verucosa Bet v 1,2,4,6,7 g6 : Phleum pratense Phl p 1,…5,…7,…12 d1 : Dermatophag. pteronys. Der p 1, 2, 3, …10, … e1 : Felis domesticus Fel d 1, 2, 3, … f13 : Arachis hypogaea Ara h 1, 2, 3, …8, … Taxon genre « Recombinants » nomenclature (IUIS) Component resolved diagnostics (CRD) is already in use and will, in all likelihood, be an essential part of allergy diagnostics in the future. As each “allergen”, such as a species of pollen, a mite or a food, is in fact composed of a number of different molecules that may cause sensitisation, a much more precise and detailed picture of the patient’s sensitisation pattern can be obtained by measuring IgE-sensitisation to each of these components. This enables the clinician not only to identify the relevant allergen sources, but also to make much more accurate prognoses for the development of the disease, and to prescribe the best treatment for the individual patient. For example, currently it is possible to increase the precision by separating the traditional extracts into cross-reactive components and allergen source-specific components, which allows the source of those that are really generating the symptoms to be identified. This cannot be achieved either by extract-based in vitro diagnostics or by extract-based skin prick testing. Number according to the order of purification of proteins

Components Production

Components - Resolved Diagnosis (CRD) Affiner le diagnostic en recherchant une sensibilisation aux différentes protéines sensibilisantes d’une substance. Interest & new applications of « recombinants » More sensitive tests. Help the decision to undergo a specific immunotherapy. Prediction and understanding of the cross-reactions. Prediction of the risks and severity of symptom.

Components - Resolved Diagnostics (CRD) Interest & new applications of « recombinants » More sensitive tests. Help the decision to undergo a specific immunotherapy. Prediction and understanding of the cross-reactions. Prediction of the risks and severity of symptom.

Components - Resolved Diagnostics (CRD) Interest & new applications of « recombinants » More sensitive tests. Help the decision to undergo a specific immunotherapy. Prediction and understanding of the cross-reactions. Prediction of the risks and severity of symptom.

Components - Resolved Diagnostics (CRD) Interest & new applications of « recombinants » More sensitive tests. Help the decision to undergo a specific immunotherapy. Prediction and understanding of the cross-reactions. Prediction of the risks and severity of symptom.

Predict cross reactions PR-10 protein, Bet v 1 homologue A heat labile protein, cooked foods are often tolerated. Often associated with local symptoms such as oral allergy syndrome (OAS). Often associated with allergic reactions to fruit and vegetables in northern Europe. Cor a 1.01 Cor a 1.04 Gly m 4 Ara h 8 Dau c 1 Api g 1 Bet v 1 Pru p 1 Mal d 1 Pyr c 1 Pru ar 1 Pru av 1

Oral Allergy Syndrome (OAS) Oral Allergy Syndrome : allergic reactions that occur rapidly, within minutes of eating a trigger food. An itching or burning sensation in the lips, mouth, and/or pharynx. Associated to a sensitization in one or more proteins like PR-10 (Bet v 1-like) (birch). Hazelnut, 46% Apple, 39% Peach, 24% Cherry, 22% Nut, 21% Pear, 20% Almond, 19% Plume, 17% Brazil nut, 16% Potato, 15% Carrot, 13% Peanut, 10% Strawberry, 10% Orange, 9% Apricot, 7% PR-10 allergic reactions that occur rapidly, within minutes of eating a trigger food. The most common reaction is an itching or burning sensation in the lips, mouth, and/or pharynx. Allergies to a certain pollen are associated with OAS reactions to certain foods. For Alder pollen: almonds, apples, celery, cherries, hazel nuts, peaches, pears, parsley Birch pollen: almonds, apples, apricots, avocados, carrots, celery, cherries, chicory,[4] coriander, fennel, fig,[5] kiwifruit, nectarines, parsley, parsnips, peaches, pears, peppers, plums, potatoes, prunes, soy, wheat; Potential: hazel nuts, and walnuts Grass pollen: fig,[5] melons, tomatoes, oranges Mugwort pollen : carrots, celery, coriander, fennel, parsley, peppers, sunflower Ragweed pollen : banana, cantaloupe, cucumber, honey dew, watermelon, zucchini; Potential: Dandelions or chamomile tea Possible cross-reactions (to any of the above): berries (strawberries, blueberries, raspberries, etc), citrus (oranges, lemons, etc), grapes, mango, figs, peanut, pineapple, pomegranates, watermelon rBet v 1 rPru p 1 rGly m 4 rAra h 8 rApi g 1.01 rAln g 1 rCor a 1 nAct d 8 rMal d 1 rDau c 1

Predict cross reactions LTP (non-specific Lipid Transfer Protein, nsLTP) A protein stable to heat and digestion causing reactions also to cooked foods Often associated with systemic and more severe reactions in addition to OAS Often associated with allergic reactions to fruit and vegetables in southern Europe LTP Zea m 4 nPru p 3 rCor a 8 rPar j 2 nArt v 3 Ara h 9 Mal d 3 Zea m 4 Jug r 3 Cor a 8 Pru p 3 Pru av 3 Mal d 3 Ara h 9

Predict cross reactions Profilin Seldom associated with clinical symptoms but may cause demonstrable (OAS) or even severe reactions in a small minority of patients PFL rPhl p 12 rBet v 2 nOle e 2 rMer a 1 rHev b 8 rMal d 4 rPru p 4 nAct d 9 nAna c 1 nAra h 5 rMer a 1 Ara h 5 rBet v 2 rPhl p 12 profilin in cross-reactivity between Latex profilin and other plant profilins. rPhl p 12 rBet v 2 nOle e 2 rMer a 1 rMal d 4 rPru p 4 nAct d 9 nAna c 1 Fra a 4 nAra h 5 Cor a 2 rApi g 4 rDau c 2 rHev b 8 rMal d 4 Pru p 4

Predict cross reactions Storage protein Protein found in seeds serving as source material during the growth of a new plant Often stable and heat-resistant proteins causing reactions also to cooked foods rSes i 3 rBer e 1 Cor a 9 Ara h 1 Ara h 2 Ara h 3 nGly mβ-conglycinin nGly m glycinin

Predict cross reactions Lipocalins Very stable proteins Allergen components displaying limited cross-reactivity between species rFel d 4 rCan f 1 rCan f 2 Lipocalins nMus m 1 rCan f 1 rCan f 2 rFel d 4 nMus m

Predict cross reactions Parvalbumin A major allergen in fish A marker for cross-reactivity among different species of fish and amphibians A protein remarkable resistance to heat and digestion causing reactions also to cooked foods sensitizing agents for > 95% of fish allergic patients Parvalbumin rCyp c 1 rGad c 1 CARP rCyp c 1 COD rGad c1

Predict cross reactions Serum albumin A common protein present in different biological fluids and solids e.g. cows milk and beef, eggs and chicken. Heat labile protein. Cross-reactions between albumins from different animal species are well known, for example between cat and dog and cat and pork. BSA nBos d 6 nCan f 3 nGal d 5 Serum albumin nFel d 2 nBos d 6 nCan f 3 nEqu c 3 nGal d 5 Cav p GSA Gal d (meat) n Equ c 3 Cav p GSA Gal d (meat) nFel d 2

Predict cross reactions Tropomyosin An actin-binding protein in muscle fibers A marker for cross-reactivity between crustaceans, mites and cockroach Hom a 1 Crab cha f 1 Tropomyosin rPen a 1 n Pen i 1 n Pen m 1 rDer p 10 nBla g 7 rAni s 3 rDer p 10 rPen a 1 nPen i 1 nPen m 1 nBla g 7 rAni s 3

Microarrays VBC Genomics (expert in microarrays) and Phadia (expert in allergy tests) have combined “innovative biochip technology” with “cutting-edge research in molecular allergology” to develop ImmunoCAP® ISAC. Modern multiplex in vitro diagnostic tool for the allergy specialist, based exclusively on allergen components. Miniaturized immunoassay platform for measurement of sIgE antibodies to over 40 common allergen sources in a single step. 103 purified natural or recombinant allergen components immobilized on a solid support. Run CRD assays rapidly and cost-effectively. In order to run CRD assays rapidly and cost-effectively, some form of multiplexing technology is necessary, however. One must be able to process a large number of allergenic components in a single step, using only a small amount of blood. Multiplexing has already been used for some time in autoimmunity testing and now the technology is also available for allergy. ImmunoCAP ISAC, developed by VBC Genomics Bioscience Research LLC and marketed by Phadia AB, is a biochip-based allergy test that uses recombinant or purified allergen components. The technology requires only minute sample and reagent volumes and provides semi-quantitative results. Currently about 20μL of sample can be used to analyse more then 100 different components or antigens.

Immuno Solid-phase AllergenChip (ISAC) Allergen molecule Allergen-triplet after fluorescence-reaction Fluorescence-labeled secondary anti-human IgE IgE-antibody (in the patient’s serum) The allergen biochip is a solid substrate built from a glass plate that is chemically altered to retain allergenic protein molecules in a biologically active form. Picolitre quantities of each allergen preparation are deposited on spatially separate locations on the biochip. The resulting addressable microarray allows for many biological affinity reactions to be monitored in parallel (=multiplexing). In a single analytical step, the comprehensive allergen sensitisation profile of a patient can be measured using only a minute amount of serum or plasma; this is followed by automatic readout and report generation. The present chip used for in vitro diagnostics incorporates 103 allergens from about 50 different allergen sources. 4 reaction sites

Secondary fluorescence-labeled anti-human IgE antibody Wash buffer ImmunoCAP©ISAC A two-step assay +/- 1 Hour IgE antibodies from the patient serum bind to the immobilized allergen component. +/- 4 Hours Secondary fluorescence-labeled anti-human IgE antibody few minutes

Immuno Solid-phase Allergen Chip (ISAC) Test results are measured with a biochip scanner and evaluated using proprietary software. CapitalBio´s LuxScan dual laser scanner. No other special laboratory equipment needed. ImmunoCAP ISAC is a semi-quantitative test and results are reported in ISAC Standardized Units (ISU). Medical report generated Sent to the contracting medical practitioner. Typically, blood is taken by a medical practitioner or a diagnostic laboratory and serum is being produced by standard procedures. For ISAC, any standard method of serum preparation is compatible. Most importantly, the test can be performed with serum from capillary blood taken from the heel or the finger tip for the diagnosis of infants. After completion of the ISAC analysis, a medical report is generated and sent to the contracting medical practitioner.

Immuno Solid-phase Allergen Chip (ISAC)

Medical report generated Qualitative & Semi-quantitative results In northern and central Europe birch and related tree pollens are considered to be the main sensitizer and are often causing respiratory symptoms. The presence of PR-10 proteins in many plant foods often cause symptoms due to cross-reactivity. Many of these proteins are heat labile and cooked foods are often tolerated. Often associated with local symptoms such as oral allergy syndrome (OAS). Often associated with allergic reactions to fruit and vegetables in northern Europe. Classification by category of proteins Commentaries for a better interpretation

Medical report generated

Our 1st validation of the method 22 sera of patients Positive (>0.35 kUI/L) specific IgE (sIgE) tests for recombinant allergens (ImmunoCAP© 250 Phadia) and/or a clinical anamnesis of allergy and/or SPT. 17 sera : Positive sIgE for different kind of sources (latex, peanut, birch, timothy grass, hazelnut, peach, soja, cat or dog). In all, 136 sIgE for recombinant had been performed. 16 sera : Clinical history of the allergy thanks to an anamnesis of a clinician. Rhinitis, asthma, conjunctivitis, oral allergy syndrome, oedema, dermatitis, hives, colic or diarrhea. 9 sera : Skin Prick Tests (SPT). We managed a microarray determination on each serum. Then, we compared the results obtained with the sIgE, the SPT or the anamnesis. We selected 22 sera of patients on the basis of positive (>0.35 kUI/L) specific IgE (sIgE) tests for recombinant allergens (ImmunoCAP© 250 Phadia) and/or on the basis of a clinical anamnesis of allergy. Thus, 17 sera had positive sIgE for different kind of sources (latex, peanut, birch, timothy grass, hazelnut, peach, soja, cat or dog). In all, 136 sIgE for recombinant had been performed. We found out the clinical history of the allergy thanks to an anamnesis of a clinician for 16 of the selected patients. Symptoms were rhinitis, asthma, conjunctivitis, oral allergy syndrome, oedema, dermatitis, hives, colic or diarrhea. Nine patients underwent Skin Prick Tests (SPT) during the medical consultation. We managed a microarray determination on each serum. Then, we compared the results obtained with the sIgE, the SPT or the anamnesis. Results: The results of the ImmunoCAP© ISAC were similar to those of the SPT; the majority of the allergens tested had the same results on ISAC and on SPT (regarding positive and negative tests). Amongst the 136 sIgE against recombinant allergens tested, the ImmunoCAP© ISAC found 132 times concordant results. The ImmunoCAP© ISAC provided results in agreement with the anamnesis in all the 16 cases. For one patient, the ImmunoCAP© ISAC permitted to find out his allergy to a major allergen of peanut and of hazelnut. Thus, the clinician cancelled the planned oral provocation tests for peanut and hazelnut.

Our 1st validation of the method Results: The results of the ImmunoCAP©ISAC were similar to those of the SPT. Majority of the allergens tested had the same results on ISAC and on SPT (regarding positive and negative tests). Amongst the 136 sIgE (recombinant allergens) tested, the ImmunoCAP© ISAC found 132 times concordant results. The ImmunoCAP© ISAC provided results in agreement with the anamnesis in all the 16 cases.

Validation & Clinical Case U.M. (27 years old) Follow-up allergies. Symptoms : Colic & diarrhea After drinking milk or eating fat ? No problem with bread, fish Don’t eat any shellfish Rhinitis, prutitus, urticaria No problem with latex Dyspnea during exercise SPT : Positive +++ Dust mites, grass, birch + Pollens of ash and poplar, hazelnut, mustard Suspicious Peanut, soja, nuts. sIgE Peanut, soja, shrimp, wheat. Un plus

Clinical Case Clinician’s diagnosis & his decisions : Allergic rhinitis Due to acarians all the year and increased during birch pollinisation. Polysensitized to grass and to ash and birch pollens Diarhaea ? Suspiciously sensitized to Peanut, soja, shrimps, wheat and mustard. Probably due to “Cross-reactions” with birch (hazelnut, peanut, nuts & soja) No eviction needed. Real allergy to shrimps, mustard and wheat : Eviction ! Next step Oral provocation tests peanut, hazelnut.

Clinical Case Results of ImmunoCAP© ISAC PR-10 (Bet v 1-like) : Bet v 1 - Pru p 1 - Aln g 1 - Cor a 1,01 - Cor a 1,04 - Mal d 1 - Ara h 8 - Gly m 4 Dust Mites : Der p 1 - Der f 1 - Der p 2 - Eur m 2 -Der f 2 Pollens : Cyn d 1 - Phl p 1 - Phl p 4 - Ole e 1 - Pla a 2 - Cry j 1 - Cup a 1 - Mer a 1 Soja Gly m conglutin, Gly m 4 (PR-10) Saltwort Sal k 1 Hazelnut Cor a 1,04 (PR-10) – Cor a 8 (nsLTP) Peanut Ara h 8 (PR-10) – Ara h 1 (storage protein) Ana c 2 (CCD marker) Cor a 8 Ara h 1 Presence of specific IgE antibodies to Cor a 8 is a risk marker for potential severe reactions in patients with a suspected allergy to hazelnut. Among hazelnut-allergic individuals in the south of Europe, the predominant sensitization is to the lipid transfer protein Cor a 8. Cor a 8 is often associated with severe food allergic reactions to hazelnut, including anaphylaxis.

Conclusions of our first validation The ImmunoCAP© ISAC permitted to find out an allergy to a major allergen of peanut and of hazelnut (Ara h 1 & Cor a 8). Immediately, the clinician cancelled the planned oral provocation tests for peanut and hazelnut. It permitted to avoid a hazardous oral provocation test in an allergic patient. Very positive feedback of clinicians.

Advantages of ImmunoCAP© ISAC The results provided by the ImmunoCAP© ISAC allowed us to see, in a single analytical step, the allergen sensitization profile of the patients tested. Replicate (triplicate) array layout . CRD rapidly and cost-effectively. 20 μL of patient serum/plasma give complete results. We think that the ImmunoCAP© ISAC will have an essential role to play in the diagnosis and the management of complex patterns of sensitization.

Thank you for your attention !!