Dénturation/hybridation Population A Tester Population B Driver RNA RNA RT avec oligodT cDNA Dénturation/hybridation Excès de driver Clonage dans.

Slides:



Advertisements
Présentations similaires
F. Ducray (1), A. Idbaih (1,2), A. Reyniès (3), S. Lair (2), J
Advertisements

Virus de la VHD 40 nm ARN simple brin 7437 bases.
L'hybridation fluorescente (FISH)
. Surveillance de la rougeole
Technologie de l’ADN recombinant
I) Obtention de l’ADN recombinant
I) Obtention de l’ADN recombinant
Marqueurs génétiques Caractères (phénotypiques, biochimiques, moléculaires) polymorphes (entre individus, espèces, …) permettant - l’établissement de cartes.
Biologie Moléculaire des Hépatites Virales
Question. Compléter les phrases suivantes.
Transcription de l’ADN
Dans une cellule eucaryote:
Lambda Zap.
Les enzymes : outils de biologie moléculaire Enzymes de restriction: endonucléases Kinases: ajoutent un phosphate (P*) Phosphatases: retirent un phosphate.
ADN.
Virus manipulateur dans un système hôte-parasitoïde
Chapitre 11: La technologie de l'ADN recombinant
L’EPISSAGE ALTERNATIF DE L’ARN
BioInformatique des micropuces
Les méthodes d’analyse des transcrits différentiels
CHAPITRE 19 - La génétique des populations
Expression du Génome Le transcriptome.
Clonage Moléculaire.
La méthode enzymatique de séquençage, dite de (Sanger; didésoxy)
La synthèse des protéines
ADN à ARN La synthèse des protéines étape 1
Comment passer du gène (allèle): séquence spécifique de nucléotides
ECUE Méthodologie de la Génétique Moléculaire
Étude de l’expression Analyse globale Analyse classique
La synthèse des protéines
La synthèse des protéines
Co-expression = fonction (Eisen et al., PNAS 1998)
Du Phénotype au Génotype
Ordre des chapitres : 1 – 3 – 2 – 4 1.
Mutagenèse chez la drosophile
Les sillons de l ’ADN L’ ADN sous forme B Observer la différence entre
Introduction Matériels et méthodes Résultats
Optimisation des conditions d’actions de la protéinase K au cours d’une hybridation in situ sur embryon de lamproie.
Les Séquences et leurs Propriétés. Nucléotides  ADN  A, T, G, C  ARN  A, U, G, C.
Collège Lionel-Groulx
A maize resistance gene functions against bacterial streak disease in rice B. Zhao, X.Lin, J.Poland, H.Trick, J.Leach, S.Hulbert PNAS, octobre 2005.
Chapitre 2 SEQUENCE 2 Professeur Jeremías GONZÁLEZ.
E.R. Gauthier, Ph.D.CHMI 3216F – A20091 Bioingénierie de l’A.D.N. CHMI 3216 F 14 Septembre 2009 Boîte à outils, 2 ième partie (suite). Plasmides, clonage.
DIFFERENTIAL REGULATION OF HOX GENES IN ENDOMETRIOSIS
Bioingénierie de l’A.D.N.
Quand la génétique s'en mêle.
XUGUANG LI, JOHNSON MAK, ERIC J. ARTS, ZHENGXIAN GU, LAWRENCE KLEIMAN, MARK A. WAINBERG,* AND MICHAEL A. PARNIAK *
On y reconnaît : une enveloppe  dans laquelle sont enchâssées des protéines (glycoprotéines de surface) ; une capside formée d’un assemblage de protéines.
Quantification des ARNm par RT & PCR « en temps réel »
Expression du Génome Le transcriptome.
Clonage des séquences pour
Clonage Moléculaire.
Les biotechnologies.
Révision ADN et protéines
LA RÉGULATION DES GÈNES
L’analyse d’ADN et la génomique
Aspects techniques des biotechnologies
Exercice L’EPISSAGE ALTERNATIF DE L’ARN
Régulation de l’expression génétique: la transcription
CHMI 4206 Bioinformatique appliquée
IV LE SEQUENCAGE ADN ARN.
Aspects techniques des biotechnologies
Techniques d’Analyse Moléculaire
La parasexualité des bactéries Le génome bactérien.
Plan du cours 1. Introduction 2. L’eau 3. Les acides aminés, les peptides et les protéines 4. La structure tridimensionnelle des protéines 5. Exploration.
LES SONDES Année universitaire 2015/2016 DR. OULDJAOUI AHMED 1.
METHODES DE DETECTION DES OGM DANS LES ALIMENTS
Expression du Génome Le transcriptome.
Clonage Moléculaire.
Expression du Génome Le transcriptome.
Transcription de la présentation:

Dénturation/hybridation Population A Tester Population B Driver RNA RNA RT avec oligodT cDNA Dénturation/hybridation Excès de driver Clonage dans un vecteur

Criblage de la banque Hybridome T spécifique d’un antigène Y d’un antigène X Isolement des ARN polysomaux associés aux membranes ARN polyA+ cDNA ARN polyA+ Soustraction en utilisant un lymphome B Synthèse des cDNA en présence de dXTP a32P Synthèse du second brin Soustraction en utilisant un lymphome B Construction d’une banque par clonage dans pBR322 Criblage de la banque 35 clones 30 spécifiques des cellules T

Cellules T

Extraction ARN : 2 échantillons A et B GCAAAAA CGTTTTTT RT avec amorces poly(T)12MN GCAAAAA CGTTTTTT CGTTTTTT PCR Amorces poly(T)12MN Décamères arbitraires A B Identification (base de données) Excision, extraction, PCR et clonage dans un vecteur Séquençage Vérification de l’expression différentielle Migration sur gel polyacrylamide autoradiographie

Marquage Marquage

cDNA array

5’ 3’ PM : A t c g t c g t t a t c g t t g c t g c MM : A t c g t c g t t g t c g t t g c t g c MM PM

Marquage de la sonde Hybridation cDNA T7 B cRNA B B B (T7RNA pol)

Fabrication des puces

SAGE : Serial Analysis of Gene Expression SAGE permet une analyse de la fréquence d'un ARN messager parmi les milliers produits dans une cellule à un moment donné. Une étiquette (tag) est une séquence de 10 ou 14 nucléotides caractéristique d'un ARNm d'une cellule. Les étiquettes, isolées grâce à l'action des enzymes de restriction, sont liées bout à bout en une seule séquence qui est clonée, amplifiée par PCR et séquencée. Analyse informatique du taux d'expression des ARNm à partir de cette séquence. Une courte séquence de 10 à 14 nt permet d’identifier un transcrit : TAG Ces séquences peuvent être liguées entre elle dans un vecteur puis séquencées La fréquence avec laquelle un TAG est observée est proportionnelle au niveau d’expression