La gestion des déchets Biochimie Laurence Chavant

Gestion des déchets lors d’une séance de Tp de Biochimie

Gestion des déchets niveau de la commande Repérage des déchets : leur nature Traitement possible des déchets au lycée ? (Protocole élimination des déchets) Oui Rapide / simple : Elève durant séance Long / complexe : Personnel de laboratoire Non Stockage dans « Bidons » avec étiquette appropriée (Aide au tri des déchets chimiques) Sur la commande : Nombre de « bidons ». L’étiquette appropriée avec nom du composé. Sur la commande : Les besoins pour le traitement : - Matériels - Réactifs

Documents destinés aux élèves Fiche technique « Détermination de l’étiquette présente sur le bidon ». Dans la salle : « Aide au tri des déchets chimiques » Sur protocole : Symbole : Devenir des produits sur la paillasse. Tableau : Elimination des déchets de l’analyse à compléter.

Gestion des déchets par les élèves Devenir des produits sur la paillasse Symboles dans le protocole Produit à remettre dans le flacon initial Repérage des déchets de la manipulation

Gestion des déchets par les élèves Elimination des déchets de l’analyse Tableau à compléter Les déchets Moyens d’élimination Répérage : Lieu de production Protocole Nature du déchet Principe Traitement : Oui : Décrire le moyen Non : « Bidon » avec étiquette appropriée

Gestion des déchets par élèves Exemple : Dosage des chlorures Le protocole : - Etalonnage de la solution nitrate d’argent par méthode de Mohr : pesée indirecte - Dosage des chlorures par méthode de Charpentier et Volhard.

Exemple : Dosage des chlorures Etalonnage : AgNO3 par la méthode de Mohr, pesée indirecte Les déchets Moyens d’élimination Evier NaCl Laisser sédimenter le précipité une nuit : Surnageant : évier Précipité : « Bidon » déchet inorganique toxique : Ag+ AgCl en milieu neutre

Exemple : Dosage des chlorures Dosage : Chlorure par la méthode de Charpentier et Volhard Les déchets Moyens d’élimination AgCl AgSCN milieu acide Neutralisation et sédimentation Dégagement vapeurs irritantes « Bidon » déchet inorganique toxique : argent, thiocyanate et milieu acide NH4SCN (burette) AgNO3 (burette et pipette jaugée) Lavage verrerie thiosulfate

Gestion des déchets : Réduction de volume Quelques pistes

Diminution volume en colorimétrie Essais en diminuant proportionnellement l’ensemble des réactifs et étalon de la méthode colorimétrique. Méthode Littérature Pratiqué Méthode 3,5DNS Etude B-fructosidase - 3 mL milieu enzymatique - 2 mL 3.5 DNS - 15 mL d’eau distillée - 1,5 mL milieu enzymatique - 1 mL 3.5 DNS - 7,5 mL d’eau distillée Dosage des nitrites (diazotation) - 10 mL (étalon et diluant) - 0,2 mL réactif - 5 mL (étalon et diluant) - 0,1 mL réactif Dosage du Phosphore Méthode de Briggs - 7 mL (étalon et diluant) 1 mL Réactif 1 1 mL Réactif 2 1 mL Réactif 3 - 2 mL (étalon et diluant) 2 mL triréactif (V/V/V)

Diminution des déchets : CCM des acides aminés Solvant : Volume préparé nécessaire à 2 groupes de 16 élèves (1L). Récupérer et stocker en flacon fermé. Utiliser par les groupes suivants dans la semaine. Révélateur à la ninhydrine (pinceau)     Composition : 0,6 g de ninhydrine 6 mL d’acide éthanoïque n-butanol qsp 200 mL En flacon brun fermé le réactif est stable plusieurs mois à + 4°C . Dimension des plaques : CCM (« secondaire ») Séparation des AA lors chromatographie échange d’ions/Identification des AA par CCM : plaque de 4 cm x 4cm

Diminution des déchets : Fractionnement des protéines sériques par sulfate d’ammonium Préparation de la fraction « globulines » - Dans un tube à centrifuger, placé dans de la glace, introduire : - 5 mL de sérum - 5 mL de sulfate d’ammonium à 100 % (goutte à goutte). - Mélanger, laisser reposer 10 minutes. - Centrifuger 10 min à 4500 rpm (Jouan , E96). - Dans un tube Eppendorf de 1,5 mL , placé dans de la glace, introduire : - 0,5 mL de sérum dilué (= Unitrol dilué au ½) - 0,5 mL de sulfate d’ammonium à 100 % (goutte à goutte). - Centrifuger 5 min à 10 000 rpm (microcentrifugeuse). La fraction obtenue est la fraction de globuline. On cherche à obtenir un volume total proche de 1 mL Noter le volume exacte obtenu soit VG.

Diminution des déchets : Fractionnement des protéines sériques par sulfate d’ammonium Dosage des protéines par la méthode au Biuret 1 mL de solution étalon ou fractions à doser. 4 mL de réactif du biuret. 0,5 mL de solution étalon ou fractions à doser. 2 mL de réactif du biuret.