L'ADN, à l'origine de l’unité du vivant? Objectifs: - On veut prouver l’existence d’un patrimoine génétique dans tous les êtres vivants. On cherche à savoir si le patrimoine génétique est identique chez toutes les espèces. On cherche à savoir si le patrimoine génétique est transmissible expérimentalement d’une espèce a une autre.

Existe-t-il un matériel génétique chez tous les êtres vivants? On veut extraire de l’ADN de différentes espèces cellulaires telles que: - Espèce végétale : l’oignon - Espèce animale eucaryote* pluricellulaire : la salive - Espèce animale eucaryote pluricellulaire : foie de souris - Espèce animale procaryote** : bactéries *: cellule contenant un noyau **: cellule n’ayant pas de noyau

Matériel Adn humain Adn d’oignon Adn de foie Adn de bactéries Salive - Tube à essai de 15ml Tampon ( TE*,SDS, Na Cl) Alcool (éthanol) Oignon Tube a essai de 50ml Tampon (TE*, SDS, Na Cl) Une centrifugeuse Un morceau de foie (2g) un Potter Tube de 50 ml Tampon (TE*,SDS,NaCl) Bactéries une centrifugeuse Étuve milieu de culture Tampon ( TE*+ SDS+ NaCl) *: tampon Tris-EDTA, pH 8

Procédure d’extraction d’ADN de foie Hacher le foie Mettre dans un Potter et broyer Mettre dans un tampon (SDS+NaCl+ TE) afin de faire éclater les cellules. Centrifuger Eliminer le surnageant Ajouter l’éthanol Récupérer la pelote supposée être de l’ADN

Procédure d’extraction de l’ADN de bactérie BACTERIES: Mise en culture des bactéries Mettre dans un tube eppendorf Centrifuger Éliminer le milieu de culture Mettre le tampon (SDS+NaCl+TE) Agiter puis rajouter l’éthanol Mettre dans le réfrigérateur Récupérer la pelote supposée être de l’ADN

Procédure d’extraction de l’ADN de salive humaine Récolter la salive humaine La verser dans un tube de 15ml Verser le tampon (SDS +NaCl+TE) dans ce tube Verser l’éthanol Laisser reposer Récupérer la pelote supposée être de l’ADN Pelote d’ADN

Procédure d’extraction de l’ADN d’oignon Hacher l’oignon Mettre dans un tube de 50mL Mettre dans un tampon (SDS+NaCl+TE) Centrifuger Ajouter l’éthanol Récupérer la pelote supposée être de l’ADN

Test de caractérisation de l’ADN Grâce au bleu de méthyle qui prend une coloration bleue en présence de matériel génétique on peut effectivement affirmer que la pelote observée est bien le l’ADN.

CONCLUSION DE L’OBJECTIF 1 : Nous observons une pelote , qui est de l’ADN,dans les quatre tubes des différentes espèces cellulaires testés .

Est-ce que le patrimoine génétique est identique entre espèces? On traite l’ADN à la protéinase K pour « dégrader » les protéines liées à l’ADN. Une fraction de cet ADN à été traitée avec des enzymes de restriction.

Analyse par électrophorèse sur gel d’agarose des ADNs extraits 1 2 3 4 5 6 7 9 8 1 MARQUEUR DE TAILLE 2 ADN DE FOIE 3 ADN DE BACTERIE 4 ADN D’OIGNON 5 ADN DE SALIVE 6 ADN DE FOIE DIGERE 7 ADN DE BACTERIE DIGERE 8 ADN D’OIGNON DIGERE 9 ADN DE SALIVE DIGERE

Conclusion de l’objectif 2: On a observé grâce à la technique d’électrophorèse qu’entre les espèces testées le patrimoine génétique n’était pas identique car les migrations des ADN de chaque espèce ne sont pas les mêmes.

Peut-on transmettre le patrimoine génétique d’une espèce à l’autre? MATERIELS: - Bactéries - ADN codant la GFP ( Green Fluorescent Protein) prélevée à la méduse - boîte de pétri contenant une gélose - Plasmide ( ADN circulaire ) -Amorces -Taq DNA polymérase -dNTP -Tampon pour PCR -Thermocycleur -Tubes de PCR

Technique de la PCR Cycle 1 Cycle 2 Cycle 3 Dénaturation de l’ADN Séquence cible GFP Dénaturation de l’ADN Hybridation Cycle 1 Élongation Cycle 2 Cycle 3 Nous avons réaliser 29 cycles

TRANSFERT DU GENE DE GFP ISSU DE LA MEDUSE A LA BACTERIE (Escherichia Coli) Plasmide Transformation (introduction du plasmide) Bactérie Bactérie transformée (OGM)

Obtention de bactéries génétiquement modifiées: fluorescence GFP (contrôle) Bactéries génétiquement modifiées

Conclusion générale Nous avons réaliser trois expériences visant à prouver l’existence de l’ADN dans toutes les espèces. Nous avons déduis l’existence de l’ADN, son authenticité entre les espèces et la possibilité de transmission de l’information génétique d’une espèce a l’autre en laboratoire.

Pour réaliser nos expériences, nous avons besoin de divers matériels Concernant l’expérience sur la salive nous devons utiliser: Salive humaine Tube à essai de 15ml Tampons ( SDS, EDTA,Na Cl) Alcool (éthanol) Maintenant intéressons nous a l’expérience sur l’oignon : Oignon Tube a essaie de 50ml Une centrifugeuse éthanol

Au vue des résultats de nos expériences, nous pouvons déduire qu’ il existe effectivement un patrimoine génétique chez tous les êtres vivants testés.