Azoospermies non obstructives Atelier TESE C.Giorgetti – FFER 2006 Azoospermies non obstructives Cryo - TESE Utilisation de spermatozoïdes congelés après TESE (Testicular Sperm Extraction)

Constitution d’un éjaculat Volume 20% 60% T+E VS P+CE Biochimie Carnitine Fructose Citrate + P. Ac E VS P+CE

Classification des azoospermies Paramètres Obstructive Non obstructive (excrétoire) (sécrétoire) Taille des Testicules N  ou N Vol. éjaculat  ou N N FSH N  Biochimie séminale Fructose  ou N N Carnitine  N

Cryo-TESE-ICSI ICSI décrit 1991 ICSI + TESE décrit en 1993: Craft (fécondation), Schoysman (grossesse) ICSI + TESE à l’ IMR en janvier 1997 ICSI + Cryo-TESE par Fischer 1996 ICSI + Cryo-TESE à l’ IMR en juin 97

Données de la littérature Séries peu nombreuses nombre de patients faible non randomisées mixtes : NOA + OA Spermatozoïdes « frais » + « congelés » critères d’inclusion variables pas toujours l’histologie

Données de la littérature Efficacité TESE = TEFNA TESE : 1 seul gros fragment = plusieurs petits Taux de fécondation TESE = TEFNA Spermatozoïdes “frais” = “congelés” Pas de spz retrouvé dans 50% des cas NOA (30% à 70%) depuis 1997, spz prélevés lors de la biopsie testiculaire diagnostique sont congelés pour une ICSI différée.

Prélèvement chirurgical Anesthésie générale Incision: peau vaginale albuginée (1 – 1.5 cm) Pression douce – pulpe testiculaire Echantillon de grande taille (500 mg) Transport au laboratoire

Transport au laboratoire Tube Falcon de 10 ml contenant 4 à 5 ml un milieu de culture (BM1)

Traitement au laboratoire Rinçage avec un milieu de culture

Traitement au laboratoire Dilacération mécanique avec 2 lames de verre dans une boite de Pétri contenant 2 ml de BM1

Traitement au laboratoire Suspension la plus fine possible Examine un aliquot de 20 μl sous microscope inversé

Traitement au laboratoire Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments

Traitement au laboratoire Sédimentation 1- 2 min afin d’isoler les plus gros fragments

Sélection des spermatozoïdes Surnageant traité classiquement / monocouche (1 ml de SpermFilter 80%)

Recherche des spermatozoïdes Examiner un aliquot de 20 μl de la suspension Recherche - Recherche + La totalité du culot de centrifugation est resuspendu dans 30 μl de BM1 Examine un aliquot de 2 μl - La totalité du culot est dilué dans 0.250 ml de BM1 Congélation + Examiner la totalité du culot + - Fragments / collagénase

Congélation Congélation en paillettes de 0.150 ml Même protocole que pour congeler les spermatozoïdes éjaculés Test de décongélation est réalisé le jour même réalisé dans les mêmes conditions que le jour de l’ICSI

Utilisation des spermatozoïdes après Cryo-TESE Décongélation 10 mn à 37°C et « lavage » avec 2 ml BM1 Centrifugation 15 mn à 300g Culot resuspendu dans 20 μl de BM1 Totalité des 20 μl est examiné au microscope inversé (sous huile) Si pas de spermatozoïdes mobiles (1/2 cas) + 20 μl de Pentoxifylline (Torental à 10% dans BM1 soit 7.2 mmol/l) Après 5 mn de contact recherche le moindre mouvement flagellaire

Cryo-TESE-ICSI Article (C.Giorgetti - IMR) : Crude cumulative delivery rate following ICSI using intentionally frozen-thawed testicular spermatozoa in 51 men with non-obstructive azoospermia. Publié dans RBMOnline – Vol 11. N° 3. 2005 ---------------------------- 118 patients qui bénéficient d’une biopsie testiculaire pour NOA (1998-2002) Examen histologique confirme le diagnostic de NOA Spermatozoïdes sont retrouvés dans 54 cas (46%) Congélation est réalisée dans 51 cas (43%) 3 patients : < 5 spermatozoïdes tous dysmorphiques (non congelés) ICSI réalisées 1998 – juin 2004

Cryo-TESE-ICSI Histologie testiculaire Sertoli cell-only Arrêt de maturation Hypo Spermatogenèses Nb. TESE 51 43 24 Nb. cryoTESE 9 (18%) 20 (47%) 22 (92%) Nb. Paillettes par TESE 4.3 (3-6) 6.5 (4-10) 7.9 (5-12) Nb.Spermatozoïdes par paillette 8 (3-10) 15 (3-50) 25 (10-80)

Cryo-TESE-ICSI : Résultats Histologie testiculaire Sertoli cell-only Arrêt de maturation Hypo Spermatogenèses Nb. ICSI 16 35 48 Nb. de transferts 15 (94%) 35 (100%) 47 (98%) Nb. Gr cliniques 5 13 17 Nb. Gr évolutives % par transfert 4 26.7% 10 28.6% 15 31.9%

Cryo-TESE-ICSI : Résultats N° cycle d’ ICSI 1° 2° 3° 4° Nb. d’ICSI 51 31 10 7 Age de la femme 30.6 31.3 32.4 33.8 No. d’accouchement 13 12 2 Accouchement / cycle 25 % 39 % 20 % 29 % Taux cumulatif d’Acc. 49 % 53 % 57 %

Azoospermies non obstructives - Conclusion En cas d’azoospermie aucun examen ne peut prédire la présence d’une production de spermatozoïdes dans le testicule. On peut prédire seulement un % de chance de retrouver des spermatozoïdes La biopsie diagnostique est la seule à apporter une réponse Lors d’une biopsie toujours être prêt pour une congélation des spermatozoïdes Le taux de biopsie positive est fonction des critères cliniques et biologiques d’inclusion Taux d’accouchement proche de 50% après 2 cycles d’ ICSI Enfants nés aucune particularité