Extraction et visualisation de l’ADN de kiwi

Cette manipulation est un exemple de technique d’extraction de molécules intracellulaires. Elle permet d’observer les molécules d’ADN contenues dans les cellules : il est possible alors d’observer la structure filamenteuse de cette molécule.

Principe de la manipulation L’extraction de l’ADN est réalisée sur un végétal. Dans le cas présent, le kiwi dont les cellules sont riches en ADN. La technique d’extraction consiste en trois étapes : Destruction mécanique des cellules (éclatement du tissu végétal et des cellules) Destruction chimique des membranes biologiques Précipitation de l’ADN extrait (apparition sous forme non soluble).

Matériel (par équipe de 2) 1 morceau de kiwi 1 mortier et pilon 1 cylindre gradué de 25ml 1 agitateur en plastique blanc 1 bécher de 150 ml 1 erlenmeyer de 125ml 1 entonnoir 1 papier filtre 1 bouteille de solution de NaCl 1 petite bouteille de détergent 1 support à éprouvette 1 éprouvette 25 X 150

Matériel à l’avant de la classe solution d’éthanol à 90% maintenue dans la glace (Cette solution permettra de visualiser la présence d’ADN) brosses et savon pour nettoyage nettoyant pour les tables + chiffons (pour éviter les allergies)

Protocole des manipulations À l’aide de l’agitateur de plastique, retirer la chair du kiwi et la placer dans le mortier.

2. Couper la chair en petits morceaux puis la broyer avec le pilon 2. Couper la chair en petits morceaux puis la broyer avec le pilon. La chair doit devenir une purée relativement lisse et sans morceau.

3. Transférer la purée de kiwi dans le bécher. 4 3. Transférer la purée de kiwi dans le bécher. 4. Y ajouter 20ml de solution de NaCl à 60g/L et 7 gouttes de savon à vaisselle. 5. Mélanger DÉLICATEMENT à l’aide de l’agitateur environ 20 secondes.

6. Filtrer le contenu du bécher sur le papier filtre et récupérer le filtrat dans l’erlenmeyer. NE PAS BRASSER LE CONTENU DANS L’ENTONNOIR

Lorsque vous aurez récupéré pour environ l’équivalent d’un doigt d’épais de filtrat dans l’éprouvette vous pouvez poursuivre.

7. Une fois le filtrat nécessaire transférer dans l’éprouvette, verser TRÈS LENTEMENT et le long de la paroi 15ml de la solution froide d’éthanol à 90%

8. Laisser l’éprouvette reposer dans le support sans trop la bouger ni la brasser. 9. Après quelques minutes l’ADN apparaît sous forme d’une boule de gelée. Au bout de plusieurs minutes, les plus chanceux pourraient apercevoir des filaments blanchâtres.