Répartition des anomalies cytogénétiques par FISH dans les Leucémies Aigues Lymphoblastiques de l’adulte S. Taoussi, S. Oukid, F. Lamraoui, N. Rekab, K.M. Benlabiod, H. Brahimi, Y. Bouchakor, M.T. Abad. Service Hématologie, EHS ELCC Blida. Faculté de Médecine, Université Blida I

Introduction Les anomalies cytogénétiques récurrentes sont fréquentes dans les leucémies aigues lymphoblastiques. La t(9 ;22) en représente le type le mieux connu. Elle est retrouvée dans 20 à 30 % des LAL de l’adulte Différents outils sont actuellement utilisés pour les révéler : le caryotype, l’hybridation in situ en fluorescence (FISH), la RT-PCR. L’ intérêt de leur mise en évidence réside dans les implications thérapeutiques et pronostiques de la plupart de ces anomalies.

Les LAL de l’adulte ont un pronostic particulièrement défavorable puisque moins de 40 % sont curables. Celles de l’enfant comptent prés de 80% de guérison. Cette situation s’explique par les profils particuliers , phénotypiques et cytogénétiques des LAL de l’adulte. La classification WHO 2008 prend en compte l’ensemble de ces facteurs pronostiques . Introduction

Des anomalies chromosomiques clonales sont retrouvées dans 70 % des cas de LAL de l’adulte. Elles ont une valeur pronostique indépendante qui rend le caryotype indispensable avant tout traitement. D'autres techniques comme la FISH et la RT-PCR complètent utilement le caryotype. La FISH en particulier peut révéler les anomalies chromosomiques cryptiques. Introduction

Comparatif des différentes techniques . Examen But Résolution Limites Caryotype Analyse génomique complète Faible 10 Mb Cible uniquement les cellules en division. Qualité des mitoses FISH Analyse ciblée Intermédiaire 100 kb Détection ciblée Sur noyaux et mitoses Plusieurs sondes RT-PCR MRD Très sensible 10-6 Ne détecte pas les anomalies de nombre Faux positifs et faux négatifs

La recherche des anomalies chromosomiques ayant une valeur pronostique connue permet d’organiser la stratification du risque des patients et de proposer des traitements adaptés . Ainsi, l’Imatinib a été la première thérapie ciblée utilisée dans les LAL Ph+. Introduction

L’objectif de notre étude est d’évaluer la répartition des anomalies cytogénétiques récurrentes par FISH dans les LAL de l’adulte à Blida. Afin de dégager une stratégie thérapeutique adaptée aux recommandations découlant de la classification OMS 2008, en particulier pour les LAL bcr-abl positif. Objectifs du travail

Patients et méthodes Etude prospective sur 5 ans (Oct.2009-Déc.2014) Portant sur 100 LAL de novo. Cytogénétique réalisée par hybridation in situ (FISH)  Recherche d’anomalies ciblées par des sondes : - bcr-abl - Réarrangement MLL (11q23) - t(8;14)(q24;q32) - t(12;21)(p13;q22) - del (9p21) Sur culture médullaire de 24 h avec synchronisation. Patients et méthodes

Résultats Il s’agit de 62 hommes et 38 femmes Sex ratio = 1,6. Age moyen = 29 ans (16-72). Cytometrie en flux réalisée dans 97 cas : - LAL B = 51. - LAL T = 41. - Bi phénotypique (LAL B + M) = 5 cas Résultats

Au moins une anomalie clonale a été retrouvée par FISH dans 50% des LAL LAL B : 49 % LAL T : 43% Le signal Bcr-abl recherché systématiquement a été retrouvé dans 15 cas (15%) : - 13 LAL B - 02 LA bi-phénotypiques Age moyen des LAL bcr-abl positif : 37 ans (16-52). Dans 8 cas/15 (53,3%), cette anomalie est survenue à la 4ème décade. Résultats

Résultats Parmi les anomalies additionnelles connues dans cette catégorie comme la monosomie 7, seule la duplication du signal bcr-abl a été noté dans 04 cas (26,6%). Par ailleurs, des anomalies de nombre ont été notées sur la sonde bcr-abl : - duplication du signal 9q34 (x3,x4) = 10 cas - iso 9q dans un cas.

Le locus MLL sur le 11q23 Réarrangement MLL dans 06 /95 (06,3%) : Résultats Le locus MLL sur le 11q23 Réarrangement MLL dans 06 /95 (06,3%) : - 3 LAL B - 3 LAL T Le gène partenaire au cours de ces réarrangement n’a pas été déterminé. Locus MLL délété dans 4 cas. Locus MLL dupliqué (x3, x4) dans 9 cas.

t(8 ;14) recherchée sur 7 LAL B matures, n’ a pas été retrouvée, par ailleurs : duplication du signal 8q24 (2 à 4 copies) dans deux cas. Résultats

La délétion du 9p21 recherchée dans 41 cas de LAL T, retrouvée dans 15 cas (36,5%), de manière bi allélique dans 7 cas. Résultats Résultats

La translocation t (12 ; 21) (p13 ; q22), recherchée chez les patients LAL B âgés de moins de 20 ans,  (16 cas) : aucune translocation n’a été noté Par ailleurs une trisomie 12, un iso 21q, duplication du locus 21q (4 copies). Résultats

La fréquence des anomalies clonales dans notre série est en dessous des résultats de la littérature (70%), du fait que le caryotype n’a pas été analysé et il n’y a que les anomalies ciblées qui ont été mises en évidence. Dans les LAL T, les anomalies impliquant les loci du TCR (14q11, 7q34, 7p14) n’ont pas été recherchées. Commentaires

La t (9 ; 22)(q 34 ; q22.1) est l’anomalie la plus fréquente chez l’adulte (25 à 30 %). Dans notre travail, anomalie retrouvée dans 15 % : - Le jeune âge de cette population (29 ans) - 3 cas seulement ont plus de 60 ans. - près de la moitié de cette population d’étude est faite de LAL T (bcr-abl exceptionnel). Dans notre série, toutes les translocations bcr-abl sont des LAL B (calla+) ou bi phénotypiques. Commentaires

Dans une étude anglaise portant sur 349 pts LAL de caractéristiques semblables à la notre (B,T, biphéno), les anomalies clonales ont été retrouvées dans 74% des cas vs 50%, le bcr-abl est retrouvé dans 15%. (Blood.2010; 115 : 206-214) Les anomalies chromosomiques additionnelles au signal bcr-abl type hyper diploïdie, monosomie 7, trisomie 8, del 9p, duplication du bcr-abl sont retrouvées dans 50%. Dans notre étude un +der22 est retrouvé dans 4 cas. Commentaires

(Mizuta S, Matsuo K, Nishiwaki S, et al. Blood 2014 ; 123 : 2325-32). Le Ph1+ dans les LAL est associé à un pronostic péjoratif. Probabilité de rester en RC à 3 ans =17% (LAL Ph1+) comparée à 48% (LAL Ph1-)(4) avant l’ère des ITKs . Ces derniers associés à une poly chimiothérapie ont amélioré les résultats . Survie globale à 5 ans des LAL Greffées : - 59 % à 5 ans pour ceux qui ont reçu de l’Imatinib avant la greffe - 38 % pour ceux qui n’en ont pas reçu. (p = 0,001) (Mizuta S, Matsuo K, Nishiwaki S, et al. Blood 2014 ; 123 : 2325-32). Commentaires

Commentaires Le réarrangement MLL (pronostic péjoratif) est retrouvé dans 6,3% des cas, rejoignant la littérature, rare dans les LAL T< 1% quelque soit l’âge, dans notre série 3/6 MLL délétés sont des LAL T. La translocation (12;21) (p13;q22)/(ETV6, RUNX1)  rare chez l’adulte (1-3%) (pas de cas rapportés après 20 ans) ; non retrouvée dans notre étude. La del 9p21 retrouvée dans la majorité des LAL T aurait un impact pronostique défavorable, retrouvée dans moins de 50% des cas de notre série. Commentaires

Le caryotype reste l’examen de référence en visualisant tout le génome (anomalies rares, nouveaux points de cassures), les formes poly diploïde de bon pronostic et les hypo diploïdes voir near haploïde, caryotype complexe de très mauvais pronostic. Une étude cytogénétique ciblée par FISH permet de reconnaitre une majorité d’anomalies récurrentes dans les LAL de l’adulte et de fournir une orientation essentielle pour le traitement. La FISH nous a permis en particulier de faire un screening du bcr-abl sur une population de LAL pour la première fois dans notre région, ce qui nous a permis d’adapter et optimiser notre stratégie thérapeutique. Conclusion