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Publié parConstance Tassé Modifié depuis plus de 5 années
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Projet Luminy CHAINE Ambre, ROUX Pauline, DESANTI Emma, CHEURFA Rayan, BONGORNO Lucas, MUNTANER Thomas
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OBSERVATION Lors d’une blessure, il y a plus de macrophages que de lymphocytes. Hypothèse 1 : Ils se sont multipliés. Hypothèse 2 : Ils ont migré. Question : Comment peuvent-ils agir ? Hypothèse 1 : Ils vont phagocyter (manger) Hypothèse 2 : Ils secrètent des enzymes pour les tuer Hypothèse 3 : Ils appellent d’autres cellules pour les aider (lymphocytes)
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Question Il y a souvent du lysozyme dans les médicaments.
Qu’est-ce que le lysozyme ? Est-ce que les macrophages sécrètent du lysozyme ? Si oui, quelle est la cible du lysozyme ? Quelle quantité de lysozyme est sécrété ? Comment cela marche ?
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Est-ce que les macrophages sécrètent du lysozyme ?
Observation des macrophages au microscope optique : Macrophage X100 Macrophage X400 Milieu seul
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Zymographie Une zymographie consiste à détecter les enzymes dans un milieu grâce à leur activité. Quelle est l’activité de l’enzyme ? → Il se nourrit de peptidoglycane. Attaque de la paroi par le lysozyme Paroi bactérie (peptidoglycane)
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Expériences L’électrophorèse consiste à séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire (leur taille), grâce a un courant électrique.
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Expériences Pour l’électrophorèse, il faut faire un gel où les protéines migreront à cause de la charge électrique. Dans le gel, on met du peptidoglycane. Gel contenant du peptidoglycane
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Les conditions : - Témoin négatif (milieu sans macrophage) - Témoin positif (lysozyme pur) Milieu macrophage
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Résultats Bande transparente qui prouve la présence du lysozyme et de son activité.
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POURQUOI ? Analyse du résultat
Les protéines ont migré, car on peut voir la présence de bandes colorées. Il y a des bandes dans tous les puits. Les bandes sont de taille différente donc il n’y a pas la même quantité de lysozyme dans tous les puits. POURQUOI ?
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L’expérience doit donc être refaite
INTERPRETATION Hypothèse 1 : Il y a du lysozyme dans tous les puits ( contamination). Hypothèse 2 : En pipetant, les protéines ont débordé. Hypothèse 3: Il y avait déjà dulysozyme dans le milieu témoin. Il faudrait ajouter du témoin négatif eau. L’expérience doit donc être refaite
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Marqueurs de taille Lysozyme Milieu seul Eau Macrophages 180 kDa
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ANALYSE (GEL2) Les protéines ont migré, car on peut voir la présence de bandes colorées Il n’y a pas de bandes dans le puits eau ni dans le puits du milieu seul. Il y a des bandes dans le puits du lysozyme (témoin positif) Nous voyons des bandes dans le puits du milieu des macrophages, donc il y du lysozyme.
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CONCLUSION Les macrophages secrètent du lysozyme.
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