A la recherche de la DNase

Présentation au sujet: "A la recherche de la DNase"— Transcription de la présentation:

1 A la recherche de la DNase

2 Sommaire Présentation Composition Principe Lecture

3 Présentation La gélose à l’acide désoxyribonucléique (ADN) permet la recherche de la désoxyribonucléase (DNase) des bactéries, et particulièrement des Staphylococcus aureus.

4 Composition Hydrolysat trypsique de caséine………………………………………………………………….20,0g Acide désoxyribonucléique (ADN)…………………………………………………………………...2,0g Chlorure de sodium……………………………………………………………………………………………...5,0g Agar……………………………………………………………………………………………………………………….12,0g pH= 7,3 source de carbone, d’azote, d’énergie, de facteurs de croissance Substrat de la DNase Assure l’équilibre osmotique Gélifiant

5 Mise en évidence d’une DNase
Principe Mise en évidence d’une DNase ADN    + H2O            Nucléotides ou Polynucléotides Mettre les bactéries dans un milieu contenant de l’ADN Incuber 24 heures à 37°C Rechercher si l’ADN est toujours présent ou absent en utilisant des révélateurs de l’ADN : bleu de toluidine (bleu en présence d’ADN ou rose en absence d’ADN) ou HCl (opacifiant la gélose en présence, halo clair en absence d’ADN) . DNase

6 Technique Ensemencer les colonies suspectes en strie unique à la surface du milieu. Incuber 24 heures à 37°C. Pendant l’incubation si la bactérie étudiée possède une DNase alors grâce à celle-ci il y aura hydrolyse:  ADN    + H2O            Nucléotides ou Polynucléotides Verser à la surface de la gélose une solution d'acide chlorhydrique (HCl) soit du bleu de toluidine pour avoir la lecture de la gélose.

7 Lecture Avec HCl Avec le Bleu de Toluidine
Formation d’un halo transparent autour de la strie: DNase + Pas de formation d’un halo transparent autour de la strie: DNase - Formation d’un précipité bleu: absence de DNase: DNase - Formation d’une coloration rose ou transparente: présence d’une DNase DNase +