Milieux VRBG et TBX Milieux VRBG et TBX. Milieu VRBG Violet – Rouge neutre – Bile - Glucose.

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1 Milieux VRBG et TBX Milieux VRBG et TBX

2 Milieu VRBG Violet – Rouge neutre – Bile - Glucose

3 Intérêt du milieu  Dénombrer les Entérobactéries contenues dans un aliment Extrait de la norme ISO 21528-2 : critères d'hygiène en microbiologie alimentaire  Indicateur de contamination fécale

4 Présentation du milieu Rôle Peptone Extrait de levure Glucose NaCl Sels biliaires Cristal violet Rouge neutre Eau Agar Source de C, N, d’énergie, d'ions minéraux et facteurs de croissance Source de C et d'énergie pour bactéries Glu + (Ex : entérobactéries) Isotonicité du milieu Inhibiteurs des Gram + Indicateur de pH Solvant Solidifiant }

5 Lecture du milieu Colonies rouges : colonies de bactéries glucose +  Colonies incolores : colonies de bactéries glucose -

6 Mode opératoire du dénombrement des Entérobactéries Diluer l'aliment ou l'échantillon en eau peptonée (dilutions décimales successives) avec 1 pipette par dilution Ensemencer dans la masse 1 mL de chaque dilution (1 seule pipette pour toutes les dilutions) Étuver 24h à 37°C.

7 Lecture Compter les colonies caractéristiques : colonies rouges avec halo rougeâtre de précipité sur les boîtes ayant entre 10 et 150 colonies.

8 Lecture

9 Milieu TBX Tryptone – Bile – X-glucuronide Agar

10 Intérêt du milieu  Dénombrer les Escherichia coli contenus dans un aliment Extrait de la norme ISO 21528-2 : critères d'hygiène en microbiologie alimentaire  Indicateur de contamination fécale récente 10

11 Présentation du milieu Rôle Peptone X-  -D-glucuronide NaCl Sels biliaires Eau Agar Source de C, N, facteurs de croissance, ions minéraux et énergie Substrat chromogène E.coli possède l'enzyme  -D-glucuronidase qui hydrolyse le chromogène et donne des colonies bleu-vert caractéristiques Isotonicité du milieu Inhibiteurs des Gram + Solvant Solidifiant

12 Substrat chromogène X-  -D-glucuronide (acide 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-  -D- glucuronide) Produit bleu -vert

13 Lecture du milieu Colonies bleues vertes : colonies d’Escherichia coli

14 Mode opératoire du dénombrement d’ Escherichia coli Diluer l'aliment en eau peptonée (dilutions décimales successives) : 1 pipette par dilution Ensemençer 1 mL de chaque dilution dans la masse d’un milieu TBX avec 1 seule pipette pour tous les ensemencements Étuver 24h à 44°C.

15 Lecture Compter les colonies bleues vertes (sur les boîtes ayant entre 15 et 150 colonies).

16 Lecture Cliquer pour détail des colonies