LES MILIEUX D’ISOLEMENT DES COQUES GRAM +

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1 LES MILIEUX D’ISOLEMENT DES COQUES GRAM +
La gélose trypticase soja Composition Peptone trypsique de caséine 15 g Peptone papaïnique de soja 5 g Chlorure de sodium g Agar (gélose) 15 g ED qsp 1 L Source de C et N Source minérale pH = 7,2 Milieu d’isolement riche qui convient à tous les microorganismes exigeants

2 La gélose COLUMBIA Composition Mélange de peptones g Amidon g Chlorure de sodium g Agar (gélose) 15 g ED qsp 1 L Source de C et N Source glucidique de C Source minérale pH = 7,1 Milieu d’isolement , servant de base pour la préparation des géloses au sang. Gélose riche qui peut être additionnée de nombreux suppléments, et la rendre sélective à certains groupes bactériens.

3 La gélose au sang frais Composition Base trypticase soja, Columbia Peptones riches en acides aminés et vitamines Amidon NaCl agar A ce milieu de base, il faut ajouter 5% de sang frais de mouton ou de cheval défibriné et stérile Milieu d’isolement riche qui convient à tous les microorganismes exigeants ou non. Il permet aussi une orientation en fonction du caractère hémolytique pour les streptocoques Préparation du milieu Pipette Pasteur stérile Couler par-dessus les gouttes de sang la gélose en surfusion à 45°C Homogénéiser en faisant des petits cercles concentriques. Déposer le volume de sang nécessaire en faisant des gouttes séparées dans le fond de la boîte de pétri.

4 Milieu d’isolement simple, sélectif et d’orientation
La gélose BEA (bile – esculine – azide de sodium) Composition Source de C et N Peptone g Extrait de levure g Bile de boeuf 10 g Chlorure de sodium g Citrate de sodium g Esculine g Citrate de fer ammoniacal ,5 g Azide de sodium ,25 g Agar (gélose) 13,5 g ED qsp 1 L Source de C, N, vitamines et minéraux Inhibiteur de croissance Source glucidique Ind des produits d’hydrolyse de l’esculine Inhibiteur de croissance pH = 7,1 Milieu d’isolement simple, sélectif et d’orientation L’azide de sodium empêche la croissance des bactéries Gram – et de tous les streptocoques sauf ceux du groupe D. La bile inhibe les bactéries Gram + sauf les streptocoques du groupe D. L’azide de sodium et la bile sélectionnent la culture des entérocoques et des streptocoques du groupe D.

5 Colonies d’ascpect variable, sans noircissment du milieu:
ESCULINE – Orientation vers d’autres germes différents des Streptococcus D Lecture Petites colonies translucides entourées d’un halo noir: ESCULINE + Orientation vers les Streotococcus D dont fait partie le genre Enterococcus.

6 Lecture Halo clair (éclaircissement autour des colonies) Hémolyse totale des globules rouges : HEMOLYSE  Halo verdâtre autour des colonies Hémolyse partielle des globules rouges : HEMOLYSE  Milieu inchangé autour des colonies Absence d’hémolyse.