Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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1 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

2 La greffe de CSH Moelle Osseuse
La moelle osseuse est un tissu en renouvellement permanent situé dans les os. Production de 1012 cellules par jour (mille milliards!) Répartition : Crâne et mâchoire 13 % Membres supérieurs 8 % Sternum et côtes 10 % Vertèbres 28 % Bassin 34 % Membres inférieurs 4 % Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

3 Qu’est-ce que la moelle osseuse
Un organe responsable de la production des éléments du sang . Les « cellules souches » donneront : Globules rouges Leucocytes Plaquettes Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

4 Schéma de l’hématopoïèse
Cellules souches Progéniteurs Précurseurs Cellules matures Granulocyte Lignée myéloïde Monocyte Érythrocyte Mégacaryocyte/plaquettes Lignée lymphoïde Éosinophile Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Lymphocytes B et T

5 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
Définition Une cellule souche est la « cellule mère » non différenciée et pluripotente dont proviennent toutes les cellules sanguines Elle est capable d’une différenciation et d’un auto-renouvellement illimités Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

6 La greffe de moelle osseuse
Deux grands types de pathologies : 1. production de cellules anormales : Leucémie aigue ou chronique Myélome Lymphomes 2. dysfonctionnement : Aplasie Déficits congénitaux Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

7 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
La greffe de moelle osseuse Particularités de la greffe de cellules de moelle osseuse Différent de la greffe d’organe : pas d’opération chirurgicale injection par voie veineuse comme une transfusion Mais problèmes immunologiques : rejet GVH (réaction du greffon contre l’Hôte) Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

8 Importance de la compatibilité tissulaire ( Human Leucocyte Antigens)
La greffe de moelle osseuse Importance de la compatibilité tissulaire Typages HLA identiques du: ( Human Leucocyte Antigens) Donneur Receveur Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

9 La greffe de moelle osseuse
Les donneurs potentiels : la fratrie : 25% des cas les donneurs volontaires de moelle osseuse la banque de sang de cordon Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

10 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
LE SYSTEME HLA Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

11 Le système HLA Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset
Human Leucocyte Antigen Complexe Majeur d ’histocompatibilité de l ’Homme Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset « Carte d ’identité », exprimée à la surface de toutes nos cellules nucléées Polymorphe +++ Chaque sujet est unique Réalisation du typage HLA par prise de sang Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

12 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
LA COMPATIBILITE  Une étude de compatibilité nécessite : - La réalisation du TYPAGE HLA du patient et des donneurs - La COMPARAISON des typages HLA du patient et des donneurs - La RECHERCHE de l’identité tissulaire la plus proche, la plus parfaite. Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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Codominance: tous les gènes sont exprimés (2 Ag détectés par locus, hormis pour les homozygotes) - Transmission en bloc sous forme d’haplotypes (peu de possibilité de crossing over) Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

18 GENETIQUE DES POPULATIONS
Grande diversité du système HLA Combinaisons préférentielles dans certaines populations Information sur l’histoire génétique de chaque population 4 grands groupes de POPULATIONS : CAUCASOÏDE NEGROÏDE MONGOLOÏDE AUSTRALOÏDE Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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Nomenclature des antigènes HLA Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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21 Méthodologie de l’étude du système HLA:
phénotypage: microlymphocytotoxicité (LCT) génotypage: résolution générique (2 digits): basse résolution résolution allélique (4 voire 6 digits): haute résolution (résolution intermédiaire: moyenne résolution) ->2 manières d’exprimer les spécificités HLA, avec des correspondances entre elles Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

22 Isolement des cellules mononucléées sur Ficoll
PRINCIPE et RESULTATS L'isolement sur Ficoll repose sur les densités respectives des cellules et du Ficoll. Après centrifugation, les cellules mononucléées se rassemblent en un anneau opaque surnageant au dessus du Ficoll. Celui-ci est ensuite prélevé délicatement.                                                                                                                                                                            Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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27 LA BIOLOGIE MOLECULAIRE appliquée au typage HLA
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28 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
Cellule Chromosomes ADN La Biologie Moléculaire traite de la biologie des acides nucléiques Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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Structure de l’ADN Double hélice Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

30 A-T G-C Liaisons hydrogène (réversibles sous l’effet de la chaleur
ou d’agents chimiques: dénaturation-hybridation) Liaisons phospho-diesters (l. irréversibles, catalysées par des enz DNA pol. ou nucléases) G-C Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

31 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
Principe de la PCR Matrice d’ADN Couple d’amorces spécifiques Taq polymerase, + dNTP Permet d’amplifier une zone spécifique sur un gène Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

32 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
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33 Migration de l’ADN chargé négativement en gel d’agarose
Révélation par BET fluorescent qui s’insère dans la double hélice (intercalant) Identification en fonction du PM Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

34 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin
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35 DP DQ DR B C A Polymorphisme du système HLA : sérologie versus DNA
HLA class II HLA class I DP DQ DR B1/B3/B4/B5 B C A antigènes 6 9 19 46 10 21 allèles (DNA) (>1700) 111 59 463 617 179 338 Réunion A.M.A.F Bordeaux er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin