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Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 1.

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1 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 1

2 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 2 La moelle osseuse est un tissu en renouvellement permanent situé dans les os. Production de cellules par jour (mille milliards!) Répartition : Crâne et mâchoire13 % Membres supérieurs8 % Sternum et côtes10 % Vertèbres28 % Bassin34 % Membres inférieurs4 % La greffe de CSH Moelle Osseuse

3 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 3 Quest-ce que la moelle osseuse Un organe responsable de la production des éléments du sang. Les « cellules souches » donneront : – Globules rouges – Leucocytes – Plaquettes

4 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 4 Schéma de lhématopoïèse Cellules souches Lignée myéloïde Lignée lymphoïde Mégacaryocyte/plaquettes Monocyte Érythrocyte Éosinophile Granulocyte Cellules maturesPrécurseursProgéniteurs Lymphocytes B et T

5 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 5 Définition Une cellule souche est la « cellule mère » non différenciée et pluripotente dont proviennent toutes les cellules sanguines Elle est capable dune différenciation et dun auto- renouvellement illimités

6 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 6 La greffe de moelle osseuse Deux grands types de pathologies : 1. production de cellules anormales : Leucémie aigue ou chronique Myélome Lymphomes 2. dysfonctionnement : Aplasie Déficits congénitaux

7 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 7 La greffe de moelle osseuse Particularités de la greffe de cellules de moelle osseuse Différent de la greffe dorgane : pas dopération chirurgicale injection par voie veineuse comme une transfusion Mais problèmes immunologiques : rejet GVH (réaction du greffon contre lHôte)

8 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 8 La greffe de moelle osseuse Importance de la compatibilité tissulaire Typages HLA identiques du: ( Human Leucocyte Antigens) Donneur Receveur

9 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 9 La greffe de moelle osseuse Les donneurs potentiels : la fratrie : 25% des cas les donneurs volontaires de moelle osseuse la banque de sang de cordon

10 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 10 LE SYSTEME HLA

11 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 11 Human Leucocyte Antigen Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset Complexe Majeur d histocompatibilité de l Homme Polymorphe +++ Réalisation du typage HLA par prise de sang « Carte d identité », exprimée à la surface de toutes nos cellules nucléées Chaque sujet est unique Le système HLA

12 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 12 LA COMPATIBILITE Une étude de compatibilité nécessite : - La réalisation du TYPAGE HLA du patient et des donneurs - La COMPARAISON des typages HLA du patient et des donneurs - La RECHERCHE de lidentité tissulaire la plus proche, la plus parfaite.

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17 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 17 -Codominance: tous les gènes sont exprimés (2 Ag détectés par locus, hormis pour les homozygotes) - Transmission en bloc sous forme dhaplotypes (peu de possibilité de crossing over)

18 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 18 GENETIQUE DES POPULATIONS Grande diversité du système HLA Combinaisons préférentielles dans certaines populations Information sur lhistoire génétique de chaque population 4 grands groupes de POPULATIONS : CAUCASOÏDE NEGROÏDE MONGOLOÏDE AUSTRALOÏDE

19 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 19 Nomenclature des antigènes HLA

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21 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 21 Méthodologie de létude du système HLA: phénotypage: microlymphocytotoxicité (LCT) génotypage: résolution générique (2 digits): basse résolution résolution allélique (4 voire 6 digits): haute résolution (résolution intermédiaire: moyenne résolution) ->2 manières dexprimer les spécificités HLA, avec des correspondances entre elles

22 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 22 Isolement des cellules mononucléées sur Ficoll PRINCIPE et RESULTATS L'isolement sur Ficoll repose sur les densités respectives des cellules et du Ficoll. Après centrifugation, les cellules mononucléées se rassemblent en un anneau opaque surnageant au dessus du Ficoll. Celui-ci est ensuite prélevé délicatement.

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27 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 27 LA BIOLOGIE MOLECULAIRE appliquée au typage HLA

28 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 28 Cellule Chromosomes ADN La Biologie Moléculaire traite de la biologie des acides nucléiques

29 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 29 Double hélice Structure de lADN

30 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 30 Liaisons phospho-diesters (l. irréversibles, catalysées par des enz DNA pol. ou nucléases) Liaisons hydrogène (réversibles sous leffet de la chaleur ou dagents chimiques: dénaturation-hybridation) A-T G-C

31 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 31 Taq polymerase, + dNTP Couple damorces spécifiques Matrice dADN Permet damplifier une zone spécifique sur un gène Principe de la PCR

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33 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 33 Révélation par BET fluorescent qui sinsère dans la double hélice (intercalant) Identification en fonction du PM Migration de lADN chargé négativement en gel dagarose

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35 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine- Limousin 35 Polymorphisme du système HLA : sérologie versus DNA HLA class IIHLA class I antigènes DPDQDR B1/B3/B4/B5 BCA allèles (DNA) (>1700)


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