Présentée par: Mme LIAMANI Ouafia Doctorante en biologie Option: biologie de la reproduction Cryodécapage Technique moderne de cytologie Etude des membranes cellulaires l'observation avec un (MET)

congélation ou utilisation de froid Cryo élimination de la partie superficielle d’un objet Décapage Enlever la partie superficielle d’un objet par congélation

éviter une fixation chimique éviter tout artefact étudier la morphologie ou l’ultra-structure Intérêt

Congélation Coupe ou cryofracture Décapage Ombrage métallique Isolement des répliques Observation au MET

1- Congélation

Définition: Un processus de fixation très rapide Action de soumettre au froid un échantillon But: Assure une bonne conservation de la moindre petite structure. Méthode: congelé dans l’azote liquide à -196°C jusqu'à -200°C par le biais du fréon

Congélation dans l’azote liquide Azote liquide

2- Coupe ou cryofracture

Définition: Coupe au froid. But: Une légère cryodessiccation ou cryofracture décape la surface de l’échantillon Méthode: Lame d’acier refroidie par l’azote liquide, permet une coupe faite de manière à obtenir une surface lisse

Détails des 2 feuillets membranaires dénudés

3-Décapage

Définition: élimination de la partie superficielle d’un objet But: Augmenter le pouvoir de résolution une étape de sublimation Méthode: se fait sous vide élevé (10 -6 Barr).En approchant à 2 mm environ de la surface de l’échantillon qui est à -100°C une plaque portée elle-même à une température de 126°C

La glace est éliminée de la surface par sublimation Membrane nucléaire à nu, avec ses protéines et ses particules Plaque chauffante à 126°C -100°C 2mm

4- Ombrage métallique

Définition: Transformation d'un élément transparent en un élément opaque pour l'observation au microscope But: Faire ressortir tous les détails superficiels de la cellule Méthode: 1 ère vaporisation verticale d’une mince couche de carbone, c’est la réplique carbonée ; cette dernière est ombrée par 2 ème vaporisation oblique de platine

carbone Dépôt d’un film continu de carbone à la surface platine Ombrage de la surface par un film de platine

5- Isolement des répliques

H 2 SO 4 HCL Elimination de la partie organique par un acide minéral

Isolement de la réplique Réplique carbone-métal

6- Observation au MET

Microscope électronique à transmission

Cellule végétale (Euglena gracilis )observer au MET après cryodécapage

Appareil de Golgie observer au MET après cryodécapage

Une portion de chloroplaste de chlamydomonas (algue unicellulaire) observer au MET après cryodécapage