ACPA EN PERIODE PRENATALE : EXPERIENCE DE DEUX ANS D’ACTIVITE PRESCRITE PAR LES CPDPN DU CHU DE LYON Linda Pons Damien Sanlaville Laboratoire de Cytogénétique Constitutionnelle, CHU de Lyon Centre de Recherche en Neurosciences de Lyon Lyon, Février 2016

Introduction ACPA en post-natal = examen de 1° intention pour les DI et les syndromes malformatifs + 12 % de diagnostic (Miller et al. 2010) Transfert progressif vers la période prénatale Faisabilité de la technique Interprétation des résultats

GBP réseau Achropuce - septembre 2013 Caractérisations de remaniements chromosomiques Marqueur chromosomique Remaniement chromosomique apparemment équilibré avec signe d’appel échographique et/ou de novo Remaniement chromosomique déséquilibré à préciser (taille, complexité…) Signes d’appel échographiques Clartés de nuque ≥ 3,5 mm RCIU ˂ 3°percentile sans étiologie Syndromes malformatifs « Petits » signes à discuter au cas par cas Exclusion Dépistage combiné (avec clarté de nuque < 3,5 mm) Marqueurs sériques seuls Âge maternel Anxiété maternelle

Patients et Méthodes Étude observationnelle rétrospective Juin 2013 à juin 2015 Prescripteurs : les 3 CPDPN du CHU de Lyon

Indication discutée au CPDPN, information, consentement PLA (25 ml) 10 ml 5 ml 10 ml Culture FISH : aneuploïdie ? Culot : extraction ADN Mère 5ml EDTA En pratique à Lyon

Indication discutée au CPDPN, information, consentement PLA (25 ml) 10 ml 5 ml 10 ml Culture FISH : aneuploïdie ? Culot : extraction ADN Mère 5ml EDTA Caryotype fœtal Culture de secours En pratique à Lyon

Indication discutée au CPDPN, information, consentement PLA (25 ml) 10 ml 5 ml 10 ml Culture FISH : aneuploïdie ? Culot : extraction ADN Aneuploïdie Pas d’aneuploïdie Mère 5ml EDTA Caryotype fœtal Culture de secours Pas d’ACPA En pratique à Lyon

Indication discutée au CPDPN, information, consentement PLA (25 ml) 10 ml 5 ml 10 ml Culture FISH : aneuploïdie ? Culot : extraction ADN Aneuploïdie Pas d’aneuploïdie Mère 5ml EDTA Caryotype fœtal Microsatellites : contamination maternelle ? Culture de secours Contaminé Non contaminé Pas d’ACPA ACPA Lame 8 x 60K Puce PréCytoNEM Résolution 1 Mb Vérifications : FISH / qPCR En pratique à Lyon

Indication discutée au CPDPN, information, consentement PLA (25 ml) 10 ml 5 ml 10 ml Culture FISH : aneuploïdie ? Culot : extraction ADN Aneuploïdie Pas d’aneuploïdie Mère 5ml EDTA Caryotype fœtal Microsatellites : contamination maternelle ? Culture de secours Contaminé Non contaminé Pas d’ACPA ACPA Lame 8 x 60K Puce PréCytoNEM Résolution 1 Mb 2°prélèvement ? Vérifications : FISH / qPCR En pratique à Lyon

Cohorte 282 prélèvements 278 PLA 2 PVC + 2 sangs fœtaux FISH : aneuploïdie ? 22 aneuploïdies 260 pas d’aneuploïdie Microsatellites : contamination maternelle ? 13 contaminés 247 non contaminés LA pas toujours hémorragique Pas d’ACPA 258 ACPA 2 échecs : 1 contamination à 100% et 1 matériel insuffisant

Indications 249 SIGNES D’APPEL ECHOGRAPHIQUES 96% 127 malformations uniques 49% 42 anomalies du SNC 16% 42 anomalies du cœur 16% 103 syndromes polymaformatifs 40% 19 anomalies autres 7% 7 CARACTERISATIONS DE REMANIEMENT CHROMOSOMIQUE 3% 4 JUMEAUX SANS SIGNE D’APPEL ECHOGRAPHIQUE 1% D’après la classification de Shaffer et al. 2012

Résultats Cohorte de 260 ACPA en prénatal : 235 ACPA normales (90,4 %) 23 ACPA avec anomalies (8,9 %)  21 pathogènes 2 VOUS hérités d’un parent sain 2 échecs (0,8 %)

Comparaison caryotype / ACPA 245 fœtus à caryotype normal 14 fœtus à caryotype anormal 1 échec ACPA 235 fœtus à ACPA normale 23 fœtus à ACPA anormale 2 échecs 12 anomalies visibles au caryotype et en ACPA 2 anomalies visibles seulement au caryotype 11 anomalies visibles seulement en ACPA (4,5%) 2,7% Lee et al. (2497 fœtus) 3,3% Fiorentino et al. (1037 fœtus) 4,2% Breman et al. (1075 fœtus) 5,3% Shaffer et al. (5003 fœtus) 11,3% Rooryck et al. (224 fœtus) 2,1% Malan et al. (374 fœtus)

ACPA et caryotype anormal Caractérisation de remaniement chromosomique : Marqueur chromosomique de type isodicentrique du chromosome 14 (17,7 Mb) sur hygroma à 5,1 mm

ACPA et caryotype anormal Signes d’appel échographiques : Délétion 5pter classique ou syndrome du cri du chat (16,9 Mb) sur hypoplasie cérébelleuse Rendu en 13 jours Rendu en 9 jours

Caryotype anormal et ACPA normale Remaniement chromosomique : Translocation réciproque t(17;20)(q21;p12) équilibrée, de novo, sur hygroma 6,1 mm Signes d’appel échographiques : Inversion péricentrique inv(8)(p22q12) équilibrée, héritée de la mère, sur RCIU et AOU

ACPA anormale et caryotype normal Délétion de 1,4 Mb en 16q24.2q24.3, de novo, emportant ANKRD11 responsable du syndrome KBG sur RCIU et clarté de nuque à 3,6 mm

ACPA anormale et caryotype normal Duplication de 3,6 Mb en 11p15.5p15.4, de novo, responsable d’un syndrome de Beckwith-Wiedemann, sur hydramnios, macrosomie, néphromégalie

Anomalies récurrentes ? 3 microdélétions 22q11.2 / 23 ACPA anormales de novo Indications : Tétralogie de Fallot, rein unique, polydactylie CIV, interruption de l’arche aortique CIV, hygroma à 5,3 mm

Écueil Trisomie 18 et discordance fœto-placentaire : PVC normale en direct et échec de culture ACPA en direct sur PLA (pas de test d’aneuploïdie)

Autres résultats Délai de rendu moyen pour les examens en direct (208) = 13,9 jours à partir du prélèvement 45 diagnostics fait après l’ACPA (17,3%) : Fœtopathies infectieuses ou toxiques Anomalies vasculaires Causes moléculaires ou syndromes malformatifs sans gène connu Taux d’IMG selon le résultat de l’ACPA : ACPA normale : 106/235 soit 45% ACPA anormale : 11/23 soit 49%

Conclusion Succès du transfert en diagnostic de l’ACPA en période prénatale au CHU de Lyon : Identification de l’ensemble des anomalies chromosomiques déséquilibrées visibles au caryotype Non identification des anomalies chromosomiques équilibrées Identification des anomalies chromosomiques déséquilibrées cryptiques Augmentation des diagnostics de 4,5 % par rapport au caryotype seul Cohérence avec les données publiées

Remerciements Service de génétique : Equipes d’obstétrique : Eudeline Alix, Carine Abel, Dominique Boggio, Marie-Pierre Cordier, Elisabeth Ollagnon, Audrey Vichier, Audrey Labalme, Nicolas Chatron, Caroline Schluth-Bolard, Marianne Till, Damien Sanlaville, Patrick Edery Equipes d’obstétrique : HFME : Agnès Bordes, Cécile Lajeunesse, Jérôme Massardier, Mona Massoud, Juliette Miribel, Pascal Gaucherand Lyon Sud : Jocelyne Attia, Fabienne Champion Raskin, Etienne Liaras Croix Rousse : Jonathan Caloone, Axel Fichez, Cyril Huissoud, René Charles Rudigoz

Prenat Diag 2012

Résultats

  RESULTAT ACPA INDICATION NORMAL VOUS PATHOGENE ECHEC TOTAL % CARACTERISATION DE REMANIEMENT CHROMOSOMIQUE 2 5 7 2,69 SIGNES D'APPEL ECHOGRAPHIQUES 229 16 249 95,77 Anomalies structurelles de plusieurs systèmes 46 3 49 18,85 Anomalies structurelles de plusieurs systèmes + anomalie non structurelle 26 29 11,15 Et anomalie de croissance fœtale 10 12 4,62 Et anomalie de liquide amniotique 1,92 Et "petits" signes Et anomalies non structurelles multiples 4 1 Anomalie structurelle d'un seul système 116 127 48,85 Système nerveux central 39 42 16,15 Face 0,77 Cœur 37 Tractus respiratoire 11 4,23 Tractus digestif 0,38 Paroi abdominale Tractus génito-urinaire Système musculo-squelettique 14 5,38 Nuque et séreuses Anomalie structurelle d'un seul système + anomalie non structurelle 22 25 9,62 8 9 3,46 1,54 6 2,31 0,00 Anomalie non structurelle isolée 18 6,92 Anomalie de croissance fœtale Anomalie de liquide amniotique "Petits" signes Anomalies non structurelles multiples JUMEAUX SANS SIGNES D'APPEL ECHOGRAPHIQUES 235 21 260 100,00

Triplication de 17,7 Mb en 14q11.2q13.1 de novo 47,XX,+mar dn Marqueur chromosomique à type isodicentrique du 14 hygroma 5,1 mm Délétion 1,4 Mb en 15q13.2q13.3 hérité de la mère 46,XX Délétion VOUS, héritée, pas de lien avec hernie diaphragmatique, CHRNA7 prédispose à des anomalies neuro-développementales hernie diaphragmatique G Duplication 28,9 Mb en 3q26.2q29 Délétion 832 kb en 21q22.3 46,XX,der(21)t(3;21)(q23.2;q22.3)dn  Dérivé de translocation(3;21) déséquilibré, caryotypes parentaux normaux fente labiale, hexadactylie Duplication 8,3 Mb en 20q13.2q13.33 46,XY Dérivé de translocation(14;20) déséquilibré, caryotype maternel normal agénésie partielle CC T18 47,XY,+18 Discordance fœto-placentaire donc pas de fast FISH RCIU, VDDI, hygroma 6,1 mm Duplication 34 Mb en 6p25.3p21.31 Délétion 2,2 Mb en 6q27 46,XX,der(6)dup(6p)inv(6)(p21.31q27) Dérivé déséquilibré d'inversion péricentrique du 6, caryotype maternel porteur d'une inversion équilibrée du 6 RCIU, agénésie partielle CC, hypoplasie cérébelleuse Délétion 16.5 Mb en 7q34q36.3 46,XX,der(7)?del(7)(q33) Emporte de très nombreux gènes dont SHH RCIU, marqueurs sériques 1/27 T21 47,XY,+21 Vu en fast FISH mais SAE inhabituels RCIU, tétralogie de Fallot, pouces bifides, hygroma T22 47,XX,+22  T22 hydramnios, RCIU, agénésie vermienne, cardiopathie, atrésie œsophage, AOU Délétion 16,9 Mb en 5p15.33p15.1 46,XX,del(5)(p15.1) Délétion 5pter classique, cri du chat hypoplasie cérébelleuse Délétion 1,4 Mb en 16q24.2q24.3 Emporte ANKRD11 responsable du syndrome KBG RCIU, nuque 3,6 mm Délétion 2,5 Mb en 22q11.21 22q11 classique emportant TBX1 CIV, hygroma 5,3 mm tétralogie de Fallot, rein unique, polydactylie Délétion 17 Mb en 18q21.33q23 46,XX,del(18)(q21) Syndorme 18q- immobilisme fœtal, pieds bots Délétion 8,7 Mb en Xp22.33p22.31 46,X,del(X)(p22.31)dn Délétion emportant la région PAR et d'autres gènes marqueurs sériques 1/248 Délétion 1,9 Mb en 20q12 Emporte MAFB : ostéolyse multicentrique carpotarsale os longs courts, fente palatine bilatérale Duplication 3,6 Mb en 11p15.5p15.4 Syndrome de Beckwith Wiedemann hydramnios, macrosomie, néphromégalie cardiopathie Délétion 4,6 Mb en 21q21.2q21.3 Emporte de nombreux gènes fente faciale, pieds bots Délétion chrX en mosaïque 20 à 30 % mos 45,X[13]/46,XX[12] Turner en mosaïque 20 à 30 % tétralogie de Fallot Duplication 43,7 Mb en 2p25.3p21 46,XX,dup(2)(p21;p25.3) Trisomie 2pter Délétion 10,2 Mb en 8q21.12q21.3 Duplication 1,3 Mb en 17q12 Délétion pathogène, emporte de nombreux gènes Duplication VOUS, comporte HNF1B Duplication 2,3 Mb en 4q22.1 hérité du père Duplication VOUS, hérité, non décrit pieds bots

Résultats Bof RESULTAT ACPA ISSUES DE GROSSESSE NORMAL VOUS PATHOGENE   RESULTAT ACPA ISSUES DE GROSSESSE NORMAL VOUS PATHOGENE ECHEC TOTAL INTERRUPTION 113 1 12 2 128 FCS MFIU 7 9 IMG 106 10 119 NAISSANCE 121 131 Enfant mort-né Naissance vivante 120 130 dont décès le 1° mois de vie 6 8 PDV 235 21 260 NOMBRE DE PATIENTS NOMBRE DE DIAGNOSTIC TAUX DIAGNOSTIQUE % ACPA EN PRENATAL 260 23 8.85 AUTRES 45 17.31 TOTAL 68 26.15 Bof

Résultats Délai de rendu moyen pour les examens étudiés en direct (208) = 13,9 jours à partir du prélèvement

Contamination maternelle Prélèvement le jour de l'IMG Contaminations Patient Contamination maternelle Culture Prélèvement le jour de l'IMG 2° prélèvement Rendu Patient A 100%   2 PLA N Patient B sur PVC PVC + PLA Patient C 25% Patient D >80% au direct OK Patient E Patient F doute sur PVC Patient G 30% Patient H Patient I oui CGHarray sur tissu en foetaopatho ? Echec Patient J 50% N mais contaminée 50% Patient K Patient L 30 à 50% N mais contaminée 30 à 50% Patient M 15%