CAS CLINIQUE : QUAND DES ANTICORPS HÉTÉROPHILES DÉTRAQUENT LES RÉSULTATS DE GENTAMICINE AU LABORATOIRE… LES RÉSULTATS DE GENTAMICINE AU LABORATOIRE… Julie.

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CAS CLINIQUE : QUAND DES ANTICORPS HÉTÉROPHILES DÉTRAQUENT LES RÉSULTATS DE GENTAMICINE AU LABORATOIRE… LES RÉSULTATS DE GENTAMICINE AU LABORATOIRE… Julie Amyot 1, Michel Savoie 2 et Robert Robitaille 1 1 Département de biochimie et 2 Département de pharmacie Hôpital Maisonneuve-Rosemont Introduction Les anticorps hétérophiles sont des anticorps (AC) endogènes (source humaine) trouvés dans le sérum (ou le plasma) et qui peuvent se lier aux immunoglobulines d'autres espèces, notamment les espèces utilisées (souris, lapin, cobaye, chèvre, etc.) pour générer les anticorps utilisés comme réactifs pour les immunoessais. Plusieurs types d’AC hétérophiles, réagissant avec différentes portions de l’immunoglobuline G (IgG) animale existent et peuvent interférer dans les dosages immunologiques. Parmi ceux-ci, notons les AC anti-animaux qui sont produits chez des individus exposés suite à un contact prolongé avec des animaux, à des préparations d’origine animale ou à une blessure causée par un animal. Les AC développés présentent une affinité élevée contre les protéines de l’espèce animale en cause. C’est cette très grande affinité qui permet aux AC hétérophiles d’interférer dans la plupart des essais immunologiques, incluant les essais immunométriques. Les AC hétérophiles interfèrent avec les essais immunologiques via deux principaux mécanismes (figure 1). Les AC hétérophiles ou anti-animaux peuvent affecter les résultats en créant un pont entre l’AC de capture et l’AC signal (résultats faussement élevé), ou en neutralisant un ou les deux AC, empêchant leur réaction (résultat faussement abaissé). Mise en contexte Résultats (suite) Discussion/Conclusions Résultats Tableau II: Concentrations de gentamicine non-linéaires confirment la présence d’une interférence analytique Afin confirmer la présence d’une interférence dans le dosage de la gentamycine, différentes dilutions d’un spécimen sérique du patient (1:2, 1:5 et 1:10) ont été effectués et la linéarité des résultats obtenus a été évaluée. Figure 1: Mécanismes par lesquels les AC hétérophiles interfèrent avec les méthodes immunométriques. (A) Essai immunométrique sans interférence; (B) création d’un pont entre l’AC de capture et l’AC signal; (C) neutralisation de l’AC signal et (D) neutralisation de l’AC de capture (Adapté du site internet de la compagnie Scantibodies).  Les résultats non-linéaires ainsi que le traitement des séra avec les tubes bloquant les ACs hétérophiles ont confirmé la présence d’AC hétérophiles interférents avec la méthode de dosage de la gentamycine sur système Architect, mais pas sur le système Synchron.  Après discussion avec l’équipe de soins du patient, il semblerait que ce dernier ait été exposé pendant plusieurs années à des souris, suggérant ainsi la possibilité d’AC anti-souris endogènes intéférents.  Ce cas clinique est le premier, à notre connaissance, qui démontre une interférence par la présence d’AC hétérophiles dans le dosage de la gentamycine. Remerciements  Remerciements à Dre Marie-Claire Bélanger, D.É.P.D., biochimiste clinique au département de biochimie de l’Hôpital Saint-Luc du CHUM.  Remerciements aux technologistes médicaux (médicales) du laboratoire de biochimie de l’Hôpital Maisonneuve-Rosemont et du département de biochimie de l’Hôpital Saint-Luc du CHUM.  Remerciements à la SQBC pour une bourse de formation Un homme de 71 ans présentant une endocardite a été traité par antibiothérapie à la gentamicine à l’Hôpital Maisonneuve-Rosemont. Au cours de son traitement, les niveaux sériques de gentamicine demeuraient anormalement bas, ou inférieurs à la limite de détection de la méthode, et ce, même si des doses élevées de l’antibiotique lui étaient administrées. Ces résultats suggéraient la présence d’un interférence analytique, possiblement la présence d’AC interférents. Matériel et Méthodes Mesure de la gentamicine sur deux plateformes qui partagent le même principe analytique:  Système Architect i2000SR (Abbott Diagnostics)  Système Synchron DXC (Beckmann Coulter) Principe analytique: Essais immunoturbidimétriques PETINIA (particle-enhanced turbidimetric inhibition immunoassays) où la gentamicine recouvre des microparticules et lie le fragment F(ab’) 2 d’un AC monoclonal anti-souris dirigé contre la gentamicine. La liaison gentamicine – AC monoclonal anti-souris permet la formation d’un aggrégat qui augmente la turbidité de la solution. La gentamicine libre provenant du sérum patient compétitionne avec le fragment F(ab’) 2 de l’AC monoclonal anti-souris inhibant partiellement la réaction d’agglutination. Tubes bloquant les AC hétérophiles (Scantibodies Laboratory) La présence d’anticorps hétérophiles a été évaluée en traitant les échantillons sériques avec les tubes bloquant les AC hétérophiles (Tubes Scantibodies) puis en dosant à nouveau ces échantillons à la fois sur le système Architect et sur le système Synchron. Objectif de l’étude Confirmer l’hypothèse selon laquelle les résultats discordants de gentamicine résultaient d’une interférence analytique du type AC interférents. Spécimen Gentamicine (mg/L) Dilutions Fenêtre thérapeutique 1:21:51:10 Post-dose (30 min.) > 20,2> 50,0> 100 Pic (0,5 à 1 h post-infusion) : 0.5 – 10.0 Toxicité: > 10.0 DateSpécimenGentamicine (mg/L) Jour 1Pré-dose< 0,5 Jour 5Pré-dose< 0,5 Jour 8Pré-dose Post-dose < 0,5 0,5 Jour 10Pré-dose Post-dose < 0,5 12,5 Jour 11Post-dose< 0,5 Jour 14Pré-dose< 0,5 Jour 18Pré-dose1,3 Jour 20Pré-dose< 0,5 Fenêtre thérapeutique pré-dose (15 min. avant la dose d’antibiotique): Nadir: 10,0 mg/L Fenêtre thérapeutique post-dose (30 min. suivant la dose d’antibiotique): Pic (0,5 à 1 h post-infusion) : 0.5 – 10.0 mg/L; Toxicité: > 10.0 mg/L Tableau I: Concentrations sériques de gentamicine dans le temps suivant l’initiation de l’antibiothérapie Les concentrations sériques de la gentamicine (15 min. pré-dose et 30 min. post-dose) ont été mesurées sur le système Architect entre le jour 1 et le jour 20 suivant l’initiation de l’antibiothérapie. DateSpécimen Gentamicine (mg/L) Système ArchitectSystème Synchron Pré- traitement Post- traitement Pré- traitement Post- traitement Jour10Post-dose12,516,421,51n/a Jour 11Post-dose< 0,52,84,014,2 Jour 18Pré-dose1,34,25,335,32 n/a: Non-applicable Fenêtre thérapeutique pré-dose (15 min. avant la dose d’antibiotique): Nadir: 10,0 mg/L Fenêtre thérapeutique post-dose (30 min. suivant la dose d’antibiotique): Pic (0,5 à 1 h post-infusion) : 0.5 – 10.0 mg/L; Toxicité: > 10.0 mg/L Tableau III: Concentrations de gentamicine obtenues sur les plateformes Architect et Synchron avant et après traitement avec les tubes bloquant les AC hétérophiles (Tubes Scantibodies) Le traitement des séra avec les tubes bloquant les AC hétérophiles ont montré un recouvrement partiel des valeurs de gentamycine sur le système Architect, sans toutefois atteindre des valeurs obtenues par une méthode n’étant pas affectée par l’interférence (système Synchron). AC de capture AC signal Analyte A AC de capture AC signal Pas d’analyte AC hétérophile B AC de capture AC signal Analyte AC hétérophile C AC de capture AC signal Analyte AC hétérophile D AC de capture AC signal Analyte A AC de capture AC signal Pas d’analyte AC hétérophile B AC de capture AC signal Analyte AC hétérophile D