Analyse et dosage des résidus de Carbamates dans la pomme par HPLC UNIVERSITE HASSAN II MOHAMMEDIA-CASABLANCA Faculté des Sciences et Techniques Mohammedia MASTER SCIENCES ET TECHNIQUES Spécialité : Sécurité Alimentaire et Démarche Qualité MEMOIRE DE STAGE DE FIN D’ETUDES Intitulé Analyse et dosage des résidus de Carbamates dans la pomme par HPLC Présenté par : Imane HACHOUMI Les membres des jury : - Pr. A. AMMAR - Pr. N. MESKINI - Pr. F. ZKHIRI - Mme. N.RHADDIOUI Encadrée par: - Pr F. ZKHIRI - Mme N.RHADDIOUI 2011-2013

Plan du travail Présentation du lieu de stage Introduction Synthèse bibliographique Matériel et méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives

Présentation du lieu du stage Organe national diagnostic médical le contrôle de la qualité d'hygiène au Maroc Pôle Biologie Médicale Pôle Biologie Environnementale

Mon stage

Augmenter le rendement des cultures Introduction générale Améliorer la qualité des produits Les pesticides Augmenter le rendement des cultures l’environnement la qualité des produits agricoles la santé des populations

Contrôler les teneurs en résidus de pesticides Vérifier qu’ils ont été effectués de manière correcte Contrôler les teneurs en résidus de pesticides Aucun risque pour la santé du consommateur

Objectif du travail L’objectif de ce travail est de doser les résidus de carbamates dans les pommes par la chromatographie liquide à haute performance (HPLC).

Pesticides substances chimiques Directive européenne = la protection des plantes cultivées et des produits récoltés Directive européenne 91/414/CE du 15 juillet 1991 - Les attaques de champignons de parasites, d’insectes, d’acariens; - Détruire les mauvaises herbes. .

Classification des pesticides la nature de l’espèce à combattre la nature chimique - organochlorés, organophosphorés, carbamates - insecticides, - herbicides, - les fongicides.

Alkyle, aryle, un dérivé d'oxime.. Carbamates Esters de l'acide N-méthylcarbamique (H) ou (CH3)  Alkyle, aryle, un dérivé d'oxime.. (CH3) Structure générale d’un carbamate

Utilisations des carbamates

Absorbés par les feuilles des plantes l’impact des carbamates sur l’environnement  Solubilité dans l'eau Absorbés par les feuilles des plantes Absorbés par les racines

Comportement des carbamates dans l’environnement Pesticide Solubilité dans l’eau Solubilité dans les graisses Biodégradabilités Dégradation Aldicarbe forte Faible Carbofuran moyenne Méthomyl

l’impact des carbamates sur la santé Voie digestive Inhalation Voie cutanée Carbamates peuvent absorbés Dose Voie d’exposition Le type de carbamates impliqué L’ individu L’apparition d’effets cliniques

Inhibition de l’Acétylcholinestérase

Symptomatologie Intoxication aigue Singes nicotiniques Effets muscariniques Signes muscariniques Nausée, Diarrhée Salivation, transpiration, sécrétion bronchique. Singes nicotiniques Faiblesse musculaire voir paralysie, Hypertention. Effets nicotiniques

dans ou sur les aliments Résidus les métabolites Quantité laissée par un pesticide dans ou sur les aliments Produits de réaction

Les résidus de carbamates dans la pomme Le Maroc est le second producteur africain des pommes avec 30% de la production du continent. la culture du pommier est sujette de nombreuses attaques parasitaires causant ainsi des pertes remarquables en rendement. la lutte chimique

Puisque on vise à doser les résidus de carbamates dans la pomme La question qui se pose est ce que les carbamates sont utilisés dans la culture du pommier au Maroc?

les matières actives utilisées sur la culture du pommier au Maroc. (ONSSA) liste des pesticides à usage agricole homologués au Maroc le 04 février 2013 les matières actives utilisées sur la culture du pommier au Maroc. Numéro Homologation Classe Formulat- ion Matière (s) Active (s) Type de traitement Ennemis DAR* (jour) E11-6-003 Fongicide WP Mancozèbe Parties aériennes Tavelure 45 j B09-7-008 Insecticide Azinphos-méthyl (OP) Carpocapse 30j D09-3-003 Méthomyl 21 j E11-9-019 EC Chlorpyriphos- éthyl (OP) Cochenilles E02-9-007 SC Carbendazime 15j 0827 Fenthion 1020 Malathion 7j 0526 Carbaryl

Le dosage des résidus de carbamates dans la pomme Le pré-traitement des échantillons L’extraction des pesticides La purification des extraits Analyse par Chromatographie en phase liquide(HPLC)

Matériel et Méthodes

polaires et thermolabiles Carbamates nécessite méthodes sensibles et fiables Notre objectif: doser et à analyser les résidus de carbamates NF EN 12393-2, 1998 Déterminer des résidus présents dans les végétaux par HPLC

Prélèvement des échantillons Dayaat Aoua, de Midelt et Arbor Oulmes

Préparation des solutions standards Les standards analytiques des carbamates utilisés (Carbaryl, Carbofuran, Aldicarb, Bendiocarb, Baygon et Méthomyl) SM Carbamates Acétonitrile – eau (50:50, v/v) Concentration de 100 ppm chacun Dilutions de 5 ppm

Méthode d’extraction

Technique de Dopage PJNP+ Carbaryl (5 ppm) PJNP + Bendiocarb PJNP+ mélange 1 (Carbofuran, Carbaryl, Aldicarb)  PJNP+ mélange 2 (Baygon, Méthomyl, Carbofuran)

Résultats

Le dosage des résidus de carbamates dans la pomme Chromatogramme HPLC-UV d‘un échantillon de pomme jaune non pelée à 280 nm.

Les paramètres à déterminer: Le temps de rétention Le taux de récupération

Le dopage avec du mélange 1 (5 ppm) 8,757 min 6,521min 5,514min Chromatogramme HPLC-UV du mélange 1 de carbamates 5,598 min 6,588 min 8,777 min Chromatogramme HPLC-UV d’un échantillon de PJNP dopé avec un mélange 1

Le dopage avec du mélange 2 (5 ppm) Carbofuran= 6,521min Baygon= 6,500 min Chromatogramme HPLC-UV d’un mélange de carbamate (Méthomyl,Carbofuran, et Baygon)

Le taux de récupération Mélanges Carbamates Tr (min) Astd Aech (R%) Carbaryl 8,757 5181 4862 93,84 Bendioacarb 6,482 797385 706639 88,61 Mélange 1 60273 50100 83,12 Carbofuran 6,521 709385 607605 85,56 Aldicarb 5,514 41035 37962 92,51 Mélange 2 Baygon 6,500 90657 93476 103,10 Méthomyl 3,357 69273 59100 85,31 96231 106,14

Discussion

L’absence des résidus de composés carbamates dans les pommes L’analyse des échantillons effectuée par HPLC-UV = aucun résidus de carbamates. 1) la période de stockage ou à leur dégradation dans l’environnement. 2) les échantillons de pommes ne contenaient probablement que de faibles traces qui restent en dessous de la limite de détection par l’HPLC.

Aureobasidiwnpullulon 3) Nouvelles techniques de lutte biologique Mettre en évidence deux biopesticides contre les pathogènes de maladies de post-récolte des pommes CRRAM pullulons var. Pullulons 1113-5 Aureobasidiwnpullulon Ach1-1

le taux de récupération Evaluer la fiabilité et la conformité de la méthode d’extraction utilisée la méthode d’extraction adoptée au laboratoire est performante. 2 carbamates ont montré un rendement qui dépassent les 100% ; Baygon et Carbofuran.

Temps de rétention identiques pour les deux derniers composés une contamination méthode d’extraction adoptée n’est pas si efficace pour extraire le carbofuran et le propoxur Zrostlikova et al., en 2003: taux de récupération du Carbofuran n'était pas satisfaisant dans la pomme en raison de sa perte dans l'étape de filtration.

Conclusion

Echantillons de pommes Aucun résidus de carbamates l’efficacité de la méthode d’extraction Dopage Carbamates testés peuvent être extraits avec une efficacité importante le taux de récupération Satisfaisants, sauf 2 composés

Perspectives

Mettre en place un appareillage plus performants au Laboratoire l’HPLC-MS Amélioration de la récupération des composés de carbamates Améliorer la performance de la méthode en faisant varier l’équipement utilisé, l’extraction, les conditions chromatographiques.

Merci de votre attention