Les Bacilles Gram Positifs Le Diagnostique Les Bacilles Gram Positifs

Classification Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Non-sporulants Aérobie Listeria

Caractéristiques des Bacilles Sporulants Tous sont de gros bacilles Gram positifs Font des endospores Principalement retrouvés dans le sol, les eaux et la poussière Exigences nutrionelles très diverses Utilisent des sources de carbones simples et complexes Leurs spores leurs permettent de résister à des conditions extrêmes

Les Bacilles d’Importance Médicale Bacillus Majoritairement inofensifs Quelques espèces opportunistes Bacillus cereus & Bacillus subtilis Empoisonement alimentaire Une espèce pathogène Bacillus anthracis Anthrax

Les Bacilles d’Importance Médicale Clostridium Plusieurs espèces pathogènes Clostridium perfringens Gangrène gazeuse Clostridium tetani Tétanos Clostridium botulinum Botulisme Clostridium difficile Diarrhée

Identification: Tests Métaboliques Bouillon de phénol rouge Métabolisme de sources de carbones simples Source de carbone: Peptone (protéine  acides aminés) Sucre désiré ajouté Indicateur de pH Phénol rouge Jaune pH acide Orange pH neutre Rouge pH alcalin

Bouillons de Phénols Rouges Utilisation de Carbone: Sucre Réaction acide (Jaune) ou neutre (Original) Protéine Réaction alcaline (Rouge)

Fermentation du Glucose Accumulation d’acide: Glucose  pyruvate  acide lactique et/ou acétique + CO2 Accumulation de produits neutres Glucose  pyruvate  acétoine  2 butanediol + CO2

Test de Méthyl Rouge Test pour l’accumulation d’acide Sources de carbones: Glucose et protéines Indicateur -méthyl rouge; Ajouté après MR +: rouge (pH < 5.2) MR - : jaune (pH > 5.2)

Test de Voges-Proskauer Réactifs VP: butanediol + -naphthol + KOH + O2  acétoine VP + = rouge VP - = jaune Résultats habituelle de MR/VP: MR+/VP-; MR-/VP+ MR-/VP-

Utilisation d’Urée Carbone: Enzyme Indicateur de pH Urée Uréase Phénol rouge Négatif Positif C O + 2 H2O  CO2 + H2O + 2 NH3  (NH4)2CO3 H2N urée ammonium carbonate (alcalin) Acides aminés

Utilisation du Carbone Complexe Trop gros pour le transport à l’intérieur Nécessite enzymes exocellulaires pour la dégradation externe en petites unités Polysaccharides Amidon (amylase) Lipides (lipase) Tributyrine Protéines (protéase) Caséine (caséinase)

Amylase Avant l’ajout d’iode Après l’ajout d’iode

Caséinase

Lipase

La Respiration Aérobie La Chaîne de Transport d’e- 3 H2O H+ 2 H+ 3 H+ + 3 OH- H2O 3 H+ + 1/2 O2 2 e- Fp Fe-S Q Cyt b Cyt o NADH + H+ FADH2 intérieur extérieur

Test d’Oxydase Cytochrome oxydase catalyse la réduction du capteur final d’e-, l’oxygène Un donneur artificiel d’e-, la phenylenediamine, est utilisé pour réduire le cytochrome oxydase Si l’enzyme est présente, le réactif incolore (état réduit) deviendra bleu (état oxydé)

Catalase 2H2O2 2H2O + O2  catalase Produit de la respiration Ajout de 3% H2O2 à la croissance bactérienne 2H2O2 2H2O + O2  catalase Produit de la respiration dommageable pour l’ADN Métabolisme d’aérobie requière la catalase Bulles (O2)

Respiration Anaérobie 2 H+ 3 H+ + 3 OH - 3 H2O NO2- + H2O (N = +3) nitrite NO3- + 2 H+ (N = +5) nitrate 2 e- Fp Fe-S Q Cyt b NADH + H+ FADH2 Nitrate réductase Intérieur Extérieur Capteur final d’e-

Nitrate Réductase Étape 1: Test pour nitrite NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O + NO2-  NO, N2O, NH2OH, NH3, N2 nitrate nitrite Étape 1: Test pour nitrite NO2- + acide sulfanilique et alpha naphthylamine  HNO2 Nitrate n’est pas réduit Absence de Nitrite Jaune Nitrate est réduit Production de Nitrite Rouge Nitrate est réduit au nitrite Nitrite est réduit Absence de Nitrite

Nitrate Réductase (suite) NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O + NO2-  NO, N2O, NH2OH, NH3, N2 nitrate nitrite Étape 2: Test pour présence du nitrate NO3- + Zn (s)  NO2- Nitrate est présent Réduction au Nitrite Rouge Nitrate est absent Nitrite a été réduit Jaune

Les Cocci Gram Positifs Le Diagnostique Les Cocci Gram Positifs

Aérobie & anaérobie facultatif Classification Cocci Gram Positifs Streptococcaceae Catalase - Aérobie & anaérobie facultatif Streptococcus Micrococcaceae Catalase + Aérobie Micrococcus Staphylococcus

Caractéristiques des Cocci Gram Positifs Tous sont non sporulants Principalement retrouvés parmi la flore naturelle des hommes et des animaux Exigences nutrionelles fastidieuses Utilisent des sources de carbones simples

Aggrégation Cellulaire des Cocci Gram Positifs Micrococcus & Streptococcus Streptococcus Micrococcus Staphylococcus

Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale Micrococcaceae Staphylococcus aureus Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et choc toxique Staphylococcus epidermidis Cause des infections opportunistes Staphylococcus saprophyticus Cause majeure de cystites chez les femmes

Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale Streptococcaceae Streptococcus pyogenes Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse de chair Streptococcus agalactiae Infections génitales Streptococcus mutans Endocardites Streptococcus pneumonia Otite, meningite et pneumonie Enterococcus spp. Infections opportunistes

Identification: Tests Métaboliques Microccocus Vs Staphylococcus Test d’oxydase Micrococci sont + Staphylococci sont – Bacitracine Micrococci sont sensibles Staphylococci sont résistants

Identification: Tests Métaboliques Différentitation des espèces de Staphylococcus Test de coagulase Les staphylococci coagulase positifs S. aureus Staphylococci coagulase négatifs Tous les autres Staphylococci Fermentation du mannitol S. aureus et quelques S. saprophyticus sont positifs S. epidermidis est negatif S. epidermidis S. aureus

Identification: Tests Métaboliques Différentiation des espèces de Streptoccocus Regroupement sérologique de Lancefield Fondé sur le type d’hydrate de carbone dans leur paroi 8 groupes (A-H et K-U) Groupe A: β-hémolytique - Streptococcus pyogenes Groupe B: β-hémolytique - S. agalactiae Groupe C: α ou γ hémolytique- S. viridans Groupe D: γ –hémolytique – Enterococcus Pas classifié d’après le regroupement de Lancfield α hémolytique- S. pneumoniae et S. mutans

Hémolyse Sanguine Gélose de sang: Discrimination d’après patrons d’hémolyses Hémolyse alpha - Hémolyse incomplète Hémolyse beta - Hémolyse complète Hémolyse gamma - Aucune hémolyse

Identification: Tests Métaboliques Identification de Streptoccocus pneumoniae Solubilisation par la bile Strep. pneumoniae est positif Autres Strep. sont négatifs Identification d’Enterococcus Test de bile-esculin Enterococcus est positif