Conclusion Réferences Introduction Résultats Matériel et méthodes Séminaire International de Biotechnologies Constantine 19-21Octobre 2015 Les Effets du TiO2 sur l’activité de la L-Asparaginase purifiée a partir de quelques souches de Pectobacterium carovotorum et Dickeya solani S. Allouache, T. A. Mostefaoui , R. Zaidi. Université de Bejaia, Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie 06000 Bejaia, Algérie Département de biologie physicochimique. Laboratoire de Microbiologie Appliquée. Equipe l’Humano laboratoire PCMC E-mail: selma_all@yahoo.com Introduction Les bactéries pectinolytiques (Pectobacterium et Dickeya solani), représentent une source potentielle de nombreuses enzymes extracellulaires. A côté, des pectinases, elles sont capables de produire d’autres enzymes d’intérêts tels que la L-asparaginase dotée de propriété thérapeutique. L’asparaginase est une enzyme qui hydrolyse l’asparagine pour donner l’aspartate et l’ammoniac, Le potentiel thérapeutique de l'asparaginase est bien établi, car il a induit la guérison de la plupart des patients souffrant de la leucémie lymphoblastique aiguë (LLA) et du lymphosarcome, ainsi des travaux récents ont montré l’efficacité de l ’enzyme contre l’acrylamide. L’objectif de cette étude est de rechercher si les souches ont la capacité de synthétiser et de produire l’asparaginase. Puis calculer l’activité enzymatique et tester les effets du TiO2 sur l’activité Pour cela une mise au point méthodologique s’impose. Elle consiste en une mise en culture de la bactérie dans un milieu producteur de cette enzyme suivie de sa purification. Résultats Matériel et méthodes Les résultats obtenus ont montré : Une formation de cristaux blanchâtres dans les deux échantillons après précipitation par le sulfate d’ammonium. une activité asparaginasique dans les deux échantillons. En effet, le reactif de Nessler réagit avec l’ammoniac libéré lors de l’hydrolyse de l’asparagine par l’asparaginase en donnant une couleur orange caractéristique. Une teneur en protéines beaucoup plus importante dans l’échantillon issu de Dickeya solani que celui obtenu avec Pectobacterium. La présence du TiO2 dans les échantillons modifie l’activité enzymatiques les résultats sont montrés dans la figue 2 Un profil éléctrophorétique caractérisé par la présence de bandes ayant migré au même niveau pour les deux échantillons testés Matériel biologique Pectobacterium carovotorum 88.22 initialement isolées à partir des tubercules de pomme de terre de semences locales infectées qui ont été précédemment caractérisées du point de vue taxonomique. Dickeya solani (DS), provient du laboratoire de protection des plantes – faculté interuniversitaire de Biotechnologie et de Médecine / Université de Gdansk Pologne. Les deux souches sont cultivées dans un bouillon nutritif par ensemencement d’une colonie isolée ayant poussé sur le milieu King B pendant 24H à 25°C. la culture est réalisée pendant 7 jours sous agitation faible et chaque jour le pH est vérifié et ajusté a 6.9. Le milieu obtenu et filtré et centrifugé, le surnagent obtenu est soumis à une précipitation par le sulfate d’ammonium a différentes saturations. Le précipité protéique obtenu est solubilisé par du tris-HCl (0,1M pH8,6) selon le protocole décrit par Rabilloud (1996) et soumis à une dialyse. Les enzymes contenues dans la solution protéique récupérée, sont dosées en utilisant la méthode de Bradford et leur activité est révélée par la le réactif de Nessler (Kumar et al, 2009). Différentes concentrations de TiO2 ont été introduit dans les échantillons enzymatique ainsi l’extrait brute. la mise en évidence du type d’enzyme recherchée, est réalisée par SDS-PAGE. Fig 1. Résultats du dosage des protéines Fig 3. Profil de migration de l’asparaginase des deux souches bactériennes Conclusion Fig 2. Résultats de l’activité enzymatiqer apres inclusion du TiO2des Les résultas obtenus à l’issu de cette étude ont montré que les deux souches testées ont la capacité de produire l’asparaginase. Toutes fois celle qui produit une quantité importante appartient au genre Dickeya. Nous avons constaté qu’àprès des différentes étapes de purification effectuées, une persistance de l’activité de l’asparaginase produite par les deux souches mise en évidence par le réactif de Nessler. Et le TiO2 semble avoir une influence sur cette activité. Par ailleurs, l’analyse du profil éléctrophorétique obtenu a montré la présence d’une seule bande pour chacune des souches. En la comparant avec une gamme de référence, cette bande correspondrait à l’asparaginase qui selon la littérature a une masse moléculaire de 33 KDA. Les bactéries restent toujours une source importante d’enzymes connus pour leurs propriétés thérapeutiques. Ainsi, la production de l’asparaginase par les deux souches de Pectobacterium et Dickeya, pourrait constituer une piste intéressante sachant que cette enzyme est utilisée pour taiter certains type de cancer. Réferences 1. Bradford,1976, Analitical Biochemistry. 72: 284 254. 2. Rabilloud, 1996, Electroph ,17: 813-29. 3. Kumar et al, 2009, Appl Microbial et Biotechnol. 84: 477-486