Conclusion References Introduction Matériel et méthodes Résultats LES IIÈMES JOURNÉES NATIONALES DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE Les 07 et 08 novembre 2012 à Béjaia Production de l’asparaginase par deux souches bactériennes Pectobacterium c. ssp carovotorum et Dickeya sp S. Allouache, S. Hachoude, R. Zaidi. Yahiaoui . Université de Bejaia, Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie 06000 Bejaia, Algérie Département de biologie physicochique. Laboratoire de Microbiologie Appliquée. E-mail:selmonella123@hotmail,fr Introduction Les bactéries pectinolytiques (Pectobacterium et Dickeya sp), représentent une source potentielle de nombreuses enzymes extracellulaires. A côté, des pectinases, elles sont capables de produire d’autres enzymes d’intérêts tels que la L-asparaginase dotée de propriété thérapeutique L’asparaginase est une enzyme qui hydrolyse l’asparagine pour donner l’aspartate et l’ammoniac, Le potentiel thérapeutique de l'asparaginase est bien établi, car il a induit la guérison de la plupart des patients souffrant de la leucémie lymphoblastique aiguë (LLA) et du lymphosarcome, ainsi des travaux récents ont montré l’efficasite de l ’enzyme contre l’acrylamide, L’objectif de cette étude est de rechercher si les souches ont la capacité de synthétiser et de produire l’asparaginase. Pour cela une mise au point méthodologique s’impose. Elle consiste en une mise en culture de la bactérie dans un milieu producteur de cette enzyme suivie de sa purification, 2 souches ont fait l’objet de cette étude il s’agit de Pectobacterium sp et Dickeya sp, Matériel et méthodes Résultats Matériel biologique Pectobacterium carovotorum 88.22 initialement isolées à partir des tubercules de pomme de terre de semences locales infectées qui ont été précédemment caractérisées du point de vue taxonomique (Yahiaoui-Zaidi et al., 2003). Souche de référence Dickeya sp (CFBP) obtenue à partir de la pomme de terre présentant les symptômes de la jambe noire. Les deux souches sont cultivées dans un bouillon nutritif par ensemencement d’une colonie isolée ayant poussé sur le milieu King B pendant 24H à 25°C. la culture est réalisée pendant 7 jours sous agitation faible et chaque jour le pH est vérifié et ajusté a 6.9. Le milieu obtenu et filtré et centrifugé, le surnagent obtenu est soumis à une précipitation par le sulfate d’ammonium a différentes saturations. Le précipité protéique obtenu est solubilisé par du tris-HCl (0,1M pH8,6) selon le protocole décrit par Rabilloud (1996) et soumis à une dialyse. Les enzymes contenues dans la solution protéique récupérée, sont dosées en utilisant la méthode de Bradford et leur activité est révélée par la le réactif de Nessler. la mise en évidence du type d’enzyme recherchée, est réalisée par SDS-PAGE. Les résultats obtenus ont montré : Une formation de cristaux blanchâtres dans les deux échantillons après précipitation par le sulfate d’ammonium. une activité asparaginasique dans les deux échantillons. En effet, le reactif de Nessler réagit avec l’ammoniac libéré lors de l’hydrolyse de l’asparagine par l’asparaginase en donnant une couleur orange caractéristique. Une teneur en protéines beaucoup plus importante dans l’échantillon issu de Dickeya sp que celui obtenu avec Pectobacterium. Un profil éléctrophorétique caractérisé par la présence d’une seule bande ayant migré au même niveau pour les deux échantillons testés Fig 1. Résultats du dosage des protéines Fig 2. Profil de migration de l’asparaginase des deux souches bactériennes Conclusion Les résultas obtenus à l’issu de cette étude ont montré que les deux souches testées ont la capacité de produire l’asparaginase. Toutes fois celle qui produit une quantité importante appartient au genre Dickeya. Nous avons constaté qu’àprès des différentes étapes de purification effectuées, une persistance de l’activité de l’asparaginase produite par les deux souches mise en évidence par le réactif de Nessler. Par ailleurs, l’analyse du profil éléctrophorétique obtenu a montré la présence d’une seule bande pour chacune des souches. En la comparant avec une gamme de référence, cette bande correspondrait à l’asparaginase qui selon la littérature a une masse moléculaire de 33 KDA. Les bactéries restent toujours une source importante d’enzymes connus pour leurs propriétés thérapeutiques. Ainsi, la production de l’asparaginase par les deux souches de Pectobacterium et Dickeya, pourrait constituer une piste intéressante sachant que cette enzyme est utilisée pour taiter certains type de cancer References 1. Bradford,1976, Analitical Biochemistry. 72: 284 254. 2. Rabilloud, 1996, Electroph ,17: 813-29. 3. Yahiaoui-Zaidi et al,,2003. Plant Path. 52: 28-40.