LES INCERTITUDES DES TECHNIQUES DU GENIE GENETIQUE

Les principaux types de vaccins  Vaccins issus d’agents pathogènes inactivés  par exposition à un agent chimique ou physique Vaccins issus d’agents pathogènes atténués  par multiplication en laboratoire : passages successifs dans des cellule cibles jusqu’à qu’ils perdent leur caractère pathogène par acquisition de mutations Vaccins formés de constituants (protéines) d’agents pathogènes  obtenus à partir du sérum sanguin de donneurs qui ont été préalablement exposés à l’agent pathogène en question  obtenus par génie génétique

Production de vaccins par génie génétique : principe général Vaccination Gène de la protéine de surface Virus Transcription Traduction Protéine de surface Gène de la protéine de surface Gène “marqueur” Vecteur d’expression levure Purification de la protéine de surface Cellule de levure Transfection Multiplication des levures

Production de vaccins par génie génétique : principe général Gène “marqueur” Vecteur d’expression levure Gène de la protéine de surface Virus Transcription Traduction Protéine de surface Gène de la protéine Cellule de levure Transfection Multiplication des levures

Détails de la construction génétique Gène de la protéine de surface Promoteur de gène de levure Terminateur

Détails de la construction génétique Gène de la protéine de surface Promoteur viral Terminateur Séquence codant la protéine de surface

Détails de la construction génétique Cas du gène S du virus de l’hépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 Promoteur viral Terminateur Grande protéine S (226 + 55 + 109 acides aminés) Protéine S moyenne (226 + 55 acides aminés) Petite protéine S (226 acides aminés)

Détails de la construction génétique Gène de levure Promoteur Terminateur ARG3 Séquence codant l’enzyme ornithine carbamoyltransférase Petite protéine S (226 acides aminés) Protéine S moyenne (226 + 55 acides aminés) Cas du gène S du virus de l’hépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 Promoteur viral Terminateur Grande protéine S (226 + 55 + 109 acides aminés)

Détails de la construction génétique Promoteur Terminateur Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de l’hépatite B Gène S Gène de levure ARG3 Séquence codant l’enzyme ornithine carbamoyltransférase

Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de l’hépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 Promoteur Terminateur Gène de levure ARG3 Séquence codant l’enzyme ornithine carbamoyltransférase

Détails de la construction génétique gène S du virus de l’hépatite B Gène de levure ARG3 Promoteur Terminateur Séquence codant l’enzyme ornithine carbamoyltransférase Cas du gène S du virus de l’hépatite B Pré-S1 Pré-S2 Gène S Promoteur Terminateur Petite protéine S (226 acides aminés)

Détails de la construction génétique Promoteur Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de l’hépatite B Gène S ré-S2 Terminateur Gène de levure ARG3 Séquence codant l’enzyme ornithine carbamoyltransférase Promoteur

Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de l’hépatite B Gène S Promoteur Gène de levure ARG3 Séquence codant l’enzyme ornithine carbamoyltransférase ré-S2 Terminateur Terminateur 18 aa Protéine S recombinante (226 + 42 + 18 acides aminés) 42 aa

Paramètres non maîtrisés dans la production de protéines par transgenèse  Repliement des protéines (structure tridimentionnelle) Modifications chimiques secondaires (modifications post-traductionnelles : glycosylations, phosphorylations, …)

Taille des protéines de surface du virus de l’hépatite B A partirdu génome viral Vaccin GenHevacB 25 kDa 33 kDa 39 kDa Non glycosylée Glycosylée 29 kDa 36 kDa 41 kDa Petite (S) Moyenne (pré-S2 + S) Grande (préS1 + préS2 + S) 22 kDa 26 kDa 34 kDa