Les Bacilles Gram Positifs Le Diagnostique Les Bacilles Gram Positifs

Classification Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Non-sporulants Aérobie Listeria

Caractéristiques des Bacilles Sporulants Tous sont de gros bacilles Gram positifs Font des endospores Principalement retrouvés dans le sol, les eaux et la poussière Exigences nutrionelles très diverses Utilisent des sources de carbones simples et complexes Leurs spores leurs permettent de résister à des conditions extrêmes

Morphologies des Endospores Position: Terminale (a, d, e) Subterminale (b) Centrale (c, f). Forme: Circulaire (b, d) Ellipsoïde (a, c, e, f) Diamètre: Non déformant (a, b, c) Déformant (d, e, f).

Les Bacilles d’Importance Médicale Bacillus Majoritairement inofensifs Quelques espèces opportunistes Bacillus cereus & Bacillus subtilis Empoisonement alimentaire Une espèce pathogène Bacillus anthracis Anthrax Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Non-sporulants Aérobie Listeria

Les Bacilles d’Importance Médicale Canned food that has not been sterilized properly; paralytic illness prolonged contraction of skeletal muscle fibers, neurotoxin produced by the bacteria Clostridium Plusieurs espèces pathogènes Clostridium perfringens Gangrène gazeuse Clostridium tetani Tétanos Clostridium botulinum Botulisme Clostridium difficile Diarrhée

Identification: Tests Métaboliques Bouillon de phénol rouge Métabolisme de sources de carbones simples Source de carbone: Peptone (protéine  acides aminés) Sucre désiré ajouté Indicateur de pH Phénol rouge Jaune pH acide Orange pH neutre Rouge pH alcalin

Bouillons de Phénols Rouges Utilisation de Carbone: Sucre Réaction acide (Jaune) ou neutre (Original) Protéine Réaction alcaline (Rouge)

Fermentation du Glucose Fermentation avec accumulation d’acide: Glucose  pyruvate  acide lactique et/ou acétique + CO2 Fermentation avec accumulation de produits neutres Glucose  pyruvate  acétoine  2 butanediol + CO2

Test de Méthyl Rouge Test pour l’accumulation d’acide Sources de carbones: Glucose et protéines Indicateur -méthyl rouge; Ajouté après MR +: rouge (pH < 5.2) MR - : jaune (pH > 5.2) Neutre Acide

Test de Voges-Proskauer Réactifs VP: butanediol + -naphthol + KOH + O2  acétoine VP + = rouge VP - = jaune - + Résultats habituelle de MR/VP: MR+/VP-; MR-/VP+ MR-/VP- Acide produite Pas d`acétoine Neutre Acétoine

Utilisation d’Urée Carbone: Enzyme Indicateur de pH Urée + protéin sur la plaque Enzyme Uréase Indicateur de pH Phénol rouge (rose) Négatif Positif C O + 2 H2O  CO2 + H2O + 2 NH3  (NH4)2CO3 H2N urée ammonium carbonate (alcalin) Acides aminés

Utilisation du Carbone Complexe Trop gros pour le transport à l’intérieur Nécessite enzymes exocellulaires pour la dégradation externe en petites unités Polysaccharides Amidon (amylase) Lipides (lipase) Tributyrine Protéines (protéase) Caséine (caséinase)

Amylase Avant l’ajout d’iode Après l’ajout d’iode

Caséinase

Lipase – Spirit Blue

La Respiration Aérobie La Chaîne de Transport d’e- 3 H2O H+ 2 H+ 3 H+ + 3 OH- H2O 3 H+ + 1/2 O2 2 e- Fp Fe-S Q Cyt b Cyt o NADH + H+ FADH2 intérieur extérieur Respiration aérobie: 1) Utilise l'oxygène comme capteur final d'e- 2) Cytochrome oxydase est impliqué

Test d’Oxydase Les bactéries peuvent effectuer la respiration aérobie? Doit avoir CTE et cytochrome oxydase. Tester pour la présence de cytochrome oxydase. phenylenediamine Cytochrome oxydase catalyse la réduction du capteur final d’e-, l’oxygène Un donneur artificiel d’e-, la phenylenediamine, est utilisé pour réduire le cytochrome oxydase Si l’enzyme est présente, le réactif incolore (état réduit) deviendra bleu (état oxydé) Bactéria devient bleu. Le média toujour devient bleu.

Catalase décompose le peroxyde en H2O + O2. Vivre dans la présence d'oxygène génére beaucoup de radicaux libres (p. ex. peroxydes). Catalase décompose le peroxyde en H2O + O2. Catalase Bactéries fait-il cela? Détecter les bulles. Ajout de 3% H2O2 à la croissance bactérienne 2H2O2 2H2O + O2  catalase Produit de la respiration dommageable pour l’ADN Métabolisme d’aérobie requière la catalase Bulles (O2) On ajoute ça.

Respiration Anaérobie 2 H+ 3 H+ + 3 OH - 3 H2O NO2- + H2O (N = +3) nitrite NO3- + 2 H+ (N = +5) nitrate 2 e- Fp Fe-S Q Cyt b NADH + H+ FADH2 Nitrate réductase Intérieur Extérieur Capteur final d’e- Respiration anaérobie : 1) Utilise quelque chose (nitrate) autres que l'oxygène comme capteur final d'e- 2) Nitrate réductase est impliquée

Nitrate Réductase Étape 1: Test pour nitrite NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O + NO2-  NO, N2O, NH2OH, NH3, N2 nitrate nitrite Étape 1: Test pour nitrite NO2- + acide sulfanilique et alpha naphthylamine  HNO2 Nitrate n’est pas réduit Absence de Nitrite Jaune Nitrate est réduit Production de Nitrite Rouge Nitrate est réduit au nitrite Nitrite est réduit Absence de Nitrite

Nitrate Réductase (suite) NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O + NO2-  NO, N2O, NH2OH, NH3, N2 nitrate nitrite Étape 2: Test pour présence du nitrate NO3- + Zn (s)  NO2- Nitrate est présent Réduction au Nitrite Rouge Nitrate est absent Nitrite a été réduit Jaune

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Classification C’est quoi le test de catalase? Cocci Gram Positifs Streptococcaceae Catalase - Aérobie & anaérobie facultatif Streptococcus Micrococcaceae Catalase + Aérobie Micrococcus Staphylococcus C’est quoi le test de catalase?

Caractéristiques des Cocci Gram Positifs Tous sont non sporulants Principalement retrouvés parmi la flore naturelle des hommes et des animaux Exigences nutrionelles fastidieuses Utilisent des sources de carbones simples

Aggrégation Cellulaire des Cocci Gram Positifs Micrococcus & Streptococcus Streptococcus Micrococcus Staphylococcus

Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale Micrococcaceae Staphylococcus aureus Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et choc toxique Staphylococcus epidermidis Cause des infections opportunistes Staphylococcus saprophyticus Cause majeure de cystites chez les femmes

Les Cocci Gram Positifs d’Importance Médicale Streptococcaceae Streptococcus pyogenes Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse de chair Streptococcus agalactiae Infections génitales Streptococcus mutans Endocardites Streptococcus pneumonia Otite, meningite et pneumonie Enterococcus spp. Infections opportunistes

Identification: Tests Métaboliques Microccocus Vs Staphylococcus Test d’oxydase (cyto oxidase) Micrococci sont + Staphylococci sont – Bacitracine (antibiotique) Micrococci sont sensibles Staphylococci sont résistants Streptococcus pyogenes (Pharyngite /strept throat)  Test de sensibilité à la Bacitracin vs Streptococcus pneumoniae (pneumonie)  Test de sensibilité à l`optochin

Identification: Tests Métaboliques Différentitation des espèces de Staphylococcus Test de coagulase (agglomération de cocci) Les staphylococci coagulase positifs S. aureus Staphylococci coagulase négatifs Tous les autres Staphylococci Fermentation du mannitol (géloses de mannitol + sels) S. aureus et quelques S. saprophyticus sont positifs S. epidermidis est negatif S. epidermidis S. aureus

Identification: Tests Métaboliques Différentiation des espèces de Streptoccocus Regroupement sérologique de Lancefield Fondé sur le type d’hydrate de carbone dans leur paroi 8 groupes (A-H et K-U) Groupe A: β-hémolytique - Streptococcus pyogenes Groupe B: β-hémolytique - S. agalactiae Groupe C: α ou γ hémolytique- S. viridans Groupe D: γ –hémolytique – Enterococcus Pas classifié d’après le regroupement de Lancefield α hémolytique- S. pneumoniae et S. mutans

Hémolyse Sanguine Gélose de sang: Discrimination d’après patrons d’hémolyses Hémolyse alpha - Hémolyse incomplète Hémolyse beta - Hémolyse complète Hémolyse gamma - Aucune hémolyse Enzymes = Hémolysines

Identification: Tests Métaboliques Identification de Streptoccocus pneumoniae Solubilisation par la bile Strep. pneumoniae est positif Autres Strep. sont négatifs Identification d’Enterococcus Test de bile-esculin Enterococcus est positif