12 mars 2006HIV sida HIV… = Human Immunodeficiency virus et le sida

12 mars 2006HIV sida La pandémie du sida

12 mars 2006HIV sida La pandémie du sida

12 mars 2006HIV sida Le virus

12 mars 2006HIV sida Les découvreurs

12 mars 2006HIV sida Le virus au MET

12 mars 2006HIV sida Analyse biochimique du virus Marqueurs de masse molaire Après marquage de la glucosamine Après marquage des acides aminés électrophorèse sur gel de polyacrylamide à 12 %

12 mars 2006HIV sida Représentation du virus gp 120 gp 41 p 24 2 RNA monocaténaires identiques Transcriptase réverse enveloppe nucléocapside

12 mars 2006HIV sida Les protéines de surface

12 mars 2006HIV sida Le génome du HIV Transcriptase réverse Protéase

12 mars 2006HIV sida V.1.1. Arbre phylogénétique Cette figure illustre le fait que les virus VIH-1 et VIH-2 ont des origines mèlées à celles des SIV simiens et forment plusieurs groupes. Cela indique quils sont issus de plusieurs transmissions du singe à lhomme. Le groupe le plus important du VIH-1, responsable de la pandémie actuelle, est le groupe M. Celui-ci sest divisé en de multiples types au cours de lévolution chez lhomme. Le type dominant aux EU et en Europe est le type B, bien quen Belgique de nombreux types soient présents. Les différents types ont donné naissance à des formes recombinantes appelées CRF (circulating recombinant forms). Le VIH-2 est issu de deux transmissions indépendantes à partir dun foyer simien, donnant les groupes A (le plus commun) et B.

12 mars 2006HIV sida Cycle de multiplication

12 mars 2006HIV sida Le cycle en movie

12 mars 2006HIV sida La replication du HIV RNA DNA RNA

12 mars 2006HIV sida La maladie

12 mars 2006HIV sida Transmission, symptômes, formes de la maladie La maladie est clairement liée à une IMMUNODÉPRESSION SÉVÈRE qui se traduit par des infections à : champignons ( parasites ( bactéries ( virus Et des cancers (sarcome de Kaposi)

12 mars 2006HIV sida Transmission, symptômes, formes de la maladie Transmission : sexuelle mère enfant parentérale drogue produits sanguins

12 mars 2006HIV sida Paramètres

12 mars 2006HIV sida Le sida : autres évolutions possibles Évolution classique Évolution explosive Évolution lentissime

12 mars 2006HIV sida Diagnostic Le diagnostic du sida concerne deux virus HIV1 et 2. Les techniques sont : la recherche des anticorps la recherche des antigènes : protéines virales comme p24 RNA viral

12 mars 2006HIV sida Isolement du virus

12 mars 2006HIV sida Recherche danticorps savonnette

12 mars 2006HIV sida immunoenzymologie

12 mars 2006HIV sida immunochromatographie

12 mars 2006HIV sida Western-blot

12 mars 2006HIV sida Recherche dantigène Ex : p24/Vidas, recherche combinée

12 mars 2006HIV sida Charge virale Détecter le virus ne suffit pas pour adapter le traitement; La biologie moléculaire permet daller plus loin avec la mesure de la charge virale (nombre de copies de lacide nucléique viral par mL de plasma)

12 mars 2006HIV sida Échantillon + 3 contrôles internes RNA Extraction des RNA RNA et DNAc Addition de RNAse DNAc du HIV Addition de T7 RNA polymérase Environ 100 copies RNA du DNAc Nouveaux cycles à température constante Environ 10 9 copies RNA du DNAc Rétrotranscription avec des amorces spécifiques du virus (gag pol) Addition de sondes spécifiques (pour les contrôles et le RNA viral) Mesures de luminescence pour les contrôles et le virus Les trois contrôles internes sont des RNA qui diffèrent de l'ARN du HIV par 20 nucléotides. Limite de détection de : 400 copies en partant de 1 mL de sérum, et 4000 en partant de 100 µL. Technique NASBA ( Nucleic acid sequence based amplification ) exemple pour HIV avec QR System(Organon Teknika)

12 mars 2006HIV sida Technique PCR quantitative ( dite en temps réel ) exemple pour HIV avec Amplicor HIV-1 monitor (Roche Diagnostic Systems) Échantillon + contrôle interne RNA Extraction des RNA RNA et DNAc Addition de RNAse ???? DNAc du HIV Cycles de PCR (avec la même polym é rase Nombreuses copies du DNAc Dépôt, dans des microplaques, de l é chantillon ou de ses dilutions. Les puits comportent des sondes sp é cifiques biotinyl é es soit du virus HIV soit du contrôle interne. Rétrotranscription avec des amorces biotinylées spécifiques du virus (gag) Détection des amplicons par addition de PAL liée à lavidine Le contrôle interne est de concentration connue en RNA. Limite de détection de : 400 copies en partant de 100 µL.

12 mars 2006HIV sida Technique capture- amplification du signal exemple pour Quantiplex HIV RNA (Chiron) Échantillon RNA Extraction des RNA RNA viral fixé dans les puits Addition de sondes de DNA branchées marquées à la PAL Sondes DNA-Pal fixées sur le RNA viral retenu dans le puits Addition de subtrats Dépôt dans les puits dune microplaque contenant des sondes fixées (gène pol) Mesure par chimiluminescence (amplification obtenue de 1800 fois par RNA viral) Conclusion avec la courbe détalonnage réalisée dans les mêmes conditions sur des RNA de concentration connue Limite de détection de : copies en partant de 1 mL.

12 mars 2006HIV sida Prévention et traitement

12 mars 2006HIV sida Elle est fondée sur : la détection des séropositifs pour limiter la transmission le traitement des séropositifs pour réduire le « stock » de virus il ny a malheureusement pas de vaccin possible actuellement 5.1. Prévention Le péril sexuel

12 mars 2006HIV sida

12 mars 2006HIV sida Traitement AZT inhibiteurs de inhibiteurs de Les multithérapies

12 mars 2006HIV sida Autres rétrovirus Les HTLV1 et HTLV2 (Human T Cell Leukemia Virus) identifiés chez l'homme comme responsables de leucémies des lymphocytes T appartiennent à cette famille. Ce sont des oncovirus à RNA. (voir Virus et cancers) Pr GALLO

12 mars 2006HIV sida Fin