Prélèvements & Examen direct en Mycologie Dr w.Beldjoudi

A/ Prélèvements en mycologique

L’examen mycologique doit répondre à deux questions – Les lésions cutanées sont elles ou non l’expression d’une mycose ? – Si mycose : quel est le cham- pignon responsable ? quel dermatophyte ? quelle levure ? quelle moisissure ?

Le prélèvement doit être bien orienté pour ramener du matériel effectivement parasité par un mycète vivant. Il est donc important de tenir compte du mode de propagation des champignons pour prélever correctement au niveau de la lésion. Un bon Pvt = Un bon Dgc

La réalisation d’un bon prélèvement nécessite 1/ Conditions du prélèvement 2/ Matériel 3/ Mode de prélèvement

1/ Conditions du prélèvement Il doit être fait si possible avant ou à distance de tout traitement antifongique Le jour de l’examen le patient doit faire sa toilette sans savon Un interrogatoire préalable précisera zone tropicale, contact avec des animaux, pratique de sports..., Tous ces renseignements peuvent être une aide précieuse dans l’interprétation des résultats et sont consignés sur une fiche de renseignement.

2/Matériel Le matériel nécessaire aux prélèvements est simple et doit être stérile : * grattoir de Vidal (lésions squameuses, ongles) * écouvillon pour (lésions suintantes) * pince à épiler (poils) * ruban adhésif (scotch test) * lampe de Wood   * boîtes de Pétri stériles * lames en verre…

Grattoir de Vidal Curette de Brocq Ecouvillon

Lampe de Wood Pince

3/ Mode de prélèvement * Les croutes et les squames sont prélevés par grattage avec un grattoir ou une curette * Les cheveux cassés sont arrachés à la pince à épiler * Les lésions muqueuses sont prélevées avec un écouvillon stérile * Les ongles sont prélevés par grattage avec un grattoir * Chaque lésion doit être prélevée séparément (lésions à aspect ou localisation différente)

Prélèvement cutané

Couronne périphérique active : Pvt Centre guéri Herpes circiné

Pvt à la périphérie Pvt au centre Intertrigo candidosique Intertrigo dermatophytique

Scotch test cutané malasseziose  

Prélèvement ongle

Dermatophytes Atteinte latérale et distale. Pvt fait à la frontière zone saine- zone malade. Pvt

LEVURES débutent le plus souvent par une lésion de la sertissure périunguéale : périonyxis avec infection progressive de la base de l'ongle. Pvt du périonyxis et de la partie proximale de l’ongle. Pvt

Prélèvement des poils et cheveux

Cheveux cassés : arrachés à la pince Squames : raclage à la curette

Lésion inflammatoire : pus à l’écouvillon

Autres Prélèvements

Pus/Muqueuses Selles Crachats LCR – Urines - LBA Sang Matériel Biologique Mode de Prélèvement Pus/Muqueuses Ecouvillonnage à l'aide d'écouvillon stérile Selles Recueillir en flacons stériles Crachats Recueillir en flacons stériles après désinfection de la bouche LCR – Urines - LBA Recueillir en flacons stériles et centrifuger Sang Hémocultures

B/Examen direct

*À lui seul, il assure souvent le diagnostic d'une mycose. *L'examen direct est obligatoire et indispensable car il permet de visualiser le champignon dans une lésion que la culture permettra de confirmer. *À lui seul, il assure souvent le diagnostic d'une mycose. *L'examen direct ne doit être préparé qu'une fois l'ensemencement fait car le liquide de montage peut avoir un effet létal sur la culture du champignon. 

Méthodologie *Ongles et Squames : Les prélèvements superficiels *Ongles et Squames :  Eclaircissement se fait avec de la potasse à 10 ou 30 % *Poils : Eclaircissement se fait dans du lactophénol, du bleu coton….

***KOH à 10 % pour les squames, KOH à 30 % pour les ongles, avec un léger chauffage au bec Bunsen de la préparation associée ou non à un colorant (noir chlorazole) permettant de ramollir la kératine. Le temps de macération, fonction de l’épaisseur des éléments examinés, ne doit pas dépasser 30 minutes, sous peine de lyse totale de la kératine . *** L’emploi de bleu coton, de lactophénol permet d’éclaircir et de conserver les préparations.

Les Liquides pathologiques *Monter directement une goutte de produit pathologique ou du culot de centrifugation entre lame et lamelle. * LCR: examiner le culot de centrifugation dans une goutte d'encre de Chine diluée pour la recherche des levures capsulées de Cryptococcus néoformans.

Résultat

Couronne périphérique active : Pvt Herpes circiné filaments mycéliens (dermatophytes)

Pvt Intertrigo dermatophytique

Pvt Intertrigo candidosique Levures +/- bourgeonnantes, éventuellement associées à du pseudomycélium voire du mycélium vrai

Scotch test cutané : petites spores rondes regroupées en grappe de raisins malasseziose

Pvt Onyxis dermatophytique

Pvt des levures +/- bourgeonnantes, éventuellement associées à du pseudomycélium voire du mycélium vrai Onyxis et périonyxis candidosique

(englués dans les squames) Fluorescence + CP cassés très court (englués dans les squames) CP cassés à qlq mm de l’émergence Fluorescence + Godets faviques traversés par des cheveux fragilisés CP expulsés

Présence d’arthrospores intrapilaires Présence de filaments mycéliens intrapilaires + gaine dense de petites spores

Levures +/- bourgeonnantes, éventuellement associées à du pseudomycélium voire du mycélium vrai

LCR à l’encre de Chine : levure encapsulée de Cryptococcus neoformans

Infections fongiques invasives