X. Sastre-Garau Département de Pathologie Institut Curie

Présentation au sujet: "X. Sastre-Garau Département de Pathologie Institut Curie"— Transcription de la présentation:

1 X. Sastre-Garau Département de Pathologie Institut Curie
Les néoplasies du col utérin Données biologiques récentes et perspectives pour l’amélioration du suivi clinique et de la prise en charge médicale X. Sastre-Garau Département de Pathologie Institut Curie Paris

2

3

4 Examen colposcopique Sans préparation Acide acétique Test à l’iode

5

6 Néoplasies intra-épithéliales
Bas grade Haut grade

7 Les papillomavirus humains (HPV)
Capside icosaédrique (55 nm) ADN circulaire double brin (7900 pb) 200 génotypes Infectent la peau ou les muqueuses Spécificité du pouvoir pathogène Potentiel oncogène de certains génotypes (HPV 5, 16, 18…)

8 E6 E7 LRR L1 E1 HPV16 E4 E2 L2 E5 Transcription
(promoteurs, activateurs) Origine de réplication Levée du contrôle du cycle cellulaire Instabilité génétique E6 E7 LRR 7906/1 Protéine principale L1 1000 7000 de capside E1 Réplication 6000 HPV16 2000 5000 3000 4000 E4 Régulation de la transcription Réplication Protéine mineure E2 L2 de capside Interaction avec E5 le cytosquelette Stimulation de la croissance

9 infection persistante néoplasie intra- épithéliale infection col normal infection de l’épithélium cervical carcinome infiltrant clearance régression N Histoire naturelle des infection par HPV et des néoplasies du col utérin Runowicz NEJM HPV précancer cancer 15 20 25 30 35 40 45 âge

10 Facteurs biologiques associés à la régression des dysplasies de bas grade
Genotype de virus associé aux lésions - HPV16/18 : 22% - HPV autres types: 56% Facteurs génétiques - HLA-DRB1*13 70% - HLA-DRB1* non 13 40% Facteurs immunologiques Facteurs environnementaux

11 Carcinomes infiltrants du col utérin: aspects viro-cliniques de Cremoux et al., Int j Cancer, 124, , 2009 Série consécutive de 515 cas Janvier 1985-décembre 2005 Suivi médian: 95 mois Comparaison des données cliniques et virologiques

12 Carcinomes infiltrants: données virologiques
Statut viral Nb de cas % HPV Positif 494 95.9 HPV Negatif 21 4.1 HPV 16 286 55.53 HPV 18 73 14.17 HPV 45 22 4.27 HPV 33 15 2.91 HPV 31 11 2.14 HPV 52 HPV 11, 35, 39, 53, 58, 59, 73 HPV X 54 10.49

13 Données virologiques et histologiques
Histologie Nb de cas Statut viral Type d’HPV HPV+ HPV- HPV16 HPV18 autres SCC 451 97.1% 2.9% 59.4% 10.4% 27.2% ADK 64 87.5% 12.5% 28.1% 40.6% 18.7%

14 Types d’HPV dans les cancers infiltrants Corrélation avec l’âge
autres types* HPV X HPV négatifs nombre (%) 73 14,2% 286 55,5% 22 4,3% 59 11,4% 54 10,5% 21 4,1% Âge moyen 45,8 48,3 48,6 53,6 52,5 62,5 * HPV11, 31, 33, 39, 52, 53, 58, 59, 73

15 Pronostic des cancers du col utérin en fonction du type d’HPV

16 Facteurs biologiques liés à la progression des carcinomes infiltrants
Transcriptome des cancers infiltrants Rôle de l’intégration dans la progression tumorale

17 Transcriptome des cancers infiltrants et évolution
Rosty et al. Oncogene 2005 Normal Favorable Défavorable Lignées

18 Corrélation entre HPV18 E7 et gènes de prolifération
Mean correlation with E7 RNA: 0.670 Mean correlation with DNA viral load: 0.552 CycD CDK4 E7 RB E2F Cell cycle

19 Intégration de séquences d’ADN d’HPV dans le génome de la cellule hôte
Étape de la transformation maligne 5% des lésions de bas grade 16% des lésions de haut grade 88% des cancers infiltrants Modification de l’expression de gènes viraux Modification du génome cellulaire ? LCR E6 E7 E1 E2 L1 L2 E2 interrompue ADN cellulaire

20 Altérations structurales du génome cellulaire au site d’intégration
Altérations structurales du génome cellulaire au site d’intégration ? Peter et al., J Pathol, 2010 Série de 42 cas de carcinomes infiltrants associés à HPV16 ou HPV18 Approche combinée Analyse de la structure génomique par hybridation génomique comparative Détermination des sites d’intégration des génomes d’HPV

21 Structure du génome au site d’insertion
HPV18 V centromer Chromosome 2 2q34 34/42 9p23 HPV16 V Chromosome 9 centromer A 9/42 2q32.1 HPV16 V Chromosome 2 centromer L/G 8/42

22 Chr 4 Chr 10 Chr 14 Chr 12 Chr 11 Chr 16 Chr X Chr 21 Chr 17 Chr 20
HPV insertion site with genomic alteration without genomic alteration Genomic alteration Amplification Gain Loss G / LOH Relative position of HPV sequences with large size genomic change Chr 4 p16.3 q13.3 q34.3 Chr 10 Chr 14 Chr 12 Chr 11 Chr 16 q24.1 q21.31 q24.22 q22.3 p12.1 q11.21 p11.3 p22.31 Chr X Chr 21 Chr 17 Chr 20 Chr 22 Chr 3 q27.1 Chr 5 p13.2 p14.2 q31.1 q35.1 Chr 9 p23 Chr 1 p22.2 q32.2 p33 Chr 7 p21.1 Chr 13 q22.1 Chr 15 q21.3 q21.1 Chr 19 p13.3 Chr 6 p22.3 q23.3 Chr 18 p11.32 Chr 2 q22.22 q32.3 pter p24.3 q13 q32.1 q34 p23.3 Chr 8 q24.12 q24.21 q24.23

23 Caractérisation des séquences amplifiées en 8q24
Caractérisation des séquences amplifiées en 8q24.1 dans les cellules IC1 HPV MYC Herrick et al.,Cancer Research, 2005 Peter et al., oncogene, 2006

24 Altérations génomiques structurales au site d’insertion des HPV
Observée dans 38% des cas Le plus souvent amplification ou perte d’aval Amplification très vraisemblablement secondaire à l’insertion et liée à l’activation de l’origine de réplication présente dans les séquences virales intégrées Activation d’un proto-oncogène secondaire à l’intégration; MYC (environ 10% des cas)

25 Integration de l’ADN viral au génome cellulaire
Mutation insertionnelle Spécifique pour chaque cas Site unique dans > 80% Réarrangement clonal Stable au cours du temps Marqueur moléculaire très spécifique de l’ADN tumoral LCR E6 E7 E1 E2 L1 L2 cell DNA Cell DNA

26 Acides nucléiques tumoraux circulants
Acides nucléiques circulants (Mandel P & Métais P 1948) Acides nucléiques tumoraux circulants (AN-tc) (Schwarzenbach et al., 2011) Issus de nécrose et/ou apoptose éliminés par le foie et le rein proportionnels à la masse tumorale (Diehl et al., 2005) biomarqueurs de la dynamique tumorale Détection basée sur l’utilisation d’un marqueur moléculaire spécifique identifié dans la tumeur primaire

27 ADN tumoral circulant et cancers du col utérin: étude pilote
Neuf cas de cancers du col utérin associés à HPV16 Site d’intégration déterminé (DIPS-PCR) Spécimen de sérum disponibles au diagnostic (9 cas) au cours du suivi (2 de ces neufs cas) ADN tumoral circulant (jonction virus/génome cellulaire) ADN d’HPV circulant LCR E6 E7 E1 E2 L1 L2 cell DNA Cell DNA

28 ADN tumoral/viral circulant chez des patientes avec cancer du col
cas site d’insertion charge virale stade FIGO taille tumorale ADN tumoral/viral circulant (pg/200µl) ADN tumoral jonction HPV/cellule ADN viral E7-HPV16 N°1 Xq21 17 Ib 10 N°2 3q26.32 1.2 15 N°3 14q32.2 55.3 IIa 35 42 18 N°4 15q23 5 IIb 2 0.1 N°5 3q21.3 88 47 7 6 N°6 4q13.1 57.7 56 81 N°7 1p22.1 1.5 IIIb 55 0.03 14 N°8 2q22.1 0.4 74 16 4 N°9 17q21.31 93.9 IVa 46 21 119

29 Dynamique de l’ADN tumoral circulant dans les cancers du col
ADN-tc 7 1.4 0.1 45 ADN HPV-c 6 0.5 1.2 60 (pg/200µl) taille tumorale 47mm (col) 8 mm (foie) 24 mm (GGL abdomen) 4 8 30 34 temps (mois) Cas N°5 traitement >103 ADN-c 21 0.2 10 0.1 ADN HPV-c 119 7 5 83 >105 (pg/200µl) IRM stable IRM stable carcinose massive taille tumorale 46 mm (cervix) 4 8 12 16 Cas N°9 temps (mois) traitement

30 Vaccination prophylactique et immunothérapie
HPV (Virions) Lymphocytes B Pseudo particules virales Prévention de l’infection/dissémination vaccination thérapeutique Lymphocytes T (CD4+, CD8+) Peptides courts ou longs spécifiques de E6 ou E7 Cellule infectée (dysplasie, néoplasie) Régression d’une lésion tissulaire

31 Vaccination against HPV-16 Oncoproteins for Vulvar Intraepithelial Neoplasia Kenter G. et al., N Engl J Med, 2009 Clinical responses in women with HPV-16-positive, grade 3 vulvar intraepithelial neoplasia can be achieved by vaccination with a synthetic long-peptide vaccine against the HPV-16 oncoproteins E6 and E7. Complete response appear to be correlated with the induction of HPV-16-specific immunity

32 Institut Curie: Essai de vaccination par peptides longs spécifiques de HPV16 dans les cancers du col utérin en récidive non curable Récidive en territoire irradié non accessible au traitement chirurgical Vaccination par administration d’un mélange de peptides longs recouvrant les séquences de E6 et E7 de HPV 16 En première ligne thérapeutique de la récidive Avant la chimiothérapie palliative

33 La vaccination par peptides longs induit une forte prolifération de cellules T spécifiques des épitopes E6 and E7 Avant vaccination Après vaccination Thymidine incorporation x x Pool 1 Pool 2 Pool 3 Pool 4 Pool 1 Pool 2 Pool 3 Pool 4 neg neg MRM neg neg MRM E6 E6 E7 E7 FLU E6 E6 E7 E7 FLU

34 Institut Curie: Essai de vaccination par peptides longs spécifiques de HPV16 dans les cancers du col utérin en récidive non curable Trois patientes traitées Effet biologique: induction d’une immunité spécifique anti-HPV16 E6/E7 Pas d’effet clinique observé Limitation: masse tumorale importante, en territoire irradié, après chimiothérapie Perspective: vaccination précoce, avant la rechute clinique, sur un critère biologique permettant le suivi: ADN tumoral circulant

35 femmes (16-23 ans) - Vaccin VLP L1 anti-HPV 16 - 3 doses: 0, 2 mois et 6 mois - Séroconversion: 99.7% - Protection: 100% pour les lésions liées à HPV 16 0% pour les lésions liées à d’autres génotypes

36 Objectifs principaux de la vaccination préventive anti-HPV
- Immunologique: Induction d’une réponse anticorps (humorale) contre les protéines de capside du virus (L1) Induction d’une mémoire immunologique - Virologique: Protection contre l’infection persistante par les HPV 16/18 - Clinique: Prévention des néoplasies liées aux HPV16/18 Prévention de la dissémination de ces virus - Santé publique: Diminution de l’incidence des néoplasies cervicales Diminution de l’incidence du cancer du col utérin

37 Vaccination anti-HPV16/18 Recommandations et aspects pratiques
Pré-adolescentes et adolescentes (14-23 ans) Trois injections à un mois d’intervalle Coût du vaccin: environ 400 € Prise en charge à 65% par le système de santé Suivi gynécologique et dépistage par frottis maintenu

38 Vaccination prophylactique et Santé Publique
- Coûts - vaccin - consultations médicales supplémentaires - programmes d’information et d’éducation - dépistage à maintenir - Bénéfices attendus - baisse de morbidité et de mortalité - diminution des gestes diagnostiques et thérapeutiques (colposcopie, conisations…) - Rapport coût/efficacité par rapport au dépistage ? Vaccination : 405 € = 27 frottis Dépistage : 15 frottis au cours de la vie ( ans) Diminution de morbidité dans la population vaccinée

39 Vaccination prophylactique: questions ouvertes
Environ 40% des femmes sans suivi gynécologique en France Taux de couverture vaccinale moindre dans les populations à risque Diminution vraisemblable de l’incidence des dysplasies Effet sur l’incidence des cancers infiltrants à démontrer Problème de l’évaluation de l’impact de la vaccination: clinique, virologique, économique…

40 Particularité des pays émergents
Dépistage - Réseau de dépistage souvent insuffisant ou inexistant - Formation de cytopathologistes et cytotechniciens - Effet quasi immédiat du dépistage (lésions en place) Vaccination - Problèmes logistiques (distribution, observance) - Impact du programme de vaccination visible à ans - Intérêt de vaccins de deuxième génération: moindre coûts, cryoconservation facultative, dose unique, protection simultanée contre d’autres génotypes

41 Détection des HPV et dépistage primaire des néoplasies cervicales
Différence entre infection et néoplasie Importance de la tranche d’âge considérée Risques de surdiagnostic et de surtraitement Cancers HPV négatifs Déploiement plus facile d’un dépistage basé sur l’analyse virologique dans les pays émergents

42 HPV et autres localisations tumorales
Tumeurs gynécologiques: néoplasies vulvaires chez la femme jeune néoplasies de la verge Néoplasies du canal anal Néoplasies de la sphère ORL Incidence de l’association virale variable selon la localisation tumorale Facteur pronostique Cible thérapeutique

43 Remerciements Kevin Bleakley Jérôme Couturier Patricial de Cremoux
Marie Hélène Donnadieu Philippe Hupé Alain Nicolas Martine Peter Camille Richardot François Radvanyi Anna Almeida Séverine Alran Isabelle Cartier Paul Cottu Virginie Fourchotte Eléonore Gravier Corine Plancher Anne de la Rochefordière Sergio Roman-Roman