Antibiogramme d’Entérobactéries et examens complémentaires Dr OUAR .M.N

INTRODUCTION Les entérobactéries jouent un rôle important en pathologie humaine car: Elles appartiennent à la flore normale du TD et de certaines muqueuses de l’Homme. on les retrouve aussi dans l’eau et les surfaces.

INTRODUCTION Certains genres: Sont potentiellement pathogènes (salmonella, Shigelle ,Escherichia , Klebsiella, Proteus) D’autres sont saprophytes (occasionnellement pathogènes surtout en milieu hospitalier) : Enterobacter , Serratia.

INTRODUCTION L’antibiogramme est systématique devant toutes entérobactéries car il existe: Des résistances naturelles (intérêt diagnostique) Des résistances acquises par synthèses d’enzymes, de mutations (intérêt thérapeutique)

Caractéristiques de la famille des entérobactéries Bacille GRAM – Taille :2-4 µ × 0,4 -0,6 µ Non exigeant Aéro anaérobie facultatif Fermente le glucose Oxydase – (sauf plesiomonas) Réduit les nitrates en nitrites catalase + Mobilité (ciliature péritriche ) ou immobile

Classification des entérobactéries selon Bergey’s 2002 Famille entérobactérie: 41 genres Nous citerons les principaux germes pathogènes pour l’homme: Escherichia, Proteus, Klebsiella ,Enterobacter, Serratia, Citrobacter ,Salmonella, Shigella, Providencia, Morganella, Yersinia

Principaux germes pathogènes et circonstances de leurs isolements ECBU ECB du Pus Hémoculture LCR coproculture E.coli ++++ ++ + (GEI) Klebsiella .sp - Proteus.sp + Enterobacter.sp ++ (H) ++ (H) Serratia .sp Salmonella.sp Shigella.sp rare Rare

Escherichia coli GN:Colonies lisses à bords réguliers de 2-3 mm de diamètre, BCP: colonies jaunes ( lactose positive)

Klebsiella pneumoniae GN:colonies muqueuses de 3-4 mm de diamètre avec une tendance à la confluence. BCP:colonies jaunes (lactose positive)

Proteus mirabilis GN:colonies de 2-3 mm de diamètre entourées de plusieurs vagues envahissant la gélose, BCP: colonies pourpre (lactose négative )

Enterobacter cloacae GN: colonies plus ou moins rondes, légèrement irisées ou plates à bord irréguliers de 2-3mm de diamètre, BCP: colonies jaunes ou pourpres (Lactose +/-)

Serratia marcescens GN:colonies rondes ,irisées de 1 -1,5 mm de diamètre. BCP :les colonies sont pourpre (lactose négative)

Antibiogramme Inoculum: : 0.5 Mc Farland Milieu:Mueller Hinton (épaisseur de la gélose 4 mm) Inoculum: : 0.5 Mc Farland Ensemencement par écouvillonnage . .

Listes d’antibiotiques à testées Ampicilline/ Amoxicilline* Amoxicilline-Ac.clavulanique ( a appliqués prés des C3G) Cefalexine * /cefalotine Cefazoline Cefoxitine( intérêt de diagnostique) Cefotaxime ou ceftriaxone (H) Imipéneme (H) (testé pour les bactéries multi résistantes) Amikacine (H) Trimethoprime/sulfamethoxazole Colistine (intérêt de diagnostique) Ofloxacine Furanes Chloramphenicol Fosfomycine * faire dilution1/100 interprétation CA-SFM)

Application des disques : Les disques d’antibiotiques doivent être espacés de 24 mm centre à centre. Incubation :18 h à 35 ° C en atmosphère ordinaire Lecture : mesurer avec précision les diamètres des zones d’inhibition à l’aide d’un pied à coulisse métallique ,à l’extérieur de la boite fermée. - Comparer ces résultats aux valeurs critiques - Contrôle de qualité Escherichia coli ATCC 25922

Tests complémentaires 1- Test de synergie: Dans l’antibiogramme placer un disque AMC à 30 mm ( centre à centre d’un disque de C3 G (CTX ou CRO) Incuber 18 H à 35 °C Lecture : la production de BLSE se traduit par l’apparition d’une image de synergie ou bouchon de champagne entre les disques.

Bouchon de champagne

Test de confirmation du double disque Technique: ensemencer une boite de MH selon la technique d’antibiogramme (0,5 Mc Farland). - Déposer un disque AMC et un disque de C3 G (CTX ou CRO) à une distance de 25 mm -Laisser diffuser les antibiotiques 1 H à température ambiante le couvercle vers le haut. Après 1H , ôter le disque d’AMC et le remplacer d’un disque de CTX ou CRO.

Lecture: Le test de double disque est + quand le diamètre d’inhibition du disque de C3G (appliqué après pré diffusion d’AMC) est supérieur ou égal à 5 mm par rapport au diamètre d’inhibition du disque de C3G.

Test de double disque + BLSE+ Test double disque - BLSE -

Interprétation de l’antibiogramme Phénotypes sauvages

β lactamines 4 groupes : Groupe 1 :Souche sensible :E.coli, Proteus mirabilis ,Shigella, Salmonella. Groupe 2 :Souche résistante à l’ampicilline : Klebsiella, C.amalonaticus … Groupe 3 :Souche résistante à l’ampicilline et céphalosporines de 1ère et 2 ème générations: Enterobacter, Serratia, Citrobacter, Proteus indole + . Groupe 4 : souche résistante à l’ampicilline, céphalosporine de 1 ère génération: Yersinia

Autres antibiotiques Résistance à la colistine et aux furanes : Proteus Résistance à la colistine en cocarde :Serratia

Groupe 1

Phénotype sauvage Genre Phénotypes sauvages E.coli Sensibles aux antibiotiques P.mirabilis Résistance à la colistine et aux furanes Salmonella.sp Shigella.sp

E.Coli sensible ( souche sauvage) Phénotype sauvage

P.mirabilis souche sensible Phénotype sauvage

Phénotypes acquis genre Phénotypes acquis Am Am-Amc-Cz Am-Amc-Cz-Ctx Am-Amc E.coli PBN PHN BLSE TRI P.mirabilis - Salmonella.sp Shigella.sp actuellement: Céphalosporinase HN (Am, Amc,Cz,Fox ,Ctx)

E.Coli PBN : Am résistant

E.Coli PHN Am-Cz-Amc

E.Coli TRI Am-Amc

E.Coli BLSE+ E;coli bse +

E.Coli BLSE + Souche E.coli productrice de BSE

P.mirabilis souche résistante Pénicillinase bas niveau

Groupe 2

Klebsiella genre Phénotype sauvage Phénotype acquis Am-Amc-Cz Am-Amc-Cz-Ctx Kp Am PHN BSE Synergie + Actuellement : il existe des céphalosporinase de Haut niveau (Am-Amc-Cz-Ctx fox) avec un test de synergie -

K pneumoniae Souche sauvage

Souche K.p BSE

Synergie + de K.p BSE

Groupe 3

Am-Cz-Amc-Fox-Ctx (synergie +) Am-Cz-Amc-Fox-Ctx (synergie -) genre sauvage acquis BSE Céphalosporinase HN Enterobacter Am-Cz-Amc-Fox Am-Cz-Amc-Fox-Ctx (synergie +) Am-Cz-Amc-Fox-Ctx (synergie -) serratia Colistine en cocarde

Enterobacter cloacae sauvage

Serratia marcescens sauvage

Cocarde de la Serratia sp

Enterobacter cloacae BSE (synergie +)

Autres résistances Aminosides: il existe de nombreuses enzymes qui dégradent les aminosides (Gm et An ne permettent pas de différencier les phénotypes) Fluoroquinolones: existence de résistance par mutation. Triméthoprime/sulfamethoxazole: résistance par synthèse enzymatique. NB: une souches BLSE présente en plus de la résistance aux β lactamines ,des résistances aux autres familles d’antibiotiques

Conclusion Ne pas oublier de placer le disque AMC prés des C3G afin de mettre en évidence les BLSE (synergie +) Devant toute diminution du diamètre ou absence de diamètre d’inhibition des C3G faire le test de double disque.

Conclusion L’évolution constante des résistances aux antibiotiques des entérobactéries , nous oblige à être plus vigilant lors de la lecture et l’interprétation des antibiogrammes afin augmenter la fiabilité de nos résultats.