Mariana Baz 1, Jesse Papenburg 1, Marie-Ève Hamelin 1, Chantal Rhéaume 1, Julie Carbonneau 1, Manale Ouakki 2, Isabelle Rouleau 2, Hugues Charest 2, Gaston De Serres 2, Guy Boivin 1 1 Centre de recherche en infectiologie, CHUQ-CHUL et Université Laval 2 Institut national de santé publique du Québec

 Le diagnostic précis de l’influenza est important pour: 1.Offrir un traitement approprié 2.Instaurer des mesures de prévention adéquates  Les définitions cliniques souffrent d’un manque de sensibilité et de spécificité et ne peuvent évaluer les infections asymptomatiques Call et al. JAMA Boivin et al. Clin Infect Dis Monto et al. Arch Intern Med Zambon et al. Arch Intern Med 2001

 Les méthodes de laboratoire sont donc complémentaires au diagnostic clinique ◦ RT-PCR est la méthode de choix, mais les faux négatifs peuvent survenir 1-3 ◦ La sérologie peut capter des cas d’infection manqués par RT-PCR 3  Absence de données comparant les méthodes de diagnostic clinique, moléculaire et sérologique pour l’influenza A/H1N pandémique (pH1N1) 1.IDSA Guidelines. Clin Infect Dis Singh et al. J Clin Microbiol Zambon et al. Arch Intern Med 2001

 Comparer la performance de 3 méthodes de diagnostic chez des patients infectés par le pH1N1 et leurs contacts familiaux 1.Diagnostic clinique 2.Diagnostic moléculaire (RT-PCR) 3.Diagnostic sérologique a)Inhibition de l’hémagglutination (IHA) b)Microneutralisation (MN)

 Étude prospective observationnelle évaluant la durée d’excrétion virale et la transmission intrafamiliale du virus pH1N1chez des patients non-hospitalisés et leurs contacts familaux 1 ◦ Mai à juillet 2009 ◦ Ville de Québec  42 familles ◦ 43 cas primaires pH1N1 confirmés ◦ 119 contacts  Suivi clinique prospectif sur 3-4 semaines 1-De Serres et al. Emerg Infect Dis 2010

 Écouvillon nasopharyngée (Nylon Flocked Swab, Copan Innovation) ◦ Sur chaque participant à la visite initiale, au jour 8 et, si encore (+), au jour 11  Milieu de transport: ◦ 3mL de Universal Transport Medium (Copan Innovation)  Extraction ARN: ◦ 200 μl du spécimen (QIAGEN Viral RNA mini kit, QIAGEN)  RT-PCR conventionnel: ◦ Méthode spécifique pH1N1 (gène HA) 1  Sensibilité analytique copies / réaction ◦ Méthode influenza A général (gène M) 2  Sensibilité analytique 2-20 copies / réaction  PCR quantitatif en temps réel (gène M) 3 1-Leblanc et al. J Clin Micro Fouchier et al. J Clin Micro CDC 2005

 Participants ≥ 7 ans seulement ◦ Sérum aigu (visite initiale) ◦ Sérum convalescent (3-4 semaines) ◦ MN et IHA 1  Définition de séroconversion ◦ Sérum aigu < 1:10 et sérum convalescent ≥ 1:40 ou ◦ Augmentation de ≥4 fois du titre entre les deux sérums 1-World Health Organization. WHO Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance. Avec modifications.

 Définition clinique ◦ Syndrome d’allure grippal (SAG) 1  Fièvre (≥ 37.8°C) ou sensation fébrile et  Toux ou mal de gorge 1-Centers for Disease Control

RT-PCR spécifique pH1N1+- RT-PCR Flu A général cas secondaires détectés par RT-PCR 45 / 45 (100%) par RT-PCR influenza A général 42 / 45 (93%) par RT-PCR spécifique pH1N1 *Parmi 119 contacts familiaux de cas primaires avec pH1N1 confirmé

IHA+- MN IHA : 38 / 54 séroconversions (70,3%) MN :53 / 54 séroconversions (98,2%) *116 patients avaient une paire de sérums analysable par MN et IHA

*58 patients RT-PCR(+) avaient une paire de sérums analysable par MN et IHA IHA+- MN Sens. IHA : 35 / 58 = 60,3% (IC95% 46,6% - 72,7%) Sens. MN : 48 / 58 = 82,8% (IC95% 70,1% – 91,0%) MN plus sensible que IHA pour détecter infection pH1N1 chez patients positifs par RT-PCR (p= )

RT-PCR+- MN *118 patients avaient une paire de sérums analysable par MN Concordance entre résultat MN et résultat RT-PCR: 99 / 118 = 83.9% Bon accord entre les deux méthodes (Kappa = 0.68)

SAG pH1N1 (+) pH1N1 (-) Total SENSIBILITÉ (IC 95%) SPÉCIFICITÉ (IC 95%) VPP (IC 95%) VPN (IC 95%) Tous les contacts SAG (+) % (44% - 72%) 95% (87% - 99%) 91% (76% - 98%) 74% (63% - 83%) SAG (-) Total Enfants (≤ 17 ans) SAG (+) % (52% - 90%) 88% (67% - 97%) 85% (62% - 97%) 78% (57% - 91%) SAG (-)62127 Total Adultes (≥ 18 ans) SAG (+)140 47% (29% - 66%) 100% (91% - 100%) 100% (77% - 100%) 72% (59% - 83%) SAG (-) Total *Infection pH1N1 confirmée par RT-PCR et/ou séroconversion Note: 5 infections asymptomatiques, dont 2 identifiées par RT-PCR, 2 par sérologie et 1 par les deux méthodes

 Pas d’association entre les Titres Géométriques Moyens(TGM) convalescents et: ◦ Âge ◦ Statut vaccinal influenza saisonnier ◦ Résultat culture virale ◦ Résultat RT-PCR ◦ Résultat charge virale pH1N1

 MN est plus sensible que IHA pour détecter une infection pH1N1  Bon accord entre résultats MN et RT-PCR ◦ Les deux méthodes sont complémentaires ◦ Permettent la détection d’infections asymptomatiques ou atypiques de pH1N1  SAG pour le diagnostic pH1N1: ◦ Manque de sensibilité ◦ Très bonne spécificité

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