IDENTIFICATION DES COCCI GRAM+

LES COCCI A GRAM+

TAXONOMIE ET CLASSIFICATION Les staphylocoques appartiennent à la famille des micrococcaceae qui comprend quatre genres qui diffèrent par la composition en base de leur ADN G+ C (mol %) - Micrococcus - Staphylococcus Stomatococcus Planococcus

Cocci Gram positif en amas ou diplocoques LES STAPHYLOCOQUES Cocci Gram positif en amas ou diplocoques Aérobie, cultive facilement  colonies blanches ou pigmentées en jaune Genre Staphylococcus : 43 espèces Staphylocoque coagulase positif : S. aureus Staphylocoque coagulase Négatif : nombreuses espèces

Staphylocoque coagulase positif : = Staphylococcus aureus Facilement identifiable par des kits d’agglutination (CF, Proteine A,..) Virulence +++ Sécrétion d ’enzymes (Coagulase libre, liée, DNAse), et de Toxines (entérotoxines, PVL) responsable d’infections communautaires ou nosocomiales

Staphylocoque coagulase négatif : = nombreuses espèces (S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. capitis,…) Beaucoup moins virulent, responsable d’infections nosocomiales Identification biochimique si rôle possible dans une infection

CARACTERES DIFFÉRENTIELS DES PRINCIPALES ESPECES Définition du genre Staphylococcus Coques à Gram positif de taille moyenne, en amas Non exigeants Catalase + AAF Fermentatifs du glucose et du fructose CARACTERES DIFFÉRENTIELS DES PRINCIPALES ESPECES  de Staphylococcus 

A : aéro-anaérobie facultative B : aérobie strict C : micro-aérophiles Type respiratoire (étude avec O2 de l’air) Test : On utilise une gélose VF liquide : on ensemence en spiral avec une pipette pasteur et on refroidit à l’eau froide (puis incuber à 37°C 24h) Résultats : A : aéro-anaérobie facultative B : aérobie strict C : micro-aérophiles D : anaérobie strict AAF

2- Etude des enzymes respiratoires : catalase +oxydase Technique de la recherche du Catalase 2 H2O2 O2 + 2 H2O Catalase - S’il y a effervescence  Cat + - S’il y a absence d’effervescence  Cat - 10

II- Etude du métabolisme glucidique: Voies d’attaques des Glucides Etude effectué sur milieu Hugh et Leifson : milieu semi liquide contenant un indicateur de PH : le Bleu de bromothymol ou le rouge de phénol. -Les bactéries peuvent utilisées le Glucose selon 2 voies: Voie Fermentative : la Réaction se déroulent en absence d’oxygène provoquant une baisse de pH du milieu suite à la formation d’acide Voie Oxydative: l’oxygène de l’air est obligatoirement utilisé , donc il y a peu d’acide formé et l’acidification aura lieu uniquement à la surface 11

- Technique  Germe inactif vis à vis du Glucose Aucun virage dans les 2 tubes  Germe inactif vis à vis du Glucose Le milieu reste tel qu’il était avant ensemencement. Il n’y a pas de culture. Les bactéries sont inertes vis-à-vis du glucose - Technique Virage au jaune débutant dans le tube ouvert Virage de l’indicateur de pH au jaune dans la partie supérieure du tube. Le milieu est devenu acide. Il y a utilisation du glucose par les bactéries en présence d’ O2. Les bactéries sont oxydatives vis-à-vis du glucose. Incubation 48h à 37°C Ouvert Milieu Hugh et Leifson + Glucose Ensemencement Virage de l’indicateur de pH au jaune dans tout le tube. Le milieu est devenu acide. Il y a eu production d’acides lors de l’utilisation du glucose par les bactéries en présence et en absence d’O2. Les bactéries sont fermentatives vis-à-vis du glucose. Virage au jaune dans les 2 tubes Fermé: (+ Huile de paraffine) 12

IV- Recherche de quelques enzymes 1- Recherche de la Coagulase 4 gouttes plasma de lapin oxalaté Incubation au Bain Marie à 37°C de 2 à 24h 4 gouttes de la suspension Coagulase - Coagulase + Suspension bactérienne en Bouillon Cœur Cervelle Exemple: S.epidermis: coagulase – S.aureus: coagulase + 13

2- Recherche de la Désoxyribonucléase : DNASE ADN + H2O Nucléotides et/ou polynucléosides DNASE Absence d’un halot autour de la strie : DNASE - + Hcl sur toute la surface de la boite Staphylococcus epidermis Présence d’un halot clair autour de la strie: DNASE + Incubation 24h à 37°C Staphylococcus aureus 14

Présence d’une hémolysine (lyse hématies) Test : On utilise une gélose au sang, on réalise une strie longitudinale. Résultat : Zone verdâtre autour de la strie : Hémolyse α Auréole claire autour de strie : Hémolyse  Aucune réaction : pas hémolyse

MILIEU CHAPMAN 1. Milieu d’isolement sélectif des bactéries du genre Staphylococcus (coques Gram + regroupés en amas(

une gélose Chapman avec des colonies de Micrococcus, S une gélose Chapman avec des colonies de Micrococcus, S. epidermidis et S. aureus

Milieu Baird parker : pour coagulase positive, il met en évidence la lécithinase et la lipoprotéinase Test : à partir d’une culture de 24h ensemencé les BP par strie (incuber 24h à 37°C) Résultat : -colonie noire : réduction du téllurite en téllure. - halo claire : présence de protéolyse -précipité blanc : hydrolyse des lécithines par lécithinase Les staphylocoques coagulase + sont lécithinase + et protéolyse+