Recherche de la thermonucléase Test d’identification de Staphylococcus aureus
SOMMAIRE 1.But 2.Composition 3.Principe 4.Utilisation 5.Lecture
But La thermonucléase est une enzyme spécifique que seules quelques espèce bactériennes possèdent. Ce test est donc un test d’identification de l’espèce pathogène Staphylococcus aureus. C’est donc un test fondamental pour identifier S.aureus mais il faut compléter ce test d’indentification par d’autres tests : recherche de la protéine A, recherche de la coagulase libre, etc.
Composition du milieu pour la recherche ADN Bleu de toluidine Chlorure de calcium Chlorure de sodium Agar Tampon TRIS pH:9 Ce « milieu » ne permet pas la croissance des bactéries !!!
PRINCIPE Il suffit de mettre la bactérie portée 10 minutes à 100°C en présence du substrat de l’enzyme : l’ADN ainsi que d’un indicateur d’ADN : le bleu de toluidine Si la bactérie possède la thermonucléase : l’enzyme résiste à la chaleur l’enzyme dépolymérise l’ADN en nucléotides ce qui fait virer au rose le bleu de toluidine.
Utilisation Réaliser des puits réguliers Réaliser un repérage des dépôts sur les tranches de la boîte de Pétri Déposer la suspension bactérienne de façon suffisante (ne pas déborder!!!) Dans le cas d’un test de recherche de thermonucléase, test le plus souvent réalisé, il faudra appliquer un traitement thermique à la suspension bactérienne. Incuber 24h, 37°C, NE PAS RETOURNER LA BOITE Lire
FIN bon courage à vous!!!