Phase d’acclimatation Nombre moyen des feuilles Journées Internationales de Biotechnologies (J.I.B 2013), Hammamet du 21 au 24 Décembre 2013 Optimisation de la culture in vitro de méristèmes de figuier (Ficus carica L.) Chokri BAYOUDH1,2*, Rahma LABIDI2, Afifa MAJDOUB1 et Messaoud MARS1,2 1 : Centre Régional des Recherches en Horticulture et Agriculture Biologique de Chatt-Mariem. B.P. 57, 4042 Chatt-Mariem / Tunisie 2 : U.R. Agrobiodiversité, Institut Supérieur Agronomique de Chott-Mariem, IRESA-Université de Sousse/ Tunisie * : chokribayoudh@gmail.com Introduction En Tunisie, la culture du figuier (Ficus carica L.) est très ancienne et son patrimoine génétique est très diversifié. Toutefois, cette richesse se trouve menacée par diverses contraintes biotiques (attaques des ravageurs, maladies, viroses,…), abiotiques (sécheresse, changements climatiques, …) et anthropiques (urbanisation, …). La conservation et la valorisation de cette diversité ainsi que la multiplication des plants de figuier sains et de qualité nécessitent la maitrise des techniques de propagation rapide de cette espèce. De plus, on note en Tunisie l’absence des travaux de recherche en relation avec la mise au point et l’optimisation des protocoles de régénération in vitro du figuier. Ainsi, le présent travail porte sur l’élaboration d’un protocole de micropropagation de plants de figuier de qualité à partir de méristèmes de certaines variétés locales. Objectifs Le présent travail a pour objectifs la maitrise et l’optimisation de la multiplication in vitro du figuier local par culture de méristèmes. Matériel et Méthodes Des méristèmes de tailles comprises entre 0,5 et 1,5 mm ont été prélevés des jeunes pousses de 4 variétés locales, d’importance notable, de figuier: Soltani (SNI), Zidi (ZDI), Bither Abiadh (BA) et Assafri (ASF). Pour chaque étape de la culture in vitro, quatre milieux de culture à base de différentes auxines et de cytokines ont été testés. Ces milieux sont les suivants: Phase d’initiation M1: MS + 0,2 mg/l BAP + 0,1 mg/l Kin + 0,1 mg/l ANA M2: MS + 0,2 mg/l BAP + 0,1 mg/l IPA + 0,1 mg/l ANA M3: MS + 0,2 mg/l BAP + 0,1 mg/l AG3 + 0,1 mg/l ANA M4: MS + 0,2 mg/l BAP + 0,1 mg/l 2,4-D Phase de multiplication M5: MS + 0,5 mg/l BAP + 0,1 mg/l AIB + 0,1 mg/l AG3 M6: MS + 0,5 mg/l BAP + 0,1 mg/l ANA + 0,1 mg/l AG3 M7: MS + 0,5 mg/l Kin + 0,1 mg/l AIB + 0,1 mg/lAG3 M8: MS + 0,5 mg/l Kin + 0,1 mg/l ANA + 0,1 mg/l AG3 Phase d’enracinement M9: MS + 1 mg/l AIB M10: MS + 1 mg/l AN M11: MS1/2 +1 mg/l AIB M12: MS1/2 + 1 mg/l ANA Phase d’acclimatation S1: Terreau de feuilles pur S2: Terreau de feuilles + Perlite Résultats et discussion Effets de la composition hormonale des milieux de culture Etude de la phase d’initiation Etude de la phase de multiplication Tableau 1 : Effets des milieux d’initiation sur l’évolution de méristèmes de figuier Tableau 2 : Effets des milieux de multiplication sur la prolifération des vitroplants Variété Milieu % Nécroses % Cals % Reprise ZDI M1 53,3 ± 3,3 a 39,2 ± 0,8 a 59,2± 12,3 a M2 53,3 ± 12,0 a 77,6 ± 7,2 a 16,7 ± 3,3 a M3 46,7 ± 21,7 a 23,9 ± 3,9 a 61,1 ± 11,1 a M4 75,2 ± 13,1 a 62,2 ± 23,2 a 31,8 ± 16,5 a BA 78,3 ± 11,7 a 38,3 ± 7,3 a 41,7 ± 22,0 a 66,7 ± 17,6 a 58,3 ± 13,6 a 73,3 ± 14,5 a 58,5 ± 11,6 a 31,1 ± 1,1 a 67,8 ± 19,3 a 53,3 ± 18,5 a 40,0 ± 0,0 a 66,7 ± 18,5 a ASF 40,0 ± 11,5 a 40,0 ± 20,0 a 86,7 ± 13,3 a 65,7 ± 22,9 a 81,3 ± 13,5 a 66,3 ± 16,1 a 72,7 ± 8,2 a 37,7 ± 16, 9 a 96,0 ± 4,0 a 61,7 ± 3,3 a 20,4 ± 15,1 a 83,8 ± 11,1 a SNI 5,0 ± 2,67 a 8,7 ± 5,8 a 100,0 ± 0,0 a 0,0 ± 0,0 a 5,7 ± 3,7 a 4,3 ± 3,0 a 90,0 ± 6,54 a 2,2 ± 2,2 a 96,7 ± 3,4 a Variété Milieu Longueur moyenne des plants (mm) Nombre moyen des feuilles Nombre moyen des ramifications ZDI M5 17,0 ± 0,8 a ** 66,9 ± 7,2 ab ** 13,4 ± 1,6 ab ** M6 11,9 ± 1,0 ab ** 92,0 ± 8,8 a ** 16,9 ± 2,0 a ** M7 10,5 ± 2,0 b ** 61,2 ± 13,3 b ** 9,9 ± 1,8 b ** M8 16,3 ± 2,4 a ** 26,7 ± 4,3 c ** 1,9 ± 0,4 c ** BA 9,8 ± 0,8 a 34,3 ± 5,2 a ** 6,8 ± 0,9 a ** 7,8 ± 1,0 a 26,8 ± 5,8 a ** 7,0 ± 1,2 a ** 9,6 ± 1,0 a 8,7 ± 4,8 b ** 3,7 ± 1,0 a ** 5,2 ± 1,7 a 7,4 ± 2,6 b ** 1,4 ± 0,3 a ** ASF 6,9 ± 1,0 a 28,6 ± 4,1 a** 6,7 ± 0,8 a 7,6 ± 1,4 a 28,4 ± 8,3 a** 6,8 ± 1,4 a 4,7 ± 1,3 a 7,7 ± 2,1 b** 1,3 ± 0,6 b 3,7 ± 1,9 a 6,4 ± 3,8 b** 1,5 ± 0,8 b SNI 9,0 ± 1,4 a 48,4 ± 9,2 b ** 9,0 ± 1,2 b ** 9,6 ± 1,7 a 30,6 ± 4,8 b ** 7,2 ± 1,4 b ** 5,9 ± 1,3 a 5,9 ± 3,1 a ** 1,0 ± 0,3 a ** 6,9 ± 2,3 a 10,3 ± 6,4 a ** 1, 7 ± 1,0 a ** M Figure 1: Prélèvement et initiation de méristème de figuier cv. Assafri sur M3 Figure 3:Enracinement des vitroplants de figuier Figure 2:Prolifération des plants de figuier sur M6 La variété ZDI est douée de meilleures potentialités de multiplication et d’évolution sur les 4 milieux M5, M6, M7 et M8. Le milieu M6 est globalement le plus approprié pour la phase de multiplication. La BAP parait plus performante pour la multiplication des plants de figuier que la Kinétine (Tableau 2). Le meilleur taux de survie des méristèmes (100%) est obtenu avec la variété SNI. Pour SNI on a enregistré moins de cals et moins de nécroses. Globalement, le milieu M3 est le plus adéquat pour la phase d’initiation du fait qu’il permet d’avoir des taux de reprise élevés et aussi moins de cals (Tableau 1). Etude de la phase d’enracinement Tableau 3: % d’enracinement des plants sur les milieux d’enracinement Les taux d’enracinement les plus élevés (83.8%) sont enregistrés sur les milieux M10 pour (SNI) et M11 pour (ASF). Pour la majorité des variétés, le milieu M11 à base de MS1/2 et d’AIB a montré les valeurs les plus importantes de longueur moyenne des racines (52,4 mm pour ASF) et du nombre moyen des racines secondaires (11,5 pour ZDI) (Tableau 3). Milieu ZDI BA ASF SNI M9 50 ± 15,1 ab ** 8,3 ± 8,3 b ** 41,7 ± 14,9 a 58,3 ± 14,9 a M10 33,3 ± 14,2 bc ** 16,7 ± 11,2 b ** 50,0 ± 15,1 a 83,3 ± 11,2 a M11 75,0 ± 13,0 a ** 58,3 ± 14,7 a ** 75,0 ± 13,0 a M12 8,3 ± 8,3 c ** 50,0 ± 15,1 a Le taux global de réussite des plants acclimatés sur S1 est de 80,3 %. Celui sur S2 est de 67,6%. Les taux de réussite les plus élevés sur S1 (92,1%) et sur S2 (89,5%) sont enregistrés respectivement pour ZDI et BA. Les plants acclimatés sont transférés à la serre et ne présentent aucune variation somaclonale (Tableau 4). Effets de la composition des substrats d’acclimatation Figure 4: Vitroplants de figuier acclimatés dans la serre Tableau 4: Taux de réussite (en %) de vitroplants acclimatés sur S1 et S2   ZDI BA ASF SNI S1: Terreau de feuilles 92,1 ± 4,4 ** 86,3 ± 4,9 NS 86,0 ± 4,5 ** 67,1 ± 5,4 NS S2: Terreau de feuilles + Perlite 63,1 ± 8,0 ** 89,5 ± 7,2 NS 64,3 ± 3,3 ** 66,2 ± 5,5 NS Conclusion Un protocole fiable de micropropagation rapide de 4 variétés locales de figuier a été mis au point et optimisé. Par cette technique, certaines variétés de figuier on été assainies des virus associés à la mosaïque de figuier (FMD). La stabilité génétique des vitroplants sera vérifiée par des techniques moléculaires.