L’Étude des Microorganismes Microbiologie L’Étude des Microorganismes

Définition d’un Microorganisme Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires

Travailler en Microbiologie La Technique Stérile

Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile Milieu de culture Éprouvettes Assiettes de Pétris Boucle d’ensemencement Etc.

Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes Préviens la contamination de vos cultures Préviens la contamination de votre environnement Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

Transferts par la Technique Stérile Stériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle d’ensemencement

Transferts par la Technique Stérile Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle d’inoculation Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

Transferts par la Technique Stérile Chauffer l’ouverture du tube au bruleur Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Garder l’ouverture du capuchon vers le bas Réchauffement de l’ouverture

Transferts par la Technique Stérile Utiliser la boucle stérile pour retirer l’inoculum Liquide de bouillons Solide de géloses Solide de pentes Retirer l’inoculum

Transferts par la Technique Stérile Chauffer l’ouverture du tube au bruleur encore une fois! Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Réchauffement de l’ouverture

Transferts par la Technique Stérile Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

Transferts par la Technique Stérile Inoculation Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube Retirer capuchon Chauffer l’ouverture Inoculer Fermer le tube

Microorganismes en Laboratoire Les Milieux de Croissance

Buts Croissance sous des conditions contrôlées Maintien Isolation de cultures pures Tests métaboliques

Types Liquides (bouillons) Milieux Solides Permets la culture en suspension Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres Permets la croissance de grands volumes Milieux Solides Mêmes que milieux liquides + agent de solidification L’agar : Polysaccharide dérivé d’une algue

La Croissance en Bouillon Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Turbide Limpide + sédiment

Croissance sur Gélose Croissance sur surface solide Croissance isolée Permets l’isolation de colonies simples Permets l’isolation de cultures pures Colonie simple

Milieux Solides (suite) Pente Croissance en surface et en profondeur Différentes disponibilités d’oxygène Entreposage à long terme Tube profond Milieu semi-solide Entreposage à long terme Faible disponibilité d’oxygène

La Microscopie Les Colorations

Colorations Simples Coloration positive Colorations Négatives Coloration du spécimen Coloration indépendante de l’espèce Colorations Négatives Coloration de l’environnement de fond

Méthodes Coloration simple: Un seul agent de coloration Permet de déterminer la taille, la forme, et l’arrangement des cellules

Les Formes Cellulaires Coccus: Sphères Division sur 1,2 ou 3 plans Nombre de plans de division donne différents arrangements Arrangements typiques de différents genres bactériens

Les Cocci (Coccus) Plans de division Arrangements Diplococcus Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus

Les Formes Cellulaires (suite) Bacilles: Bâtonnets Division sur 1 plan seulement Arrangements typiques de différents genres bactériens

Les Bacilles Plans de division Arrangements Diplobacille Streptobacille

Quantifier les Microorganismes Mesure de turbidité: densité optique Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

Mesure de la Turbidité  Mesure la quantité de lumière qui peut traverser un échantillon Le moins de lumière qui traverse l’échantillon le plus dense est la population Mesure la densité optique ou le pourcentage de transmission

Mesure de la Turbidité Spectrophotomètre (A600): Mesure de la Densité Optique Lumière 600nm Détecteur….lecture Lecture différente

2.0 1.0 D.O. 600nm % Transmission 100 50 Densité cellulaire

Comptes Viables Dilutions en séries de l’échantillon Étalement des dilutions sur milieu approprié Chaque colonie simple est originaire d’une unité formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans l’échantillon

63 UFC/0. 1 ml de 10-5 630 UFC/1. 0 ml de 10-5 630 UFC/ml X 105 = 6 63 UFC/0.1 ml de 10-5 630 UFC/1.0 ml de 10-5 630 UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans l’échantillon original

= Avantages: Limites: Dénombre les microorganismes viables Peu distinguer différents microorganismes Limites: Pas de milieu universel Nécessite la croissance du microorganisme UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus  un de E.coli = ?