Legionella : Norme AFNOR T90-431 (Nov 2014) Julien RICHARD Directeur Scientifique ALPA Mars 2015

Note technique LEGIONELLA Domaine d’application Tous types d’eau 2 domaines bien définis Eaux PROPRES, Eaux chaudes sanitaires Eau destinée à la consommation humaine Eaux minérales naturelles à usage thermal Eaux de piscine et assimilées (spas; …) Note : certaines eaux propres doivent suivre le processus analytique des eaux sales : Si elles contiennent des dépôts amenant une coloration de la membrane Si elles sont NON ou difficilement filtrables. 09/03/15 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Domaine d’application 2 domaines bien définis Eaux SALES, Eaux industrielles Eau de surface Eaux naturelles Eaux d’IRDEFA (Installation de Refroidissement par Dispersion d’Eau dans un Flux d’Air) Mars 2015 Note technique LEGIONELLA 09/10/14 SERMHA/LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Echantillonnage Prélèvement : Diminution du volume d’échantillonnage minimal : au moins 500 ml. Le groupe ALPA reste sur des flacons de 1000ml Logistique : Remise au maximum le lendemain du prélèvement au laboratoire. Ensemencements réalisés le plus rapidement possible et au maximum le lendemain du prélèvement. Si évènement imprévisible possibilité de réaliser les analyses le surlendemain du prélèvement. Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Principe 2 Domaines distincts = 2 Process analytiques différents: Eaux propre : nouveau protocole : ensemencement direct puis concentration sur membrane en esters ou nitrates de cellulose qui est déposée sur milieu GVPC après avoir subi une décontamination in situ par traitement acide Eaux sales : protocole identique à la version de 2006 à l’exception du décrochage des bactérie qui se fait à l’aide d’un vortex. Mars 2015 Note technique LEGIONELLA 09/10/14 SERMHA/LEGIONELLA

Eaux propres 1 litre PUR FILTRATION Ensemencement DIRECT Géloses GVPC sélective PUR 1 litre Étalement de 0,2ml FILTRATION 10ml 100ml Mb Nitrate/ester Cellulose foncée 0.45mm Stopper aspiration Eliminer la dépression Volume suffisant de tampon pH2 +/- 0,2 pour recouvrir la membrane 5 minutes +/- 0,5 min Reprendre aspiration Rincer avec au moins 10 ml d’eau purifiée stérile Dépôt de la membrane sur GVPC

Note technique LEGIONELLA Eaux sales 500 ml Ensemencement DIRECT Géloses GVPC sélective PUR 1/10 CONCENTRATION Filtration Max 2 Membranes polycarbonate 0.45mm Centrifugation Ensemencement DIRECT Traitement ACIDE Concentrât Traitement CHALEUR Traitement CHAL+AC 7 Vortex Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Incubation Incubation 8 à 11 jours à 36+/-2°C avec 3 lectures à partir du 3eme ou 4eme jour. Confirmation Legionella spp : Repiquage sur BCYE sans cystéine et BCYE avec cystéine Incubation à 36°C 2 à 4 jours Identification L. pneumophila : Colonies Non Fluorescentes et agglutination en présence d’Ac Anti-Legionella pneumophila. Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Expression du résultat Exprimer le résultat sous la forme : — Legionella …….. UFC/l — dont Legionella pneumophila .……. UFC/l Commentaire : ……………………. La présence de flore interférente sera systématiquement notée en commentaire même si une numération est possible. Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Expression des résultats Limites de détection : quantifiable dès la première colonie Eaux propres : < 10 UFC/l Eaux sales : < 100 UFC/l Commentaire : Legionella non détectées Limites de quantification Supprimées : Il n’y a plus de seuil de quantification : nombre exploitable (1 ≤ n ≤ 100) Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Expression des résultats Limites de quantification supérieures : Pour les eaux propres en fonction des seuils, les résultats pourront s’exprimer de la façon suivante : Legionella > 1 000 UFC/Litre Dont Legionella pneumophila > 1 000 UFC/Litre Legionella > 10 000 UFC/Litre Dont Legionella pneumophila > 10 000 UFC/Litre Legionella > 750 000 UFC/Litre Dont Legionella pneumophila > 750 000 UFC/Litre Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Résultats provisoires Conditions : Les colonies ont pu être repiquées pour confirmation dès la première lecture Les dénombrements des Legionella et L. pneumophila ont été effectué selon la norme Les résultats sont exprimés selon la norme Impérativement mentionner : « Résultat provisoire issus de colonies confirmées. Seuls les résultats définitifs font foi » Mars 2015 Note technique LEGIONELLA

Note technique LEGIONELLA Rapport d’essai Il doit comporter : Toutes les info nécessaires à l’identification Les résultats et commentaires conformes à la norme Tout détail opératoire non prévu à la norme ainsi que les incidents susceptibles d’avoir agi sur le résultat La référence à la norme Si connues toutes les info relatives au prélèvement et aux traitements éventuels appliqués sur l’eau analysée Mars 2015 Note technique LEGIONELLA